SAT技术用于快速检测肺结核的临床意义

申明莉王玉华



SAT技术用于快速检测肺结核的临床意义

申明莉1王玉华2

【摘要】目的 探讨RNA恒温扩增实时荧光检测技术（SAT）快速检测肺结核的效果。方法 对2015年9月～2016年4月在我院临床确诊100例肺结核患者和100例疑似肺结核的患者的痰液分别用SAT法，并与其他方法进行对比。结果 100例BD-960阳性患者中TB-SAT阳性例数为98例；100例BD-960阴性患者中TB-SAT阳性例数为13例。结论 SAT技术用于实验室检测结核分枝杆菌临床价值较高。

【关键词】SAT；PCR；肺结核；肺诊断

中国是全球结核病高发的国家之一，2010年全国第5次结核病流行病学调查显示，我国活动性肺结核患病率为459/100 000，其中传染性肺结核患病率为66/100 000[1-2]。其传染性、潜伏性、难清除性、再活动性、致病复杂性等防治难点使结核病防治成为首要任务[3]。防治结核病必须要控制活动性结核病，以达到控制传染源，保护易感人群，切断传播途径。其检测方法成为关键[4]。SAT-RNA法检测操作简便，可鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌，活菌检测，最快2 h出结果[5]。可避免错检、漏检，为临床对肺结核早发现、早诊断、早治疗、早预防提供重要依据。

1 资料与方法

1.1 病例来源

选取2015年9月～2016年4月在我院住院患者200例。200例患者中100例为确诊病例，男性69例，年龄17～77岁，平均（49.5±6.9）岁；女性31例，年龄17～86岁，平均（35.4±5.2）岁，临床症状和影像学诊断符合结核病的诊断标准。100为疑似病例，表现不明原因发热、咳嗽、肺CT显示肺部有阴影。男性59例，年龄12～85岁，平均（58.5±7.1）岁，女性41例，年龄19～84岁，平均（46.7±5.6）岁。

1.2 试剂与方法

患者的痰标本均采用抗酸染色法染色和L-J罗氏培养，染色液试剂盒和培养试剂盒由台湾贝索生物有限公司提供；BD-960快速培养由美国BD公司提供的MGIT液体培养基进行培养；T-spot. TB由上海复兴长征医学科学有限公司提供；SAT-TB由上海仁度生物科技有限公司提供；PCR反向杂交法菌种鉴定试剂由深圳亚能生物技术有限公司提供。痰标本留取，嘱患者清晨漱口后，咳出的深部痰置于无菌痰盒内，留取4盒3～5 ml。血样采集抽取足量的外周静脉血，加至含有肝素抗凝剂的采血管中。

2 结果

SAT检测在肺结核的快速准确诊断中优于痰涂片、痰培养和T-spot.TB等方法，具体结果如下：

100例BD-960阳性标本中，SAT阳性率为98%，涂片阳性率为31%、罗氏培养阳性率为65%、T-spot.TB阳性率为98%。

TB-SAT报告时间最快24 h，罗氏培养报告时间最快为4～6周，涂片为24～48 h，TB-tspot报告时间最快为24～48 h。

100例BD960快培阴性中，TB-SAT阳性13例，阴性87例，阳性率为13%，罗氏培养阳性率为3%，涂片阳性率为4%，TB-tspot阳性率为86%。

100例BD-960培养阳性病例中，SAT检测阴性2例，经过菌种鉴定后1例为鸟分枝杆菌，1例为浅黄分枝杆菌。

3 讨论

结核分枝杆菌是引起人类结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，但以肺结核多见，我国是仅次于印度的结核病高负担国家，疫情严重[6]。近年结核病呈明显上升趋势，全球所有传染性疾病中，结核病成为成年人的首位死因。对于感染结核的患者进行早期诊断和治疗是改善患者预后的关键，也是控制结核播散的重要环节。传统的结核杆菌检测方法存在诸多弊端，不能实现对结核患者的早发现、早诊断、早治疗。因此，发展能用于诊断结核的快速敏感的实验室技术十分重要。

