宫颈细胞DNA倍体测定联合人乳头瘤病毒感染检测筛查宫颈癌的价值▲

莫伟杰 赵仁峰 李 伟 蓝 智 吴月莲

(1 广西皮肤病防治研究所，南宁市 530003，E-mail：552159985@qq.com；2 广西壮族自治区人民医院妇产科，南宁市 530021；3 广西艾滋病临床治疗中心(南宁)暨南宁市第四人民医院，南宁市 530023)

临床创新

宫颈细胞DNA倍体测定联合人乳头瘤病毒感染检测筛查宫颈癌的价值▲

莫伟杰1赵仁峰2李 伟1蓝 智3吴月莲2

(1 广西皮肤病防治研究所，南宁市 530003，E-mail：552159985@qq.com；2 广西壮族自治区人民医院妇产科，南宁市 530021；3 广西艾滋病临床治疗中心(南宁)暨南宁市第四人民医院，南宁市 530023)

目的 探讨宫颈细胞DNA倍体测定联合人乳头瘤病毒(HPV)感染检测在宫颈癌筛查中的价值。方法 宫颈癌高危患者600例，分别采用AcCell系统进行宫颈细胞DNA定量分析和第二代杂交捕获技术(HC2)检测高危型HPV。上述检测任何一项阳性患者进行阴道镜下取材病理诊断。以病理检查结果为“金标准”，分析上述两种检测方法在宫颈癌筛查中的价值。结果 600例宫颈癌高危患者中，AcCell系统筛查宫颈细胞DNA倍体阳性276例(46.0%)；HC2筛查HPV-DNA阳性239例(39.8%)。397例病理学检查结果：慢性炎症195例，宫颈上皮内瘤样病变轻度97例，宫颈上皮内瘤样病变中度44例，宫颈上皮内瘤样病变重度35例，宫颈浸润癌26例。细胞DNA定量分析阳性诊断宫颈癌的敏感性为92.31%，特异性为40.16%；HC2检测方法诊断宫颈癌的敏感性为69.23%，特异性为45.55%。DNA定量分析方法结合HC2检测筛查宫颈癌的敏感性和特异性分别为61.54%、 85.71%。结论 细胞DNA定量分析方法宫颈癌筛查的敏感性高，该方法与HC2检测相结合，可提高特异性。

宫颈癌；DNA定量分析；人乳头瘤病毒；第二代杂交捕获技术；筛查

宫颈癌发病前存在一个较长的、可逆的癌前病变期，是目前唯一可以早期发现并能治愈的妇科癌症，其筛查方法一直受到妇科医生的重视。近年来有许多新的宫颈癌筛查及诊断方法不断出现，其中细胞DNA定量分析方法一直受到关注。本文对宫颈癌高危患者进行细胞DNA含量测定联合第二代杂交捕获技术(hybrid capture Ⅱ，HC2)检测人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染，探讨其在宫颈癌筛查中的价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2012年1月至2015年1月广西皮肤病防治研究所和广西壮族自治区人民医院收治有宫颈癌高危因素患者600例，包括异常宫颈出血、接触性出血、宫颈糜烂、宫颈异常赘生物、宫颈癌术后等，经薄层液基细胞学技术(thinprep cytologic test，TCT)检测，诊断为未明确诊断意义的不典型鳞状细胞(atypical squamous cells of undetermined significance，ASCUS)。年龄22～65(36.00±8.02)岁。

