结直肠癌的分子生物学诊断进展研究

欧阳方丹 郭劲霞 刘蓉



结直肠癌的分子生物学诊断进展研究

欧阳方丹 郭劲霞 刘蓉

【摘要】近年来人们对于结直肠癌的关注度随着其发病率的逐年上升而逐渐增长。早期的诊断是减少病情恶化、死亡的关键，本文对结直肠癌的分子生物学诊断进展进行综述，为当前的结直肠癌临床诊断工作提供借鉴意义。

【关键词】结直肠癌；分子标志物；DNA；RNA；蛋白质

作为当前我国3大发病率最高的肿瘤之一，结直肠癌成为人们当前生活中不得不加以防范的疾病［1］。随着临床诊断技术的不断发展，当前结直肠的临床诊断、预防、控制得到了进一步的发展。其中，分子生物学标志物在结直肠癌临床诊断中的进展迅速，其较高的敏感性、特异性受到人们的认可，成为当前结直肠癌临床诊断的主要方式。

1 粪便分子标志物检测

1.1 蛋白质检测

在结直肠癌的临床诊断中可通过对患者粪便、血液中分子标志物进行检查，其中，粪便检测具有无创的显著特点，主要通过DNA、RNA、蛋白质3种分子标志物进行诊断［2］。在DNA、RNA、蛋白质3种标志物中，蛋白质是第一个用于粪便结直肠癌检测的临床分子标志物，且一直沿用于当前的临床诊断中。钙卫蛋白与肝珠蛋白是当前两种主要蛋白标志物，钙卫蛋白诊断敏感性为36%、特异性为91%；而肝珠蛋白的诊断敏感性为92%、特异性则为98%，但是联合便潜血检测器可将敏感性提高至100%。但是由于蛋白质会在粪便中出现不同程度的降解，因而容易形成假阴性、影响准确率。

1.2 RNA检测

当前，医学上已知的RNA标志物主要包括FLNA、CKS 2、氧化酶2及金属蛋白酶7等多种基因转录中。目前，临床上对于RNA标志物相对较少，具有较高的研究价值。相关研究显示［3］，在结直肠癌患者的粪便检测中，以环氧化酶2为诊断标志物的诊断敏感性为87%，特异性高达100%；用包含9个基因表达式的寡核昔酸微阵列分析、检测，敏感性为78%，特异性也高达100%，具有较高的临床疾病诊断前景。

1.3 DNA检测

DNA诊断可利用K-ras突变基因与DNA甲基化进行，当前的基因突变检查已从原来的单个标志物发展到多个突变的DNA标志物联合诊断的方式。临床上通常使用Pre Gen Plus试剂盒分析基因的突变情况，诊断敏感性、特异性均高达90%以上。为提高临床诊断的准确性通常需要增加检测标志物数目、升级配套的测序技术，因此通常会产生较高的诊断成本，在扩大应用范围方面具有一定的局限性。DNA甲基化具有调控机制，在正常的情况下只对基因转录活性产生影响，并未涉及甲基化、Cp G岛甲基化。当前的主要采用检测Cp G岛的高甲基化诊断结直肠癌，当Cp G岛出现甲基化时可对患者的癌基因、细胞周期调控基因等的表达带来一定的抑制作用［4］。为提高临床诊断的准确率也通常采用2～7个种甲基化标志物联合或者甲基化标志物联合粪便基因突变的方式。其中，波形蛋白基因的甲基化联合DNA完整性分析的诊断敏感性通常在在83%～88%，而特异性也高达82%以上。但是，粪便诊断也存在检测方法复杂、成本高昂、转变、储存困难等问题，一定程度上限制粪便标志物检测的发展。

2 血液分子标志物检测

2.1 DNA检测

除粪便检测之外，血液检测也是当前结直肠临床诊断的一种主要的方式。与粪便检测一样，血液DNA最早也从K-ra、基因的点突变方面入手。但是与粪便不同的是，联合多个突变标志物、甲基化标志物的方法无法提高临床结直肠癌诊断的敏感性。通常情况下，对相同患者进行疾病诊断，血液NDA诊断敏感性要低于粪便DNA标志物检测的敏感性。

