唾液学检测技术在健康管理中应用

樊福好

唾液（saliva）俗称口水（oral fluid），是指由位于口腔内的腺体分泌的、包含多种活性酶、电解质和抗体、抗原在内的混合物，其中水分含量占99%以上。随着机体生理状态的改变，唾液的成分、浓度和黏度等变化往往较大。

研究唾液的组成、功能以及唾液状态改变规律的学科称为唾液学（Salivology）。

1 唾液的主要作用

1.1 预消化作用

唾液中含有多种消化酶（如唾液淀粉酶、葡萄糖酶），可以对进入口腔内的食物进行初步消化，减轻胃肠道的消化负荷，为胃肠道的消化做好准备。

1.2 对细菌和病毒的选择性消灭作用

在机体处于正常生理机能的情况下，唾液将对进入口腔内的细菌和病毒进行甄别并选择性杀灭（如艾滋病病毒、溶血性链球菌、伤寒杆菌、大肠杆菌及葡萄球菌），唾液是机体防护的重要防线。

1.3 唾液可以有效地消除霉菌毒素和农药残留

1）唾液中的过氧化氢醇等酶类可以对进入口腔内的真菌毒素（如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素）进行瞬间降解和清除。

2）唾液可以降解某些农用药物在食物和饲料中的残留。

3）唾液可以消除机体产生的超氧自由基、亚硝基化合物、黄曲霉素和苯并芘，具备较好的抗癌作用。俗谚有云：“日咽口水三百口，保你活到九十九。”

1.4 唾液可以促进伤口愈合

唾液中的表皮生长因子、神经生长因子等可以促进伤口愈合，采集动物的唾液制成冻干品具有重要的医学价值，具备巨大的商业前景。

1.5 唾液参与抗体的大循环

动物机体对病原的抵抗主要通过免疫学反应进行，进入机体的病原刺激机体产生的抗体在体内的循环主要有两个途径：大循环和小循环。

小循环是指抗体在血液中循环，大循环是指抗体在血液和唾液之间循环，故此，体内的抗体分为两种：小循环抗体、大循环抗体。

小循环抗体主要参与机体的免疫记忆反应，免疫保护活性较弱，甚至会产生对机体有害的反应（如登革热的糖蛋白抗体、蓝耳病的糖蛋白抗体和核蛋白抗体）。

大循环抗体主要参与机体的免疫保护反应，也是重要的免疫保护机制产生的基础，具备重要的生物防御意义（如环状病毒膜蛋白抗体和猪瘟E2蛋白抗体）。

据此，可以推断能够产生大循环抗体的疫苗才是优秀的生物制品（如我国的C株猪瘟苗），而目前的蓝耳苗、伪狂犬疫苗、禽流感灭活疫苗、口蹄疫灭活疫苗等均不能产生有效的大循环抗体，免疫效果较差。

2 唾液是判断机体健康状态的重要样本

目前，唾液中发现了至少600种以上的活性酶类，这些酶可以作为判断机体健康状态的重要指标。其中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、唾液淀粉酶等均可作为机体活性的指示酶类。唾液检测的项目包括电解质、激素、药物、抗体、抗原和感染因子等。

对猪群的研究发现，用PCR方法检测唾液中的环状病毒，检出率高出血清学方法300%以上，检测猪群唾液中的猪瘟抗体和环状病毒（圆环病毒）抗体具有明显的优势，CV%值较小，检测结果稳定（见表1、表2）。

机体活度（Activity）是评价机体对外界环境缓冲能力的重要指标，其数值范围在0.0～1.0之间。活度越高，机体越健康；活度越低，机体越容易生病。对某保育、生长猪群的活度检测结果（见表3、表4）。

3 唾液学检测

3.1 机体活度（Activity）检测

唾液是机体口腔内腺体（腮腺、颌下腺和舌下腺）分泌的重要液体，其成分随着机体健康状态的改变而改变，尤其是唾液中酶的量和酶活性是机体活力状态改变的重要指针，测定唾液中酶的活性具有重要的临床指导意义。

唾液中酶的活性受到唾液分泌量的影响而变动较大，加之酶的活性还受到唾液pH值、唾液中矿物质及食物残渣的影响而不断波动，所以测定唾液中的酶活性具有很强的不确定性。通过配制特殊的颜色反应液选择性作用于唾液中的特异性酶，通过颜色改变来确定酶活性，实现酶活性测试的数量化具有重要的实践意义。

