影响生鲜乳中β-内酰胺酶检测结果的因素探讨

田西学，李　胜，李　宏，李会玲，杨汉卿，贾　青，赵彩会，田　间，李　洁，雒亚璇

(陕西省饲料监测所，陕西 西安710016)

影响生鲜乳中β-内酰胺酶检测结果的因素探讨

田西学，李胜，李宏，李会玲，杨汉卿，贾青，赵彩会，田间，李洁，雒亚璇

(陕西省饲料监测所，陕西 西安710016)

摘要：生鲜乳质量安全关系人身健康，我国农业部将β-内酰胺酶等6种物质列入生鲜乳中的非法添加物，明令禁止并通告全国。为了探讨影响生鲜乳中β-内酰胺酶检测结果的因素，我们在省内奶畜养殖较为密集的泾阳、富平、临潼、大荔等地开展了生鲜乳中β-内酰胺酶特别监督抽检。结果表明：在奶价持续走低，高密度监测、严管、严查、严打的情况下，生鲜乳中人为添加β-内酰胺酶的可能性不大，生鲜乳中β-内酰胺酶的来源主要与奶畜个体健康状况、饲养管理水平、养殖环境卫生与饮水等因素有关。

关键词：生鲜乳 ； β-内酰胺酶检测结果；影响因素

β-内酰胺酶是一种青霉素钾或青霉素钠的酶，是β-内酰胺类抗生素的分解剂、解抗剂或隐蔽剂，俗称金玉兰酶剂。β-内酰胺酶的提取物主要来自于霉菌的代谢产物，其本身是一种丝氨酸蛋白酶的衍生物，属于蛋白质多肽。固态时呈白色粉末、液态呈浅黄色或微黄色。关于生鲜乳中β-内酰胺酶的来源，国内外一些报道认为：生鲜乳中的β-内酰胺酶的来源有两种，一种是内源性的即由奶牛体内的耐用菌株为排斥抗生素而产生的。另一种是外源性人为添加的。即不法分子为了降解生鲜乳中残留的抗生素逃避检测而通过外源性添加到生鲜乳中去。

由于β-内酰胺酶具有分解β-内酰胺类抗生素的作用，在抗生素乳中加入β-内酰胺酶后，乳中抗生素作为抗原与β-内酰胺酶活性中心成分结合，产生竞争性抑制，使抗生素作为抗原暂时失活，当利用抗生素检测卡检测牛奶中抗生素时，呈阴性检出，即检测不出抗生素，但将加有β-内酰胺酶的抗生素乳进行乳酸菌接种试验时，其抗抑菌效果依然存在。这说明β-内酰胺酶并不能使乳中抗生素完全失活，只是不法分子为了规避抗生素检测而采取的一种规避手段。

我国农业部将β-内酰胺酶列入牛奶违禁添加物明令禁止，并以公告形式发布全国。各地奶业管理部门要加强监管，严厉打击，形成高压态势。为了探讨影响生鲜乳中β-内酰胺酶检测结果的因素，我们在我省奶畜养殖密集区开展了β-内酰胺酶特别监督抽检工作。

1抽检范围

根据我省奶业生产实际，由省饲料监测所统一组织技术培训、技术指导并提供检测所需设备及耗材，选择我省奶畜养殖较为密集的泾阳、临潼、富平、大荔等四县作为生鲜乳中β-内酰胺酶监测特别监督抽查点。

2方案与方法

2.1摸底监测

以泾阳、临潼、富平、大荔四县的生鲜乳收购站为具体监测点，以收购站奶罐中的混合乳为监测对象，由各县奶业监管部门具体负责并实施监测工作，每天监测一次，连续跟踪监测15～20 d，并对检测结果进行统计汇总。

2.2筛查监测

即乳头奶监测，由各县奶业监管部门在辖区内选择2个条件较好的健康奶牛养殖场，每场选择5头健康产奶奶牛，连续5 d监测同一头奶牛乳头奶中的β-内酰胺酶情况，并进行统计汇总。