2.2 RNA检测

当前，血液RNA标志物的研究主要围绕信使RNA（mRNA）进行，主要包括癌胚抗原、细胞角蛋白及人端粒酶逆转录酶等多个标志物［5］。使用单个mRNA标志物进行诊断，其敏感性通常在70%左右，而采用联合检测敏感性可高达89%。因为人体中大多数部位的血浆中都可检测到L 6 mRNA、GCC mRNA及hTERT 3种标志物。因此，临床检测通常以上述3种标志物为主要的RNA标志物，其敏感性通常在79%～92%，特异性则在90%以上，最高可达100%。随着临床分子检验技术的发展，含有18～25个核昔酸小分子RNA在临床结直肠癌临床诊断中的作用也日益凸显［6］。小分子RNA临床诊断的敏感性在89%以上，具有一定的应用价值，但是由于小分子RNA对结直肠癌患者的特异性相对较差，因此在推广方面受到了制约。

2.3 蛋白质检测

癌胚抗原、糖类抗原是当前结直肠癌血液检测中两种主要的蛋白质标志物。较于DNA检测，血液蛋白质的检测操作更为简单，获取检验结果的时间更快［7］。癌胚抗原是一种最早应用与结直肠癌临床中诊断的蛋白质标志物，且一直沿用至今。在结直肠癌D期患者的临床诊断中，由于其敏感性、敏感性可高达90%以上，因此被广泛用于结直肠癌患者的预后监测方面。CA 19-9、CA 195及CA 72-4等是较为常用的糖类抗原标志物，但是诊断敏感性与特异性均相对较低，通常采用将癌胚抗联合糖类抗原的方式检测，可提高疾病诊断的敏感性、特异性［8］。

3 讨论

结直肠癌的临床诊断、防治是一项任重而道远的工作。当前分子学诊断技术的应用给结直肠癌的诊断、治疗带来了一定的促进作用，但是同时也存在一些不利因素。因此，应对分子学标志物进行不断的研究，以多标志物联合诊断、发掘新的标志物、创新检测技术作为突破点，不断提高分子学诊断的临床诊断价值。

参考文献

［1］ 李道娟，李倩，贺宇彤. 结直肠癌流行病学趋势［J］. 肿瘤防治研究，2015，42（3）：305-310.

［2］ 李青，陈英剑，胡成进. 结直肠癌与人组织激肤释放酶关系的研究进展［J］. 国际检验医学杂志，2014，35（19）：2658-2661.

［3］ 邓丽，陈诚，胡丹，等. 以TF为靶点的裸DNA疫苗脾内转染对结直肠癌的免疫抑制作用［J］. 中国病理生理杂志，2015，31（2）：289-295.

［4］ 陈岚，肖飞，孙铭钧，等. 结直肠透明细胞癌的临床病理观察及分子生物学特点［J］. 诊断病理学杂志，2015，22（4）：212-216，232.

［5］ 李悠然，侯毅，谷云飞，等. Wnt/β-catenin信号通路在结直肠癌中的研究进展［J］. 世界华人消化杂志，2015，23（12）：1930-1936.

［6］ 王燕，张金莉，彭莉萍，等. 结肠癌转移相关潜在微小RNA（miRNA）的分离与鉴定［J］.遵义医学院学报，2015，38（5）：479-485.

［7］ 陈媛媛，程勃然，王振盟，等. 循环肿瘤细胞的检测在结直肠癌中的应用［J］. 中华临床医师杂志（电子版），2014，8（9）：1758-1762.

［8］ 张观坡，柏愚，李兆申. 结直肠癌早期诊断的分子生物学研究进展［J］. 国际消化病杂志，2015，35（4）：247-250.

【中图分类号】R753.3+7

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9308（2016）16-0025-03

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.16.015

作者单位：湖南省益阳医学高等专科学校生物化学教研室，湖南 益阳413000

Research on Molecular Biological Diagnosis of Colorectal Cancer

OUYANG Fangdan GUO Jinxia LIU Rong Department of Biochemistry，Yiyang Medical College， Yiyang Hu'nan 413000， China

［Abstract］In recent years， the attention of colorectal cancer has increased gradually with the incidence of colorectal cancer.Early diagnosis is the key to reducing the condition of the disease and the death of the disease，This article reviews the progress of molecular biology diagnosis of colorectalcancer，To provide reference for the current clinical diagnosis of colorectal cancer.

［Key words］Colorectal cancer， Molecular marker， DNA， RNA， Protein