GP73、GPC3和AFP联合检测在原发性肝癌诊断中的探讨*

朱 波，肖亚雄△，彭宇生，王 鹏，张文礼，樊建新，王开正

(1.四川省宜宾市第一人民医院检验科 644000；2.四川省宜宾市第一人民医院消化内科 644000；3.四川省宜宾市第一人民医院普外科 644000；4.泸州医学院检验系，四川 646000)

GP73、GPC3和AFP联合检测在原发性肝癌诊断中的探讨*

朱 波1，肖亚雄1△，彭宇生1，王 鹏1，张文礼2，樊建新3，王开正4

(1.四川省宜宾市第一人民医院检验科 644000；2.四川省宜宾市第一人民医院消化内科 644000；3.四川省宜宾市第一人民医院普外科 644000；4.泸州医学院检验系，四川 646000)

目的 探讨高尔基体蛋白73(GP73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)和甲胎蛋白(AFP)联合检测在原发性肝癌(PHC)诊断中的价值。方法 选取PHC患者194例，普通肝病组74例，其他肿瘤组患者70例和健康体检者(健康对照组)80例进行3项指标的定量检测和分析；AFP采用微粒子化学发光法，用美国雅培ARCHITECT i2000SR全自动化学发光仪进行定量检测；GP73和GPC3采用ELISA法作定量检测。结果 PHC组血清GP73和GPC3水平均显著高于普通肝病组、其他肿瘤组和健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；GP73、GPC3、AFP单独及三者联合检测对诊断PHC的敏感度分别为：78.35%、53.09%、58.76%、94.85%，其受试者工作特征 (ROC)曲线下面积(AUC)分别为：0.89、0.74、0.75、0.96。结论 GP73、GPC3和AFP联合检测能提高PHC诊断的敏感度和诊断价值。

肝肿瘤；早期诊断；联合检测；高尔基体蛋白73；磷脂酰肌醇蛋白聚糖类；甲胎蛋白类

原发性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)发病率位列全世界第五，在我国恶性肿瘤中位列第三，且在世界范围内发病率逐年上升[1]。发现时多为晚期，早诊断、早治疗是提高PHC患者存活率的惟一途径。目前临床上最主要的诊断手段是定期检测血清中甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)结合影像学检查或超声检查等，但对慢性肝病基础上较为常见的良性病变与小肝癌的鉴别仍较困难[2]，因此寻求新的更加敏感或特异的血清标志物显得越来越有必要。高尔基体蛋白73(golgi protein-73，GP73)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3，GPC3)是近年来随着基因技术和蛋白组学等技术发展而发现的最有希望成为新的PHC血清标志物的物质。国内外一些研究报道显示，GP73有优于AFP的敏感性和特异度，GPC3的表达与肿瘤组织的分级及大小无关，与AFP无关联性[3]。本研究旨在对GP73和GPC3对PHC的诊断价值进行验证，同时对GP73、GPC3和AFP三者联合检测对PHC的诊断价值进行探讨。

1 资料与方法

1．1 一般资料 收集四川省宜宾市第一人民医院2012年12月至2014年10月符合入选条件的患者338例，记录姓名、性别、年龄、B超、CT、病理检查等资料，按实验需求分为PHC组194例，其中男135例，女59例，年龄32～73岁，平均49.8岁，诊断符合卫生部《原发性肝癌诊疗规范(2011年版)》诊断标准，合并其他肿瘤者均排除；普通肝病组74例，其中男52例，女22例，年龄28～67岁，平均47.2岁；其他肿瘤组70例，其中男49例，女21例，年龄31～65岁，平均45.5岁；以上病例均来自消化内科和普外科。健康对照组80例，其中男54例，女26例，年龄27～62岁，平均43.9岁，取自四川省宜宾市人民医院体检中心。