2.3技术跟进与指导

筛查监测期间，省所组织了技术力量开展检测前的技术培训与熟化，在检测过程中，派出技术人员进行现场技术跟进和现场技术指导，解决技术难点和检测过程中出现的各种问题，以保证检测数据的准确性。

2.4跟踪调查

检测期间，及时汇总各个检测点上反馈的检测结果，积极组织技术人员深入奶牛养殖场户,针对生鲜乳中的β-内酰胺酶检出情况，开展调查工作，寻找β-内酰胺酶的影响因素。

3抽检与调查结果

3.1摸底监测结果

此次摸底监测，共检测生鲜乳收购站321个，监测生鲜乳样品4118批次，检出β-内酰胺酶阳性样品20批次，检出率为0.46%。经过对20批次β-内酰胺酶阳性样品(采用杯碟法)进行确证后，20批次样品均含有β-内酰胺酶。

3.2筛查结果

持续监测8个养殖环境较好的奶牛养殖场的40头健康奶牛的乳头奶，监测乳头奶样品200批次，全部采用现场检测，结果全部呈现阴性，即未检出β-内酰胺酶。

3.3跟踪调查结果

根据β-内酰胺酶阳性样品，我们深入奶牛养殖场户,采取现场座谈、提问、实际查看饲喂现场和走访群众等方式进行实际调研，并对一些群众观点和认识，采取了逐一核实和现场采样检测的方法进行印证，通过以上细致工作，我们认为影响生鲜乳中β-内酰胺酶检测结果的因素有以下几个方面：

3.3.1有病个体或长期不干净饮水乳头奶监测结果表明：连续5 d测定利用人工挤奶方法从健康个体奶牛乳头上挤出的牛奶进行β-内先胺酶检测，均未检出β-内先胺酶；但有病牛或不健康的奶牛所产的牛奶均被检出β-内先胺酶。除此之外，调查还发现，给奶牛长期饮用不干净或高温环境放置时间较长的自来水，牛奶中也会检出β-内先胺酶。这些现象表明：生鲜乳中β-内酰胺酶的来源，不仅与奶牛个体健康与否有关，还与饲养管理条件及饮水卫生有关。

3.3.2乳的种类及新鲜程度生鲜乳具有生物活性，产生β内酰胺酶是生鲜乳内生物菌群的一种自我机能反应。刚挤出健康奶牛个体所产生的生鲜乳β内酰胺酶监测呈阴性，当储存不当、放置时间过长或冷冻时间过长，同样会被检出β内酰胺酶。我们将β内酰胺酶阴性样品冷藏到4℃冰箱中3 d后，取出解冻后进行β内酰胺酶检测，结果被检出阳性；将新鲜的β内酰胺酶阴性样品自然放置2 d后进行检测，结果也呈阳性。这说明β-内酰胺酶检测结果与生鲜乳的新鲜程度有关。

3.3.3检测卡的选择性与差异性不同的β-内酰胺酶检测卡，对乳的种类有着明显的选择性，用前要进行技术评价。用维德维康的β内酰胺酶检测卡，对牛奶和羊奶的添加样进行β内酰胺酶检测试验，结果β内酰胺酶检测卡对牛奶非常敏感，对羊奶的敏感程度不如牛奶，因而出现个别假阳性。另外，使用相同批次的阳性样品和阴性样品，对两家公司的β内酰胺酶检测卡进行评价时，其测试结果的阳性差异率与阴性差异率也相差较大。

3.3.4环境温度与检测卡的稳定性试验用同一β内酰胺酶的阳性牛奶，用相同的检测卡在高温和低温环境下进行检测，结果阳性重合率只有80%。这说明β内酰胺酶检测卡的稳定性受检测环境温度影响较大。使用同一β内酰胺酶的阳性和阴性牛奶，对北京尤尼赛斯科技有限公司、北京维德维康科技有限公司、深圳绿诗源有限公司的检测卡进行比较试验，结果表明：不同的检测卡，在相同条件下，其检测结果的阳性重合率与阴性重合率也存在不同程度的差异。因此，使用检测卡时，要先进行技术评价和环境温度测评，保证环境温度符合检测要求。

