HPLC法测定四季感冒胶囊中橙皮苷和连翘苷

杜贺庆



HPLC法测定四季感冒胶囊中橙皮苷和连翘苷

杜贺庆

目的 利用HPLC法测定四季感冒胶囊中橙皮苷与连翘苷的含量。方法 运用高效液相色谱法，操控Agilent XDB-C18分析仪器，在色谱柱规格、流速控制等按标准操作。结果HPLC法实验的成分分离度较好，其中橙皮苷的线性限制是0.101 3～0.910 5 μg（r=0.999 7），连翘苷的线性限制是0.109 8～0.910 7 μg（r=0.999 3）；橙皮苷加样回收率为95.78%（RSD=1.39%），连翘苷回收率98.14%（RSD=1.18%）。结论 HPLC法操作简单，检测灵敏，可以作为四季感冒胶囊成分控制的理想方法。

橙皮苷；HPLC法；连翘苷；四季感冒胶囊

四季感冒胶囊由9味中药制成（连翘、炒香附、荆芥、陈皮、紫苏叶等），主要治疗由风寒感冒导致的咽部胀痛灼热、鼻塞等症状。四季感冒胶囊富含橙皮苷、连翘苷等成分是主要活性物质，具有抗菌消炎等作用［1-3］。本研究应用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography ，HPLC）检测法，旨在测量四季感冒胶囊中橙皮苷、连翘苷两种物质成分含量。具体报道如下.

1　仪器与试药

所需仪器：安捷伦1260液相色谱仪；瑞士进口梅特勒电子天平XS105DU；日本岛津紫外可见分光光度计UV-2550；江苏昆山舒美超声波清洗机KQ-500；默克密理博实验室超纯水系统Millipore-Milli-Q［4］。

色谱参数：XDB-C18（Agilent）色谱柱为250×4.6 mm2，5 μm，柱温度为30℃，检测点为277nm波长处。

流动相：乙腈（A流相）、甲酸水溶液（浓度为1%，即B流相）、梯度洗脱使用乙腈（10%，20 min→35%，40 min→90%，45 min→10%，45 min），加样标准为10 μL，流动速度为1.0 ml/min。

对照试药：橙皮苷（生产批号：140630-201427）；连翘苷（生产批号：140713-201416）；升麻素苷（生产批号：140724-201423）；迷迭香酸（生产批号：149218-201405）；5-O-甲基维斯阿米醇苷（生产批号：141224-201409），上述药物均由食品药品检定研究院（中国）提供，配制溶剂为甲醇。

四季感冒胶囊（国药准字：Z20050579；哈药集团三精千鹤制药股份有限公司；批准日期：2014-06-08）。

2　方法与结果［5-6］

2.1溶液的制备

选定色谱柱后，（1）制取对照储备液：测取适量对照用的橙皮苷与连翘苷，与木精结合制出连翘苷18 μg/ml、橙皮苷12 μg/ml的试剂；（2）供试样品溶液：将四季感冒胶囊内容物倒出，研细，取3 g倒入锥形瓶例，倒入木精25 ml，密封，回流加热半个小时，摇匀冷藏过滤再烘干。以余留物、水、氯仿摇振溶解，抽出50 ml（分2次）。蒸干备用。剩余添正丁醇、水饱和，抽取50 ml（分2次），蒸干备用。特制之外的余留物均加木精，稀释到10 ml，摇晃均匀，过滤即得；（3）阴性样品溶液：将连翘、陈皮按上一项步骤制为阴性样品溶液。

2.2适用性试验

取上述三种试剂，依照准备好的色谱条件进行，观察色谱变化。结果显示，按照这种色谱条件，连翘苷、橙皮苷顺式和反式异构体基线分离，分离度超1.5，阴性样品不干扰实验结果。

2.3线性关系考察

用适量对照品（连翘苷与橙皮苷）及木精，分别稀释调匀，做出119μg/ml橙皮苷以及还有179μg/ml连翘苷，得出结果：橙皮苷的线性限制是0.101 3～0.910 5μg（r=0.999 7），连翘苷的线性限制是0.109 8～0.910 7μg（r=0.999 3）。