1．2 标本采集、保存 所有病例于清晨6:00～7:00时，空腹采血5 mL，2 h内离心分离血清2 mL，-20 ℃保存备用。

1．3 检测方法 AFP采用微粒子化学发光法，采用美国雅培ARCHITECT i2000SR全自动化学发光仪进行定量检测,仪器及相应配套试剂均购自美国雅培公司。GP73和GPC3采用ELISA法作定量检测，试剂购自北京热景生物有限公司。

2 结 果

2.1 各组血清GP73、GPC3和AFP检测结果及比较 见表1。

表1 各组血清GP73、GPC3和AFP检测结果(±s,ng/mL)

a:P<0.05,与健康对照组比较;b:P<0.05，与其他肿瘤组比较;c:P<0.05,与普通肝病组比较。

2.2 GP73、GPC3和AFP单项及3项联合检测对PHC的诊断价值比较 按卫生部《原发性肝癌诊疗规范(2011年版)》,AFP取200 ng/mL为诊断临界值；GP73据ROC曲线得最佳临界点为175.5 ng/mL，GPC3据ROC曲线得最佳临界值为0.385 ng/mL；血清GP73、GPC3和AFP单项指标及3项联合检测对PHC的诊断价值见表2，其ROC曲线见图1。就PHC诊断的敏感度而言，三者联合检测与GP73、GPC3、AFP单项检测差异有统计学意义(χ2=9.99、42.56、33.45，均P<0.05)；就特异度而言，三者差异无统计学意义(χ2=2.69、3.68、0.77，均P>0.05)，AUC三者联合检测高于各项单独检测，诊断价值明显提高。

表2 血清GP73、GPC3和AFP单项及3项联合检测对PHC的诊断价值比较

a:P<0.05，与AFP比较;b:P<0.05，与GPC3比较;c:P<0.05,与GP73比较。

图1 GP73、GPC3和AFP及3者联合诊断PHC的ROC曲线

3 讨 论

PHC因其发病率高，治疗难度大，一般发现时多为中晚期，患者生存时间短而被广泛重视。早发现、早治疗仍是目前提高患者生存质量，延长寿命最有效的方法。目前临床上最主要的诊断手段是定期检测血清AFP结合影像学检查或超声检查等，但对慢性肝病基础上较为常见的良性病变与小肝癌的鉴别仍较困难。AFP作为传统肝癌标志物，在直径小于3 cm的小细胞肝癌往往不表达或低表达，而在其他良性肝病，如肝硬化、慢性肝炎等或其他肿瘤时也会出现升高[2]。有文献表明AFP对PHC的诊断敏感度特别是早期患者不高，其敏感度在40%～65%不等，特异度在76%～96%不等[4]。因此寻求新的更加敏感或特异的血清标志物或血清诊断模式显得越来越有必要。理想的肝癌标志物应具有较高的特异度，能够将肝癌与肝炎、肝硬化、肝脏再生结节等区分开来；同时还需要较高的敏感性，能够在肝癌早期提示诊断，且有易于检测、可重复、侵入少的特点。

GP73是存在于细胞高尔基体的一种跨膜蛋白。Kladney等[5]于2000年描述了在正常人体肝组织中，GP73主要由胆管上皮细胞表达，而肝细胞表达很少甚至不表达，肝细胞受到病毒感染或非病毒原因损害(酒精性肝病或自身免疫性肝炎)均可引起GP73的高表达。Block等[6]于2005年提出，在PHC患者血清中GP73水平显著升高。1项包括352例患者的研究显示，与肝硬化患者相比，PHC患者的血清GP73水平显著升高，且对于早期PHC的诊断，GP73优于AFP。在我国，2008年北京协和医院肝脏外科的毛一雷等[7]研究结果显示，GP73诊断PHC的敏感性为76.9%，特异性达到92.8%，这项研究在国内初步揭示了检测PHC患者GP73的高敏感度，GP73有可能成为我国临床上一个新的、更有效的、PHC早期诊断标志物。石玉玲等[8]，张祖平等[9]随后的研究显示将GP73与AFP联合检测能提高PHC的诊断敏感度，其敏感度在87%左右，特异性在90%左右。

