不同浸泡时间对间接免疫荧光法检测抗核抗体结果的影响

刘玲玲

·论著·

不同浸泡时间对间接免疫荧光法检测抗核抗体结果的影响

刘玲玲

目的 探讨不同浸泡时间对间接免疫荧光法检测抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）结果的影响。方法 选择2014年6月～2016 年5月我院接收的符合研究选取标准的41例风湿性关节炎患者作为研究组，另选取41例同期体检健康者作为对照组。抽取所有研究对象空腹状态下静脉血10.0 m l，将血清标本分成三组，分别浸泡5.0 m in、15.0 m in、25.0 m in，采用间接免疫荧光技术进行检测。对比两组研究对象不同浸泡时间ANA检测结果。结果 浸泡5.0 m in时，研究组ANA检测敏感度为100.00%、特异度为78.05%，对照组为7.32%、0.00%；浸泡15.0 min时，研究组ANA检测敏感度为100.00%、特异度为10.00%，对照组为0.00%、0.00%；浸泡25.0 min时，研究组ANA检测敏感度为80.49%、特异度为10.00%，对照组为0.00%、0.00%。研究组浸泡15.0 m in时敏感度（100.0%）高于浸泡25.0 m in时敏感度（80.49%），特异度（100.0%）高于浸泡5.0 m in时特异度（78.05%），差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 浸泡15.0 m in时间接免疫荧光法对抗核抗体的检测灵敏度和特异度较高，可有效提高检测准确率，降低假阳性率。

不同浸泡时间；间接免疫荧光法；抗核抗体

ANA在临床医学中又被称为抗核酸抗原抗体，是一种把自身真核细胞（如RNA、DNA、脱氧核糖核蛋白及可提取核抗原等）作靶抗原的自身抗体统称[1-2］。ANA可和各种动物细胞核产生反应，其在血清中分布最为广泛，同时在尿液、关节滑膜液及胸水中也有一定分布[3］。ANA在多种自身免疫疾病中阳性率存在一定差异，如原发性胆汁性肝硬化（95.0%～100.0%）、系统性红斑狼疮（95.0%～100.0%）、全身性硬皮病（85.0%～90.0%）、干燥综合征（10.0%～40.0%）、类风湿性关节炎（10.0%～20.0%）[4］。所以，ANA标准检测已成为自身免疫系统疾病重要筛选途径。临床多通过以人喉癌上皮细胞等作底物的间接免疫荧光法对ANA予以检测，但浸泡时间、标本初始稀释度等均可影响检测结果[5］。本研究选取我院41例风湿性关节炎患者，通过设置对照组，探究不同浸泡时间对间接免疫荧光法检测抗核抗体结果的影响。报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究组纳入及排除标准

（1）纳入标准：经病理学检查确诊为风湿性关节炎；具有自主意识，知晓本研究并签署知情同意书；（2）排除标准：合并其他全身免疫性疾病者；合并全身性感染疾病者；依从性差，无法顺利配合完成本研究者；合并造血系统疾病者。

1.2 一般资料

选择2014年6月～2016年5月我院接收的符合研究选取标准的41例风湿性关节炎患者作为研究组，另选取41例同期体检健康者作为对照组。研究组男13例，女28例；年龄31～66岁，平均（50.47±8.06）岁。对照组男15例，女26例；年龄33～65岁，平均（50.51±8.10）岁。两组年龄、性别等一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05），具有研究价值，且本研究经我院伦理委员会审核同意。

1.3 方法

ANA检测试剂盒由德国欧蒙生物技术有限公司生产，通过欧蒙滴定平板法，采用间接免疫荧光技术进行检测。具体过程如下：抽取所有研究对象空腹状态下静脉血10.0 m l，置入离心机中行离心处理（转速：3 000 r/min，时长：10.0 min），随后取上清液放于-20.0℃环境中储存待检。将所有研究对象血清标本依据1∶100比例进行稀释，并将每份血清标本分为三组，使其与固定于载玻片反应区中的基质（人喉癌上皮细胞及鼠肝）相互反应（30.0 min左右）；对分为三组的血清标本予以浸泡洗涤处理（三组浸泡时间分别设定为5.0 min、15.0 min、25.0 min），随后加入经荧光素标记处理的抗人IgG抗体，进行时长为30.0 min的孵育处理后再次进行浸泡洗涤（三组浸泡时间分别设定为5.0 min、15.0 min、25.0 min）；于荧光显微镜下仔细查看特异性荧光染色模型。依据荧光染色模型将其分为胞质型、核着丝点型、核膜型、核仁型、核斑点型、核均质型及混合型（2种或2种以上混合荧光染色模型），将1∶100初始血清稀释度阳性标本作阳性评定标准。

1.4 观察指标

对比两组研究对象不同浸泡时间ANA检测结果。

1.5 统计学分析

通过SPSS 19.0软件对数据进行分析，以n（%）表示计数资料，组间分布采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