2.4精密度试验

准确取5 μl对照溶液，进行6次进样，计算两种物质的峰面积，各组峰值为1.6%～2.1%，精密度方面，本仪器较占优势。

2.5重复性试验

准确取6份对照储备液，制备5 μl（按照供试样品溶液的方法），结果橙皮苷均含量（88.400μg/g，RSD=0.88%，n=5）、连翘苷均含量（55.700 μg/g，RSD=0.98%，n=5）。

2.6加样回收率试验

取四季感冒胶囊6粒，按照供试样品溶液方式测量。结果橙皮苷加样均回收率为95.78%（RSD=1.39%），连翘苷回收率98.14%（RSD=1.18% ）。

3　讨论

研究超声、回流提取对检测干扰。检测回流半个小时时，两峰含量都比超声半小时高，延长十分钟，结果无差别，故选取半个小时为加热回流提取条件。波长测定同理。了解了橙皮苷、连翘苷的药物结构后，用正丁醇提炼橙皮苷，采取氯仿液提炼连翘苷，之后蒸干溶解搅匀后，有较好的色谱峰峰形，符合分离度指标［7-8］。HPLC法检测，性能卓越、便捷，为研究四季感冒胶囊的成分含量提供了新方法，有积极的安全把控价值。

［1］许海棠，李家璇，陈其锋，等.HPLC-MS/MS法测定四季感冒胶囊中的4种有效成分［J］.广西民族大学学报（自然科学版），2013，19（3）:91-94.

［2］范蕾，刘敏，吴查青，等.HPLC 法同时测定四季感冒胶囊中橙皮苷和连翘苷的含量［J］.中国药师，2015，18（6）:1054-1056.

［3］肖会敏，何悦，陈飞，等.四季抗病毒合剂的超快速液相色谱法指纹图谱研究及4个成分的含量测定［J］.中国医院药学杂志，2015，35（3）:230-233.

［4］姬雪礼，李文烈，郑晓杰，等.高效液相色谱法同时测定连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷含量［J］.中国药业，2014，23（7）:33-34.

［5］蒋俊春，孟建升.HPLC法同时测定及砂和胃胶囊中橙皮苷、柚皮苷和新橙皮苷的含量［J］.中华中医药学刊，2014，32（6）: 1496-1498.

［6］唐励静，文翔昊，李冲，等.HPLC同时测定复方金银花颗粒中绿原酸、连翘苷、黄芩苷、汉黄芩素、芹菜素的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2014，20（21）:71-74.

［7］孙艳涛.HPLC双波长法同时测定消石利胆胶囊中芍药苷、橙皮苷、黄芩苷和大黄酚的含量［J］.中国药师，2016，19（4）:801-803.

［8］汪玉萍，郝自新.HPLC法同时测定羚羊感冒口服液中牛蒡苷和连翘苷的含量［J］.安徽科技学院学报，2015，29（4）:38-41.

The Application of HPLC Method for Measuring the Hesperidin and Phillyrin Content in Four-season Cold Capsule

DU Heqing Department of Pharmacy，General Hospital of Liaohe Oil Field，Panjin Liaoning 124010，China

Objective To measure the hesperidin and Phillyrin content in four season cold capsule by using pplication the HPLC method.Methods The modern column chromatography was used and the Agilent XDB-C18 analytical instrument was controlled under the standard operation in the column specifcations，mobile phase，fow control and other aspects.Results HPLC method for separation was good.The linear constraints of hesperidin was 0.101 3～0.910 5μg（r=0.9997） and the linear constraints of phillyrin was 0.109 8～0.910 7 μg（r=0.9993）； The average recovery rate of hesperidin was95.78% （RSD=1.39%），the average recovery rate of phillyrin was 98.14%（RSD=1.18%）.Conclusion The method for identifcation has the characters of excellent performance，fexible manipulation and convenient operation.It is an ideal method for content measurement in four-season cold capsule.

Hesperidin，HPLC，phillyrin，Four-season cold capsule

R

A

1674-9308（2016）21-0176-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.109

辽河油田总医院药学部，辽宁 盘锦 124010