本试剂盒中含有唾液中几种重要酶（溶菌酶、唾液淀粉酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽还原酶等）作用的相应底物，底物产生的分解物使特定组合的色原物质发生颜色的改变，通过测定光密度值来确定唾液中酶的总活性，以此标示机体的活性状态（活度）。

本试剂盒中含有阳性对照（0.5mL）、阴性对照（0.5mL）、反应液A（1mL）、反应液B（20mL），微孔反应板（96孔，可拆卸）1块。所有试剂置于4℃冷藏、避光保存。有效期180d。所有试剂禁止接触皮肤、眼睛等部位，建议戴保护手套进行实验操作。

1）唾液的准备：停止采食和饮水6h以上（或过夜），采用专用的唾液采集袋（见图1）收集人或动物的唾液1mL左右，1万r/min，离心1min，上清备用（冷冻）。检测时，样本需室温条件下回温30min。

2）反应板的准备：根据样本的数量，取微孔反应板1块或若干条。

3）加样：第1、2孔加入阴性对照液10μL；第3、4孔加入阳性对照液10μL；其余各孔分别加入唾液样本10μL。

4）在上述每孔中（阴性对照、阳性对照、样品）分别加入反应液A10μL、反应液B180μL（反应孔内溶液最终体积200μL）。

5）读板：加入反应液B10min时立即采用630nm滤光片读取微孔反应板各孔的OD值。

6）判断：阴性对照小于0.05，阳性对照大于0.9，则反应成立。（样本OD值减去阴性对照OD值作为机体的活度值，阴性孔的OD值较小时，可以忽略不计。活度=OD_s-OD_N（为计算方便，当阴性对照值较小时，可以直接用样本OD值代表寒度值）。

7）生理意义：机体的活度值越高，活性越高，机体抵抗力强，疾病后恢复较快。若活度值小于0.4，则机体抵抗力弱，疾病后恢复较慢。

8）眼观判断：深蓝色：抵抗力强；浅蓝色：抵抗力弱。

3.2 机体寒度（Cold）检测

本试剂盒中含有唾液中几种重要酶（溶菌酶、唾液淀粉酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽还原酶等）作用的相应底物，底物产生的分解物使特定组合的色原物质发生颜色的改变，通过颜色改变来确定机体的体质。通过配制特殊的颜色反应液选择性作用于唾液中的特异性酶，通过颜色改变来确定酶活性，而其中某些酶的活性与机体的体质有直接的关系。

本试剂盒中含有阳性对照（0.5mL）、阴性对照（0.5mL）、反应液A（1mL），反应液B（20mL），微孔反应板1块（96孔，可拆卸）。所有试剂置于4℃冷藏、避光保存。有效期180d。所有试剂禁止接触皮肤、眼睛等部位，建议戴保护手套进行实验操作。

1）唾液的准备：停止采食和饮水6h以上（或：过夜），采用专用的唾液采集袋收集人或动物的唾液1mL左右，1万r/min，离心1min，上清备用（冷冻）。检测时，样本需室温条件下回温30min。

2）反应板的准备：根据样本的数量，取微孔反应板1块或若干条。

3）加样：第1、2孔加入阴性对照液10μL；第3、4孔加入阳性对照液10μL；其余各孔分别加入唾液样本10μL。

4）在上述每孔中（阴性对照、阳性对照、样品）分别加入反应液A10μL、反应液B180μL（反应孔内溶液最终体积200μL）。

5）读板：加入反应液B10min时立即采用630nm滤光片读取微孔反应板各孔的OD值。

6）判断：阴性对照小于0.05，阳性对照大于0.9，则反应成立。以样本OD值减去阴性对照OD值作为机体的寒度值。寒度=OD_s-OD_N（为计算方便，当阴性对照值较小时，可以直接用样本OD值代表寒度值）。

7）生理意义：机体的寒度值越高，寒性越高，机体呈寒凉体质。若寒度值小于0.4，则机体呈温热体质。处于寒凉体质的机体，不能使用寒凉药物；处于温热体质的机体，不得使用温热药物。

8）热性体质：0.0～0.2；温性体质：0.2～0.4；中性体质：0.4～0.6；凉性体质：0.6～0.8；热性体寒：大于0.8。

9）眼观判断：深蓝色：寒凉体质；浅蓝色或无色：温热体质。

（编辑：赵晓松）