首乌藤不同部位有效成分含量考察

廖 力，黄 倩，陈胜利，廖光星,林 冰,2*

(1.贵州大学 药学院，贵州 贵阳550025；2.贵州省药食同源植物资源开发工程技术研究中心，贵州 贵阳550025；3.贵州七合生物科技有限公司，贵州 贵阳550081；4.湄潭七合种植专业合作社，贵州 湄潭564100)

首乌藤不同部位有效成分含量考察

廖 力1，黄 倩1，陈胜利3，廖光星4,林 冰1,2*

(1.贵州大学 药学院，贵州 贵阳550025；2.贵州省药食同源植物资源开发工程技术研究中心，贵州 贵阳550025；3.贵州七合生物科技有限公司，贵州 贵阳550081；4.湄潭七合种植专业合作社，贵州 湄潭564100)

目的：考察并比较首乌藤嫩、中、老枝不同部位中主要有效成分二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量。方法:采用加热回流提取法制备供试品，采用高效液相色谱法测定首乌藤中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量。结果：首乌藤嫩、中、老枝中二苯乙烯苷含量分别为0.016、0.147和0.516 %，大黄素含量分别为0.112、0.116、0.235 mg/g，大黄素甲醚的含量分别为0.299、0.584、0.747 mg/g。结论：首乌藤不同部位中二苯乙烯苷、大黄素及大黄素甲醚含量有明显差异，老枝中的含量大于中枝与嫩枝。三种成分在首乌藤不同部位含量变化趋势一致。采收时应注意保留老、中枝部分。

首乌藤；二苯乙烯苷；大黄素；大黄素甲醚

首乌藤(CaulisPolygoniMultiflori)为蓼科植物何首乌(PolygonummultiflorumThunb)的藤茎，性味甘，平，归心，肝经。具有养血安神，祛风通络等功效，用于失眠多梦，血虚身痛风湿痹痛，皮肤瘙痒等症，并广泛分布于河南，贵州，湖南，湖北等地[1]，是一种民间的常用药。首乌藤主要化学成分为大黄素、大黄素甲醚、二苯乙烯苷等。长期以来，大黄素被传统中医认为具有泻下的作用，现认为还有改善睡眠[2]，抗菌消炎[3]、抗肿瘤[4]、免疫抑制[5,6]、抗肾纤维化[7]等药理作用。根据 2005年版《中国药典》一部“夜宁糖浆”的处方改制而成﹝批准文号: 南制字(2011)F16006﹞，其处方由合欢皮，灵芝，首乌藤等7味中药组成的养血安神胶囊，具有养心安神的功效，其中首乌藤原药材质量直接影响成品中大黄素的含量[8]。2015年版《中华人民共和国药典》中首乌藤的采收方法为“秋冬二季采割，除去残叶，捆成或趁鲜切断，干燥。”但并未明确规定首乌藤采收部位，实际生产中有的采收较嫩枝的部位[9]，老枝嫩枝弃之；有的采取嫩老枝混用的方法处理，造成了首乌藤质量不稳定的状况。因此，通过高效液相色谱法测定首乌藤不同部位中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量，能为首乌藤明确规定采收部位提供依据，有利于保证其药物制剂成品中有效成分的规定限量，提高首乌藤的利用率。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 仪器试剂

Agilent Technologies 1220型自动进样高效液相色谱仪(DAD检测器及配套色谱工作站) ，色谱柱ZORBA SB-C18(150 nm×4.6 mm,5 μm)，FA2004分析天平(上海良平仪器仪表有限公司) ，电热恒温鼓风干燥箱DGG-9246A(上海齐欣科学仪器有限公司)，电子调温电热套98-1-B型(天津市泰斯特仪器有限公司)。乙腈，甲醇为色谱纯( Fisher 公司) ，其他试剂均为分析纯; 2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷( 批号: 1501123) 对照品购于中国药品生物制品检定所，大黄素(批号：TB20150421)对照品，大黄素甲醚(TB20150306)对照品购于西安天宝生物科技有限公司。