采用χ2检验可知，浸泡5.0 min时，研究组ANA检测敏感度为100.00%（41/41）、特异度为78.05%（32/41），对照组敏感度为7.32%（3/41）、特异度为0.00%（0/41）；浸泡15.0 min时，研究组ANA检测敏感度为100.00%（41/41）、特异度为10.00% （41/41），对照组敏感度为0.00%（0/41）、特异度为0.00%（0/41）；浸泡25.0 min时，研究组ANA检测敏感度为80.49%（33/41）、特异度为10.00%（41/41），对照组敏感度为0.00%（0/41）、特异度为0.00%（0/41）。研究组浸泡15.0 min时敏感度（100.0%）高于浸泡25.0 min时的敏感度（80.49%），差异有统计学意义（χ2=6.787，P＜0.05），特异度（100.0%）高于浸泡5.0 min时的特异度（78.05%），差异有统计学意义（χ2=7.988，P＜0.05）。

3 讨论

ANA是一组针对细胞核中的蛋白、RNA、DNA或此类物质分子复合物的自身抗体，根据其核中每个分子的性能不同，可将其分为抗核仁抗体、抗非组蛋白抗体、抗组蛋白抗体及抗DNA抗体等，而每类抗体根据抗原特性不同又可进一步细分为多种类型[6-7］。ANN主要分布于IgG、IgA、IgM中，在IgD和IgE中也有少量分布。ANA的检测在临床中具有重要价值，ANA检测结果呈阳性则可高度怀疑机体存在自身免疫性疾病，且滴度越高，表明免疫损害程度越高。因此，对ANA进行准确诊断对自身免疫性疾病的临床诊治、提高预后均具有重要意义[8-10］。

目前，临床主要将猴或鼠肝与人喉癌上皮细胞作底物，并采用间接免疫荧光法对ANA进行检测，其中人喉癌上皮细胞细胞结构较为清晰、核大、核抗原较为丰富，有助于结果观察并分析荧光染色模型[11-12］。但当血清标本浸泡时间、抗原基质、反应时间、加样量、初始稀释度、室温等条件发生转变时，荧光强度也发生变化，导致间接免疫荧光法对ANA的检测结果存在一定差异性。本研究将每位研究对象血清标本分为三组，分别浸泡5.0 min、15.0 min及25.0 min，结果发现，浸泡5.0 min时研究组检测结果均呈阳性，而对照组出现3例阳性，导致检测结果出现假阳性的原因可能是操作期间浸泡时间较短，血清未有效洗脱而形成非特异性荧光所致。而当浸泡25.0 min时，对照组检测结果均呈阴性，而研究组出现8例阴性，其原因可能是浸泡时间较长，致使荧光强度降低或患者抗体自身滴度较低，虽然随着浸泡时间增长荧光强度不断降低，滴度也随之减弱，但荧光染色核型未发生改变。当浸泡时间为15.0 min时，研究组均为阳性，对照组均为阴性，与病理检查结果一致，并且浸泡15.0 min时敏感度和特异度分别高于浸泡25.0 min时敏感度、浸泡5.0 min时特异度，差异有统计学意义（P＜0.05），由此可以得知，浸泡时间适宜有助于提高ANA检测准确度与敏感度，为临床治疗方案的制定提供指导依据。

综上所述，浸泡15.0 min时间接免疫荧光法对抗核抗体的检测灵敏度和特异度较高，可有效提高检测准确率，降低假阳性率。

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Effect of Different Soaking Time on the Results of Indirect Imm unofluorescence Assay for the Detection of Antinuclear Antibody

LIU Lingling Department of Laboratory， Shangqiu First People's Hospital Branch， Shangqiu He’nan 476000， China

Objective To investigate the effects of different soaking time on the results of antinuclear antibody （ANA） by indirect immunofluorescence assay. Methods 41 patients with rheumatoid arthritis who received the selection criteria for the study were selected as the study group from June 2014 to May 2016， another 41 cases of the same period were selected as the control group. We extracted all the subjects in the fasting state of venous blood 10.0ml， serum samples were divided into three groups， respectively，soak 5.0 m in， 15.0min， 25.0 min， using indirect immunofluorescence techniques to detect. Two groups of research objects with different immersion time ANA test results were compared. Results When soaked in 5.0 min， the sensitivity and specificity of ANA in the study group were 100.00% and 78.05%， while the control group was 7.32% and 0.00%，respectively， when soaked in 15.0 min， the sensitivity and specificity of ANA in the study group were 100.00% and 10.00% respectively， while the control group was 0.00% and 0.00%， respectively， when soaked in 25.0 min， the sensitivity and specificity of ANA in the study group were 80.49% and 10.00% respectively， while the control group was 0.00% and 0.00%，respectively. The study group of immersion 15.0 min sensitivity （100.00%）was higher than immersion 25.0 m in sensitivity （80.49%）， specificity （100.00%） was significantly higher than that of immersion 5.0 min specificity （78.05%）， the difference was statistically significant （P＜0.05）. Conclusion The detection sensitivity and specificity of immersion 15.0 min time is high， which can effectively improve the detection accuracy and reduce false positive rate.

Different soaking time， Indirect immunofluorescence， Anti nuclear antibody

R 446

A

1674-9308（2016）26-0048-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.26.026

河南省商丘市第一人民医院分院检验科，河南 商丘 476000