1.2 方法 600例患者分别采用全自动DNA倍体分析系统检测宫颈细胞DNA倍体含量和HC2检测宫颈细胞HPV-DNA。这两种筛查结果中有任意一项为阳性者，建议进行病理检查。(1)宫颈细胞DNA倍体含量：DNA倍体分析系统检查评定标准：所有染色DNA(Feulgen DNA)染色片用AcCell全自动细胞图像分析系统进行扫描处理。染色质量控制用HL60细胞株作对照。一般情况下，AcCell系统对每张玻片上6 000个以上的细胞核进行扫描测定。经扫描后的每个细胞核均有123个特征值，其中包括形态特征、吸光特征、具体结构特征、 马尔可夫(Markovian)和非Markovian结构特征和长度特征等。AcCell系统根据不同细胞成分所具有的不同特征参数来自动完成细胞分类和计数，如正常上皮细胞、增生或癌变细胞、淋巴细胞、中性白细胞及未参与诊断的重叠细胞核，聚焦不良细胞核和核碎片等垃圾细胞。标准对照细胞为同张玻片上的100个正常上皮细胞，所测出的平均光密度为2的参考值，其变异系数值小于5%。 妇产科医生用阴道窥器暴露宫颈，先用无菌纱布擦去宫颈表面的黏液，然后手持宫颈刷从宫颈外口插入宫颈管，使刷丝中央进入颈管内5～8 mm，周边刷丝贴住颈管黏膜面，逆时针或顺时针旋转3～5圈，收集宫颈外口及宫颈管脱落细胞，停留8 s后取出宫颈刷，将刷头垂直方向弹入样本收集管内，在保存液中搅拌、漂洗、离心2次后送实验室检查。采用液基薄层制片技术制成薄层涂片，进行Feulgen DNA染色。Feulgen DNA染色片经全自动细胞DNA倍体定量分析系统测定诊断[1]。(2)高危型HPV-DNA检测： HC2标本采集：Digene公司提供专用锥形采集刷和保存瓶，将采集刷放置于受检者宫颈口鳞柱上皮交界处向同一方向轻轻旋转3～4圈，停留10 s，取出采集刷立即放于保存瓶中。标本采集后放于-4℃冰箱保存，3 d内送到实验室检测。检测高危型HPV-DNA试剂盒以及DML2000荧光光度仪均为美国Digene公司产品。

1.3 诊断标准 (1)细胞DNA倍体结果判定：根据AcCell系统诊断软件所做的细胞DNA倍体分析结果和建议有如下3种情况：正常DNA二倍体细胞为主，未见异倍体细胞及异倍体细胞峰，建议每2年复查1次；出现DNA指数大于2.5细胞及DNA指数为1～2的细胞数超过被测细胞总数的10%；出现异倍体细胞峰及大量DNA指数大于2.5细胞即判定为阳性，建议活检。 (2)HC2结果判定：HPV-DNA≥1.0 pg/ml即为阳性。

1.4 阴道镜及病理学检查 上述细胞DNA倍体检测和HC2-HPV-DNA筛查方法中有一项为阳性者，建议电子阴道镜下取材进行病理检查。在操作过程中，除了在正常的3、6、9、12点取组织行病理检查外，还在醋酸白试验疑似病灶处多取几点，避免漏诊。住院患者行电套圈外科切除术后或手术切除子宫后标本，送病理检查。病理诊断报告分为：慢性炎症；宫颈上皮内瘤样病变轻度(cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ，CIN Ⅰ)；宫颈上皮内瘤样病变中度(cervical intraepithelial neoplasia Ⅱ，CIN Ⅱ)；宫颈上皮内瘤样病变重度(cervical intraepithelial neoplasia Ⅲ，CIN Ⅲ)；原位癌或早期浸润癌；浸润癌。CIN Ⅱ级及以下的病变属于低级别宫颈内瘤样病变；CINⅢ及以上的病变属于高级别宫颈内瘤样病变。

2 结 果

2.1 两种不同的宫颈癌筛查方法结果 600例宫颈癌高危患者中，AcCell系统筛查细胞DNA倍体阳性患者276例(46.00%)，阴性324例(54.00%)。HC2筛查HPV-DNA阳性239例(39.83%)，阴性361例(60.17%)。共有397例进行病理学检查，结果诊断为宫颈癌26例。26例宫颈癌患者中，HC2筛查阳性18例，AcCell系统筛查阳性24例，其中16例HC2 和AcCell系统筛查均为阳性。见表1。

表1 病理检查与细胞DNA定量分析、HC2检测结果(n)

2.2 两种筛查方法的敏感性和特异性 以397例宫颈组织病理诊断结果为“金标准”。397例患者中，病理诊断为CIN Ⅲ/宫颈原位癌(carcinoma in situ，CIS)及以上级别的宫颈疾病61例，其中CIN Ⅲ/CIS 35例，宫颈浸润癌26例。宫颈细胞DNA倍体阳性诊断宫颈癌的敏感性为92.31%(24/26)，特异性为40.16%(149/371)；诊断CIN Ⅲ及以上病变的敏感性为88.52%(54/61)，特异性为42.85%(144/336)。HPV-DNA阳性诊断宫颈癌的敏感性为69.23%(18/26)，特异性为45.55%(169/371)；诊断CIN Ⅲ及以上病变的敏感性为68.85%(42/61)，特异性为47.02%(158/336)。宫颈细胞DNA倍体及HPV-DNA均阳性诊断宫颈癌的敏感性和特异性分别为61.54%(16/26)和 85.71%(318/371)； 诊断CIN Ⅲ及以上病变的敏感性和特异性分别为57.38%(35/61)和89.88%(302/336)。