SAT荧光定量恒温检测技术是利用靶标RNA被带有特异性核酸序列组合的含T7启动子的上游引物特异性结合，在逆转录酶（RT酶）的作用下合成一条RNA和带有T7启动子引物的DNA单链的杂合体双链，杂合体双链上的RNA单链被具有活性的核糖核酸酶H（RNA水解酶）水解，留下一条带有T7启动子引物的DNA单链（cDNA），此条DNA单链与反转引物结合，在RT酶的作用下形成都带有T7启动子的DNA双链，T7RNA聚合酶可以特异性识别此带有T7启动子的双链DNA，在T7酶的作用下可以此DNA双链为模版，不断复制出100 ～ 1 000条RNA拷贝（受到整体检测时间限制），复制出的RNA和带有特异性核酸序列的带有荧光标记的分子信标结合，发出荧光，在荧光检测仪上被实时捕获，直观反映扩增产物的产生，同时，也有部分复制出的RNA被带有特异性核酸序列组合的含T7启动子的上游引物特异性结合，再次进入扩增过程，从而实现对TB-RNA的检测。

SAT-RNA法检测操作简便，可检出人型、牛型、非洲型结核分枝杆菌，不能检出非结核分枝杆菌和呼吸道病菌感染，具有很高的特异性，可用于临床鉴别诊断，灵敏度好，阳性检出率高，活菌检测，最快2 h出结果。可避免错检、漏检。其活菌检测技术对临床及时判愈，提高医院诊疗水平，降低患者诊治成本具有重要意义[7]。

以病原体RNA为扩增靶标的核酸恒温扩增检测（SAT）技术开始应用于病原体的核酸诊断[8]。这是结核病诊断技术跨时代的飞跃，也是实验室检测水平的提高，更是广大临床患者的福音。

参考文献

[1]张娟，孙炳奇，李莹，等. 实时荧光核酸恒温扩增检测技术在肺结核临床诊断中的价值研究[A]. 中国防痨协会80周年纪念暨2013年全国学术大会论文集[C]. 北京：中国防痨协会，2013：61-63.

[2]李莉. 徐州市涂阳肺结核患者发现及流行病学分析[J]. 实用预防医学，2015，22（12）：1489-1491.

[3]谢春雨，李蓬. 2011-2013年河南省肺结核流行特征分析[J]. 河南预防医学杂志，2015，26（6）：461-462.

[4]倪丽丽，罗柳林，景玲杰，等. 恒温扩增实时荧光检测技术在肺结核诊断中的临床价值[J]. 中华检验医学杂志，2012，35（8）：702-705.

[5]崔振玲，沙巍，黄晓辰，等. RNA恒温扩增技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌的研究[J]. 中华结核和呼吸杂志，2011，34 （12）：894-897.

[6]沙巍，何娅，蒋瑞华，等. 实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对肺结核诊断价值的研究[J]. 中国防痨杂志，2012，34（6）：377-379.

[7]蔡杏珊，马品云，张院良，等. 实时荧光核酸恒温扩增检测技术在结核病诊断中的临床应用[J]. 中国防痨杂志，2014，36（6）：458-461.

[8]王永忠，张宏宇，刘小琴，等. 痰液标本结核分支杆菌RNA恒温扩增检测及临床应用[J]. 山东医药，2011，51（41）：83-84.

【中图分类号】R521

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9308（2016）09-0018-03

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.09.012

作者单位：1 黑龙江省牡丹江市康安医院检验科，黑龙江 牡丹江157011；2 牡丹江市第二人民医院检验科，黑龙江 牡丹江 157011

The Clinical Significance of SAT Technique for Rapid Detection of Pulmonary Tuberculosis

SHEN Mingli1WANG Yuhua2, 1 Department of clinical laboratory, Kang’an hospital of Mudanjiang, Mudanjiang Heilongjiang 157011, China, 2 Department of clinical laboratory, Second People's Hospital of Mudanjiang, Mudanjiang Heilongjiang 157011, China

[Abstract]Objective To study the RNA thermostatic expansion real-time fluorescence detection technology (SAT) rapid detection of tuberculosis.Methods 100 cases of tuberculosis patients and 100 cases of patients with suspected tuberculosis sputum in the SAT method respectively were compared from September 2015 to April 2016 in our hospital, and compared with other methods. Results 100 cases of BD-960 in patients with positive TB-SAT positive cases of 98 cases. in 100 patients with BD-960 negative TB-SAT positive cases for 13 patients. Conclusion The SAT technology used in laboratory detection of mycobacterium tuberculosis high clinical value.

[Key words]SAT, PCR, Tuberculosis, Pulmonary diagnosis