1.1.2 实验药材

首乌藤新鲜样品采自贵州省湄潭县何首乌生产基地，经贵州大学生命科学学院熊源新老师鉴定为蓼科植物何首乌(PolygonummultiflorumThunb.)藤茎首乌藤(CaulisPolygoniMultiflori.)。由地上部分到何首乌根部全株采收。

1.2 方法

1.2.1 药材处理

选取长约为150 cm的首乌藤，将其分为嫩、中、老枝三部分。其中最顶端约长30 cm、直径2 mm以下的为嫩枝；中间部位长约70 cm、直径2～3 mm之间为中枝；末端长约50 cm、直径3 mm以上的为老枝；长约为150 cm的首乌藤整株切段混合为嫩、中、老枝三种部位混合样品，将嫩、中、老枝三部分及混合样品置于50℃热风干燥箱中烘干，粉碎成粗末备用。

1.2.2 首乌藤不同部位二苯乙烯苷含量测定方法

1.2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取二苯乙烯苷对照品适量, 置棕色量瓶中, 加稀乙醇配制成每1 mL 含60 μg的溶液，置10℃以下保存，即得。

1.2.2.2 供试品溶液的制备

分别取首乌藤嫩、中、老三种部位样品及混合样粉末约2 g，精密称定，置250 mL具塞锥形瓶中，精密加稀乙醇100 mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，上清夜滤过，即得。

1.2.2.3 色谱条件

参照2015年版《中华人民共和国药典》中测定首乌藤中二苯乙烯苷的高效液相色谱法。色谱柱 流动相:乙腈-水(26:74)，检测波长:320 nm，流速:1.0 mL/min,柱温:25℃，进样量:10 μL。

1.2.3 首乌藤不同部位大黄素及大黄素甲醚含量测定

1.2.3.1 对照品溶液的制备

分别精密称取大黄素，大黄素甲醚对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇配制成每1 mL 含大黄素102 μg，大黄素甲醚76 μg的溶液，置10℃以下保存，即得。

1.2.3.2 供试品溶液的制备

1.2.3.3 色谱条件

参照2015年版《中华人民共和国药典》中测定何首乌中大黄素和大黄素甲醚的高效液相色谱法。色谱柱 流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)，检测波长：254 nm，流速:1.0 mL/min，柱温:25℃，进样量:10 μL。

2 结果与分析

2.1 首乌藤不同部位二苯乙烯苷含量测定结果

2.1.1 线性关系的考察

取二苯乙烯苷对照品溶液(60 μg/mL)，分别进样2，4，6，8，10 μL，测定进样量峰面积，以对照品峰面积积分值Y为纵坐标，以进样量X(μg)为横坐标进行线性回归，得回归方程为: Y=4482.5X-22.48，R2=0.99079，表明二苯乙烯苷在0.1～0.6 μg之间呈现良好的线性关系。

2.1.2 样品含量测定

按1.2.2.2项供试品溶液的制备方法，精密吸取10 μL供试品溶液进样，测定二苯乙烯苷含量，每份3次，取平均值。HPLC图见图1，结果见表1。

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图1 首乌藤二苯乙烯苷HPLC图Fig.1 HPLC scanning profiles of THSG of Caulis Polygoni Multiflori

表1 样品中二苯乙烯苷含量测定结果(，n= 3)Tab．1 results of determination of THSG in the sample(，n= 3)

由表1可知，首乌藤嫩、中、老枝中二苯乙烯苷含量差异明显，尤其是老枝的二苯乙烯苷含量远大于嫩枝的二苯乙烯苷含量，老枝和中枝的差异较小。随着首乌藤从老茎部位向嫩茎部位延伸，其中二苯乙烯苷的含量呈逐渐降低趋势，即老枝>中枝>嫩枝。混合样中二苯乙烯苷含量比中枝，嫩枝的大，但小于老枝的二苯乙烯苷含量。