GPC3 是一种硫酸类肝素蛋白多糖，1996年，Pilia等[10]通过对1例过度生长综合征患者的研究发现：过度生长综合征患者存在X：1转位，并通过STSS-PCR(sequence-tagged sites)得到其cDNA，属于glypican家族，命名为GPC3。GPC3通过糖基磷脂肽肌锚蛋白锚定在细胞表面，可结合肝素结合型蛋白如生长因子，调控着细胞生长、繁殖、分化、黏附和迁移等行为，还可能涉及抑制或调节大部分中胚层组织和器官的生长。国外研究表明，GPC3在绝大多数肝癌组织中高表达，而在正常肝组织及良性肝脏病变中不表达或低表达[11]。另外有研究证明，GPC3的表达与肿瘤组织的分级及大小无关，与AFP无关联性，可以作为AFP的一个很好的补充[12-13]。

近年来，国内有关GP73、GPC3的研究逐渐增多，且从单个指标向联合多个指标检测发展，但有关GP73、GPC3和AFP三者联合诊断的研究较少。本研究对GP73、GPC3和AFP联合检测在PHC诊断中的价值进行探讨，以期得出PHC的一种新的诊断模式。在本研究中，GP73用于诊断PHC的敏感度为78.35%，特异度为94.20%，AUC为0.89，其诊断价值优于AFP，而GPC3敏感度为53.09%，特异度为95.09%，其AUC为0.74，单独用于诊断PHC其价值并未优于AFP，但因其与AFP相互独立，在AFP阴性患者中的阳性检出率较高，与国内汪得胜等[2]，许方等[14]研究相一致；三者联合检测则可相互补充，其敏感度、特异度、AUC分别为94.85%、87.50%、0.96，相比单项检测则可显著提高诊断PHC的敏感度和诊断价值，具有敏感度高、特异度强、检测方便、快速、创伤小、费用相对低廉等特点，特别适用于PHC患者的早期诊断，AFP阴性的PHC患者的诊断，影像学或B超难以区分慢性肝病基础上较为常见的良性病变与小肝癌的鉴别诊断，体检者的筛查。

一个新的肿瘤标志物从实验室到临床应用，是一个很漫长的过程，需要大量的临床病例的验证、随访。在本研究进行的过程中就遇到1例GP73偏高的健康人，其GP73值为424.0 ng/mL，GPC3为0.338 ng/mL，AFP为1.62 ng/mL，生化肝功能正常，表面抗原阴性，B超、CT均未见异常，在1年后体检中经128排CT扫描发现大小约1.1 cm小结节，后经穿刺病理检查确诊为PHC。这也提示出GP73有可能在肝脏刚出现病理改变时，未达到影像学检查界限之前就大量升高，对PHC的早期诊断有着不可比拟的优势。这也是作者后续研究的重点之一。

综上所述，GP73、GPC3和AFP单独用于PHC的诊断都有一定的局限性，三者联合检测可起到相互补充的作用，有助于提高PHC诊断的敏感度及诊断价值，做到早诊断、早治疗，减少漏诊和误诊。

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[2]汪得胜，丁惠国，李卓，等．血清GPC3联合AFP对原发性肝癌的诊断价值探讨[J]．中华检验医学杂志，2007，30(10)：1169-1171．

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[14]许方，李晓兰，吴小利．血清GPC3与AFP的检测对原发性肝癌诊断意义比较[J]．中国实验诊断学，2013，17(6)：1053-1056．

四川省卫生厅科研课题项目(110600)；四川省宜宾市科技局重点科研项目(2011SF004)。

朱波(1980-)，主管技师，本科，主要从事临床免疫研究。
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，E-mail:304825793@qq.com。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.10.022

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1671-8348(2016)10-1367-03

2016-01-22

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