甲醛固定与微波固定在消化道内分泌细胞免疫组织化学染色中的比较

李明华　史鹏飞



甲醛固定与微波固定在消化道内分泌细胞免疫组织化学染色中的比较

李明华1史鹏飞2

【摘要】目的 探讨微波固定在消化道内分泌细胞免疫组化染色中的方法。方法 应用不同强度的微波辐射与常规福尔马林方法固定组织，并用石蜡切片免疫组化染色观察。结果 常规福尔马林固定经抗原修复后，经染色内分泌细胞呈棕黄色，不经抗原修复内分泌细胞能着色，用微波辐射低档达45℃、55℃、70℃固定的组织都能被着色。结论 微波固定组织切片染色效果优于常规福尔马林固定组织，缩短固定时间，微波固定的材料能很好的保存抗原。

【关键词】微波；石蜡切片；消化道；内分泌细胞

作者单位：1 462000漯河医学高等专科学校基础医学部；2 462000漯河市中心医院创伤骨科

微波辐射能使液体中极性分子高频振动，增加液体分子间的摩擦和碰撞，加快液体内部迅速产热和某些化学反应。许多学者利用此原理进行了微波辐射固定组织的实验[1-4]，均取得良好的效果。但微波辐射固定某些特定组织在免疫组化染色中的具体方法报道较少，为了拓展微波在组织切片中的应用，探讨微波辐射固定胃肠内分泌细胞在免疫组化中的具体方法，比较甲醛与微波固定的不同。微波固定比常规固定时间短，提高了免疫组织化学对基础、预防、临床和军事医学的研究都有重要的价值，具体报道如下。

1　材料与方法

1.1材料与主要仪器

对照组1～4为蟾蜍胃，对照组5～8为蟾蜍小肠，实验组1～6为蟾蜍胃，辐射仪器为海尔牌H-R 7 751 MS型家用微波炉（750 W，分6档），0.01 mol/LPBS液（pH 7.4），0.01 mol/L，pH 6.0柠檬酸缓冲液（CB），羊血清和二抗Maixin试剂（北京博奥森生物技术有限公司），一抗（胃泌素，福州迈新生物技术开发有限公司；5-HT，博士德生物工程有限公司），DAB显色试剂盒（试剂A浓缩缓冲液，试剂B浓缩DAB溶液，试剂C浓缩过氧化氢溶液）。

1.2固定方法

将材料分成14个组，8个对照组用常规福尔马林固定，6个实验组用微波辐射，先用生理盐水进行测试，找出符合实验设计的微波辐射档次和恰当的辐射时间。微波辐射方法：将实验组1～6材料放于小白广口瓶（容量60 ml）内加20 ml生理盐水，而后放在内盛400 ml水的玻璃器皿上方并一同放入微波炉内，实验1、2组，水+微波达45℃，实验3、4组，水＋微波达55℃，实验5、6组，水+微波达70℃。

2　结果

2.1对照组

组织结构与透明：胃肠壁组织结构完整，透明度良好，各类细胞均有一定程度的收缩。结缔组织内常有较大的空隙，腺管腔扩大，肠黏膜上皮间有一定裂隙。组织着色：对照组的内分泌细胞经免疫组化染色呈棕黄色，结缔组织与其他的结构不着色。对照组1、3、5、7比对照组2、4、6、8效果更明显。

2.2实验组

实验组3、4组织结构与透明：胃壁组织无损伤，基本透明，细胞无收缩，胞质均匀，胞间隙与各腺管腔正常，胞间隙清晰，内分泌细胞正常，透明清晰。组织着色：内分泌细胞着色比对照组着色深，其他细胞不着色。从整体效果看，组织完整性好，细胞形态好，内分泌细胞着色深，效果优于对照组。实验组5、6组织透明性好，胃壁黏膜表层有损伤，细胞膨胀，免疫组化染色内分泌细胞着色。结缔组织与其他组织不着色。实验组1、2胃壁黏膜多与其他层次脱离，内分泌细胞也可染色，透明较差。

3　讨论

通过以上实验组5、6提示胃黏膜浅层损伤，结缔组织损伤和内分泌细胞膨胀可能是微波辐射过量所致。实验组1、2提示胃黏膜与其他组织脱离，组织透明不良，可能是组织固定不够所致。实验组3、4组织结构完整性与染色均良好，提示单独微波辐射能良好的固定内分泌细胞，微波达55℃是理想的微波辐射量。组织完整性好，透明好，细胞无损伤，无收缩，胞质均匀，经免疫组化染色鲜明。常规福尔马林固定使细胞有一定的收缩，能使内分泌细胞着色，而微波辐射固定既能保持细胞正常的形态和结构，经免疫组化染色又能使内分泌细胞着色。说明微波辐射既能良好的固定内分泌细胞，又能很好的保护组织细胞的形态和结构。

由于当前对甲醛固定组织所发生的反应，尤其对蛋白质的立体构象会发生的影响尚不十分清楚，导致对抗原修复的机制也不很清楚。可能的机制主要是：（1）由于甲醛固定可使蛋白与甲醛、蛋白与蛋白、蛋白与核酸之间通过甲基化桥形成交联，抗原决定簇被遮蔽，可通过高温、盐缓冲液使交联的蛋白水解，断开交联[5]。（2）组织用甲醛固定时，会形成蛋白-甲醛-钙复合体，并遮蔽了抗原决定簇，可通过高温使钙离子释放，并与修复液中的螯合物-柠檬酸结合，暴露抗原决定簇[5]。（3）还有观点认为[5]，经甲醛固定后，可形成甲醛化蛋白的三维空间，加热后可恢复蛋白质自然的三维空间，使抗原得以修复。甲醛固定使抗原决定簇遮蔽，微波固定，不存在抗原决定簇遮蔽。

综上所述，材料经微波辐射后经免疫组化染色整体效果优于对照组，这些方法不仅缩短了制片时间，而且在临床疾病研究有了重大的突破。更重要的是还在理论上提示经抗原修复与不经修复都着色，微波处理也着色。

参考文献

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Comparison the Formaldehyde Fixed and Microwave Fixed in Gastrointestinal Endocrine Cells of Immunohistochemistry

LI Minghua1SHI Pengfei21 Faculty of Basic Medicine, Luohe Medical Junior College, Luohe 462000, China. 2 Traumatic Orthopedics Department, Luohe City Central Hospital, Luohe 462000, China

[Abstract]Objective To explore the formaldehyde fixed and microwave fixed gastrointestinal endocrine cells in the immune group. Methods Different intensity of microwave radiation and conventional method of formalin fixed, and paraffin sections immunohistochemical staining observed. Results Formalin fixed by conventional antigen restored, the endocrine cells were stained brown, without antigen endocrine cells can not stained,with microwave radiation of low-grade 45℃, 55℃, 70℃ fixed tissue can be contracted. Conclusion The staining effects of the paraffin section prevail over the paraffin section from routine formalin fixated specimens. The method above make the time of fixating tissue shorten, microwave fixed material could save antigen better.

[Key words]Microwave, Paraffin sections, Digestive tract, Endocrine cell

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.02.083

【文章编号】1674-9308（2016）02-0116-02

【中图分类号】R364.7

【文献标识码】A