2.3 DNA定量分析与HC2检测均为阳性的情况 病理检查诊断为CINⅢ/CIS的35例患者中，其中有19例两种筛查方法结果均为阳性，占54.28%(19/35)；26例宫颈癌中，有16例两种筛查方法均为阳性，占61.54%(16/26)；CINⅢ及以上患者61例，有35例两种筛查方法均为阳性，占57.38%(35/61)。

3 讨 论

宫颈细胞DNA定量分析技术是一种全自动的细胞分析技术，其工作原理是采用显微分光度与图像处理分析技术相结合，直观地逐个测量每一个细胞。在正常细胞和肿瘤细胞在生长增殖过程中，细胞核内DNA结构和含量都会发生变化，正常细胞有固定数量的DNA含量(7.6 pg)，其DNA指数为1，增殖周期DNA指数在1～2，而肿瘤细胞DNA指数≥2.5。细胞癌变的本质是细胞迅速无限增殖和转移，测定细胞核DNA含量可作为恶性肿瘤的指标之一[2]。该项技术用于宫颈癌前病变及宫颈癌的筛查和诊断在国内外已有大量报告[3-4]。由美国Digene公司开发的非放射性检测宫颈细胞高危型HPV-DNA的HC2技术是一种液相杂交法，其利用特异的RNA探针与变性后的HPV-DNA单链杂交，同时结合酶联免疫化学发光原理使基因信号放大，从而达到检测靶基因的目的[5]。在本研究中，我们对常规TCT检查结果阳性的患者，进行全自动细胞DNA定量分析和HC2检测，但都不作为诊断方法，而是作为筛查方法，从中挑选出高危宫颈癌病例作进一步检查，如活检进行确诊，以提高阳性检出率，减少细胞病理学医生和妇科医生的工作量。

本研究结果发现，DNA定量分析方法筛查宫颈癌的敏感性为92.31%，特异性为40.16%；HC2检测筛查宫颈癌的敏感性为69.23%，特异性为45.55%，HC2检测结果与肖克林等[6]的报告相一致，但DNA定量分析检测结果的敏感性、特异性均低于国内的报道[7-8]，其原因可能与标本放置时间过长有关。但是在同样的实验室条件下，DNA定量分析方法筛查的敏感性高于HC2筛查，提示更多早期宫颈癌患者可以通过DNA定量分析筛查被发现，从而得到及时确诊和治疗。而其中有少数被误判为阳性而需要做活检的患者，经病理检查证实无异常后无需做任何处理。在基层医院采用HC2检测高危型HPV作为初筛宫颈癌有一定的实用意义，而在有条件的医院可以辅以宫颈细胞DNA定量分析，两种方法联用能够减少宫颈高度病变筛查的假阳性率，提高敏感性。本研究结果发现，DNA定量分析及HC2检测结果均为阳性诊断宫颈癌的敏感性和特异性分别为61.54%和85.71%；诊断CINⅢ及以上病变的敏感性和特异性分别为57.38%和89.88%，说明两种筛查方法的联合应用诊断敏感性有所降低，但诊断特异性明显提高。在有条件的医院，建议将两种方法相结合，以降低假阳性率，提高检测效能。病理检查诊断宫颈癌26例，上述两种筛查方法均为阳性16例，占61.54%；CINⅢ及以上患者61例，两种筛查方法均为阳性35例，占57.38%。说明两种检测方法对宫颈癌的预测和诊断存在一致性。同时也提示了我们任何单一的宫颈癌筛查方法都有一定的局限性。在基层医院由于缺乏有经验的细胞学医生，开展大规模宫颈癌普查时采用全自动DNA倍体分析系统成本效益比较合理。

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广西医药卫生科研课题(Z2012033)

莫伟杰(1966～)，女，本科，主治医师，研究方向：妇科肿瘤筛查、皮肤病防治。

吴月莲(1970～)，女，硕士，主任医师，研究方向：妇科肿瘤及内分泌、盆底功能障碍性疾病，E-mail：malijuli1997.02.28@163.com。

R 737.33

A

0253-4304(2016)01-0105-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.01.32

2015-09-28

2015-12-14)