3.3.5采样工具的卫生洁净程度生鲜乳样品采集时，所用的采样瓶的卫生洁净程度，对β内酰胺酶检测结果同样会产生影响。用污染或不干净的采样瓶，采集健康奶牛的乳头奶，有时也会出现β内酰胺酶阳性结果，这主要是因为污染或不干净的采样瓶有某些结构类似β内酰胺酶的抗原物质，会导致β内酰胺酶被检出。

3.3.6一些治疗奶牛乳房炎的抗菌药物调查中，据用户反映，一些标注“无抗”用于治疗奶牛乳房炎的抗菌药物直接注射进奶牛乳房后，奶牛所产的牛奶会被检出β内酰胺酶，在现场进行试验时，将这些“无抗”药滴加到阴性样品中进行β内酰胺酶检测时，样品均呈阳性。另外，用户还反映，含“无抗”药物的牛奶，药效持续时间较长，残留在管道中清洗3次后，奶样仍会检出β内酰胺酶。

4结论与建议

根据这次生鲜乳中β内酰胺酶的特别监督抽查结果，我们认为目前在奶价持续走低，高密度监测、严管、严查、严打的情况下，人为添加的可能性不大，而影响生鲜乳中β-内酰胺酶检测结果的主要因素与奶畜个体健康状况、饲养管理水平、养殖卫生环境及饮水等有关。为了避免或减少生鲜乳中β-内酰胺酶的污染情况，切实提高我省生鲜乳质量安全水平，特作如下建议。

4.1要积极倡导“健康养殖理念”

努力提高饲养管理水平，降低奶畜疾病发生风险，要加强科学养殖技术、技术规范、技术方法方面

的培训和指导，积极倡导“健康养殖理念”，大力推进科学养殖实用技术的普及、引导和推广，杜绝养殖环节违禁兽药、添加剂的添加和使用现象，努力改善奶畜养殖及饮水的卫生环境，不断提高奶畜饲养管理水平，降低奶畜疾病发生风险。要加强对有病奶畜的登记和分群管理，防止有病奶畜乳、休药期乳、有抗酸败奶流入市场，努力提升奶源生鲜乳质量安全水平。

4.2要加快奶站化验室条件与能力建设

增强违禁添加物的预防与控制能力，要通过宣传引导、法律规范、项目资金和财政资金支持，加快奶站化验室条件建设与检测能力建设。重点加强奶站检测仪器设备建设和奶站检测人员检测技术能力建设。快速提升奶站化验室的快速检测技术水平。

4.3持续开展生鲜乳中β内酰胺酶等违禁物质的抽检

加强跟踪摸排与溯源工作，我国农业部将β-内酰胺酶列入牛奶违禁添加物并以公告形式发布全国。严厉打击违法添加行，一经发现，及时移送司法机关进行追查，发现一起，查处一起，绝不手软。各地奶业监管部门要持续开展生鲜乳中β内酰胺酶等违禁物质抽检与跟踪监测，形成严管、严打之势，确保生鲜乳质量安全。

4.4加强“无抗”类药物成份的分析和研究

进一步查明乳中“β内酰胺酶”是否与“无抗”类药物有关,根据调查和用户反映，“无抗”类药物有可能会引起生鲜乳中β内酰胺酶检出，建议开展“无抗”类药物成份分析和研究，进一步查明乳中“β内酰胺酶”是否与“无抗”类药物有关。

4.5要加大技术培训

不断提高生鲜乳质量安全检测技术水平,β内酰胺酶快速检测技术经过培训全省现已基本掌握，但在实际检测过程中，还有很多问题需要注意，如乳的种类、乳的新鲜程度、β-内先胺酶检测的稳定性、采样工具的洁净程度等诸多因素都会影响到检测结果的准确性。因此，要不断地学习、交流和总结，努力提升检测队伍的技术水平。

[收稿日期]2015-10-18

[作者简介]田西学(1959-)，男，陕西富平人,本科，研究员，主要从事畜牧技术推广和饲料与生鲜乳质量安全监测与管理工作。

[中图分类号]TS 252

[文献标识码]A

[文章编号]1004-6704(2016)02-0064-02