2.2 首乌藤不同部位大黄素及大黄素甲醚含量测定结果

2.2.1 线性关系考察

取大黄素对照品溶液(102 μg/mL)和大黄素甲醚(76 μg/mL)对照品，分别进样2，4，6，8，10 μL，测定进样量峰面积，以对照品峰面积Y值为纵坐标，以进样量X(μg)为横坐标进行线性回归，得回归方程为: Y=2102.1X-49，R2=0.98338，Y=1123.4X-28.71，R2=0.98533表明大黄素在0.204～1.02 μg，大黄素甲醚在0.152～0.76 μg之间呈现良好的线性关系。

2.2.2 样品含量测定

按1.2.3.2项供试品溶液的制备方法，精密吸取10μL供试品溶液进样，测定大黄素和大黄素甲醚含量，每份3次，取平均值。HPLC图见图2，结果见表2。

图2 首乌藤大黄素与大黄素甲醚HPLC图Fig.2 HPLC scanning profiles ofemodin and emodin-3-methyl ether of Caulis Polygoni Multiflori.

表2 样品中大黄素和大黄素甲醚含量测定结果 (，n= 3)Tab．2 results of determination of emodin and emodin-3- methyl ether in the sample(，n= 3)

由表2可知，首乌藤嫩枝和中枝的大黄素含量差异较小，老枝大黄素含量约是中枝与嫩枝的2倍，随着首乌藤从老茎部位向嫩茎部位延伸，其中大黄素和大黄素甲醚的含量呈逐渐降低趋势，即老枝>中枝>嫩枝，其趋势与首乌藤中二苯乙烯苷含量变化趋势一致。混合样与嫩枝、中枝大黄素含量差异不明显，含量都在0.1 mg/g左右。混合样中大黄素甲醚的含量介于中枝与老枝之间，其关系为老枝>混合样>中枝>嫩枝。

3 结论与讨论

(1)结果表明，首乌藤不同部位的二苯乙烯苷含量有明显差异，首乌藤老枝含量的最高值0.516 %，嫩枝含量最低为0.016 %，两者相差约30倍。首乌藤老枝二苯乙烯苷含量高出中枝约4倍。首乌藤老枝二苯乙烯苷含量为0.516 %，符合药典规定限量，中枝二苯乙烯苷含量0.147 %，略小于药典限量的0.2 %，而嫩枝只有0.016 %，低于药典限量约10倍，不符合药典规定限量。故在原药材的采收过程中，应尽量保留首乌藤老、中枝部位。

(2)2015年版《中华人民共和国药典》中记载首乌藤可用于“失眠多梦”。有文献报道[2]大黄有一定的促睡眠作用。李智欣等人[10]按照国标(改善睡眠功能检验标准)方法，亦证实了首乌藤中的蒽醌类成分对缩短巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期具有促进作用，表现出一定的改善睡眠的功效。首乌藤中的蒽醌类[11]成分主要为大黄素及大黄素甲醚。本实验结果表明，首乌藤不同部位中大黄素的含量差异较小(相差约2倍)，但首乌藤老枝部位依然比中枝、嫩枝的高。故在首乌藤的采收中，应注意保留中、老枝部分。

(3)首乌藤各部位中大黄素甲醚的含量比大黄素的含量高，且其含量呈老枝>中枝>嫩枝关系。童研[12]等采用小鼠强迫游泳和小鼠悬尾模型动物应激模型考察了大黄素甲醚抗抑郁的作用，结果显示大黄素甲醚能够降低小鼠的悬尾不动时间，缩短小鼠强迫游泳实验的不动时间，表明大黄素甲醚对动物有一定的抗抑郁作用。《中国药典》2015版中记载首乌藤具有“养血安神”的功能。提示首乌藤养心安神作用可能与其含有的大黄素甲醚有关，故在实际的采收过程中应尽量保留老、中枝部位。

(4)混合样中二苯乙烯苷含量符合药典规定，仍低于老枝中二苯乙烯苷的含量。《中国药典》2015版虽未对首乌藤中大黄素和大黄素甲醚的含量进行含量限定，但作为其主要有效成分指标，混合样中大黄素和大黄素甲醚含量均比老枝中的低，首乌藤嫩、中、老枝、中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚含量均有差异。老枝中二苯乙烯苷的含量高于药典规定，中、嫩枝中低于药典规定，而混合样的二苯乙烯苷含量均高于嫩，中枝的二苯乙烯苷含量，但远小于老枝中二苯乙烯苷的含量，故为保证首乌藤的质量符合标准，在其采收过程中，更应保留老、中枝部位。

(5)本实验只测定并比较了同一产地来源的首乌藤嫩、中、老枝的主要有效成分含量，并未对不同产地首乌藤不同部位二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚含量进行测定比较。由于不同产地首乌藤中大黄素的含量有显著差异[13]。对于其他产地首乌藤不同部位有效成分含量是否符合这一趋势，需要进一步研究。

通过实验研究测得了首乌藤嫩、中、老枝部位及混合样中二苯乙烯苷，大黄素，大黄素甲醚的含量，并比较首乌藤不同部位与其有效成分含量之间的关系。以二苯乙烯苷为质量指标，只有首乌藤老枝，混合样符合药典规定限量，嫩枝，中枝部位均低于药典规定限量。随着首乌藤由嫩茎部位向老茎部位延伸，其中二苯乙烯苷，大黄素和大黄素甲醚的含量呈逐渐升高趋势。因而在实际的采收过程中应重视老、中枝的利用，保证首乌藤符合质量标准。

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Study of effective components in different parts ofCaulisPolygoniMultiflori

LIAOLi1,HUANGQian1,CHENSheng-li3,LIAOGuang-xing4,LINBing1,2*

1.CollegeofpharmacyinGuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025,China; 2.ThedevelopmenttechnologyresearchcenterofmedicinalandedibleplantresourcesinGuizhouProvince,Guiyang,Guizhou550025,China; 3.QihebiologicaltechnologycompanyinGuizhou,Guiyang,Guizhou550081,China; 4.QiHecooperativeinMeitan,Meitan,Guizhou564100,China)

To study and compare contents of active ingredientsin different parts ofCaulisPolygoniMultiflori, include 2,3,5,4，-tetrahydroxy stilbene-2-O- β-D-glucoside(THSG),emodin and emodin-3-methyl ether. Heating reflux extraction and preparation method was adopted for the test. Contents of THSG, emodin and emodin-3-methyl ether inCaulisPolygoniMultifloriwasdetermined by high performance liquid chromatography. Results: THSG content inshoots, normal branch and old branches ofCaulisPolygoniMultifloriwere 0.016%, 0.147% and 0.516%, respectively. The content of emodin in shoots, normal branch and old branches ofCaulisPolygoniMultifloriwere 0.112, 0.116, 0.235 mg/g, respectively.The content of emodin-3-methyl ether in shoots, normal branch and old branches ofCaulisPolygoniMultifloriwere 0.299, 0.584, 0.747 mg/g, respectively. THSG, emodin and emodin-3-methyl ether contents in different parts ofCaulisPolygoniMultiflorihave significant difference. The content inold branches are more than that in shoots andnormal branch. The trend of three kinds of components in different parts ofCaulisPolygoniMultifloriisconsistent, thusthe old and normal branches should be harvested intentionally.

CaulisPolygoniMultiflori, THSG, Emodin, Emodin-3-methyl ether

2016-06-15；

2016-07-12

贵州省教育厅2015年度自然科学研究项目(黔教科KY字(2015)369号)；贵州省科技计划课题(黔科合重大专项字[2015]6009-5)；贵州省药食同源资源研究开发科技创新人才团队(黔科合人才团队(2015)4010号)；贵州省药食同源植物资源开发工程技术研究中心(黔科合G字(2015)4001号)；贵州省药食两用资源应用开发工程实验室(黔发改投资(2015)542号)。

Q945.78

A

1008-0457(2016)06-0081-06 国际

10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2016.06.014

*通讯作者：林冰(1974-)，男，博士，硕士生导师，主要研究方向：中药材质量标准研究；E-mail:pharm-blin@shou.com。