普洱茶对牛切牙抗酸脱矿的动力学研究

田富明，杨华甫，梁迎东，陈 莹，蓝 海

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

普洱茶对牛切牙抗酸脱矿的动力学研究

田富明，杨华甫，梁迎东，陈 莹，蓝 海*

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

目的：研究不同浓度的普洱生茶、熟茶对牛切牙脱矿速率的影响。方法：运用恒pH法，通过动力学实验比较经去离子水、NaF、不同浓度的普洱生茶、熟茶处理过的牛切牙抗酸脱矿作用的强弱。结果：脱矿速率曲线表明，NaF组消耗HAc的量最少，脱矿速率最慢，96 mg∕mL生茶组、6 mg∕mL和12 mg∕mL的熟茶组较去离子水组脱矿速率慢，同浓度的熟茶组消耗的HAc的量少于生茶组。结论：高浓度生茶组、低浓度熟茶组都具有抗酸脱矿作用，但作用不及NaF组，提示熟茶的防龋作用强于生茶。

普洱茶；抗酸；脱矿；动力学

龋齿是牙体组织脱钙、有机质分解牙体解剖形态溶解破坏引起的口腔常见疾病〔1〕，它的发生与细菌、口腔环境、宿主的行为习惯等多种因素都有着紧密的联系〔2〕。早期采用的抗生素类（如青霉素、红霉素、四环素或螺旋霉素等）虽然具有一定的防龋效果，但长期使用可引起口腔和肠道细菌群失调从而导致其他疾病。氟化物防龋是研究最广且被认为最有效的方法，但其应用还是有诸多局限，这种局部用氟的临床疗效和不良反应（氟中毒）尚存疑问〔3〕。

中国盛产茶叶，同时也是茶文化的发源地。刘鑫等〔4〕在不同种类茶对牛牙釉质脱矿影响的体外研究中，得出普洱茶中富含茶多酚，能抑制龋齿菌的生长，增加釉质的抗酸能力。本文通过动力学研究〔5〕不同浓度的生茶、熟茶处理牛切牙，比较普洱生茶、熟茶抗酸脱矿作用的强弱。

1 材料

1.1仪器BCD-218C冷藏冷冻箱（长沙中意集团股份有限公司）；SB25-120超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；PHS-25C数字酸度计（上海鹏顺科学仪器有限公司）；电子天平Ohaus Corporation（奥豪斯仪器上海有限公司制造）；雷磁ZDJ-4A自动电位滴定仪（上海精科仪器有限公司）；雷磁E-201C型pH复合电极（上海精科仪器有限公司）。

1.2药材玖妙普洱茶（云南大叶种晒青毛茶与云南大叶种晒干毛茶），购于大理市下关镇沃尔玛超市，由普洱市圣普茶叶有限公司生产的圣邦普洱茶礼盒，生产日期2011年5月28日。

1.3试剂HAc、C2H5OH、C2H6OH、KCl，脱矿液：0.15 mol∕L KCl，用HAc调pH至4.00〔6〕。以上试剂均为分析纯。

2 方法

2.1普洱茶实验液的制备称取9.6 g的生茶放于烧杯中，加入蒸馏水，加热煮沸5 min，冷却至室温，过滤得滤液100 mL，即为浓度为96 mg∕mL的生茶溶液，倍比稀释后，得到浓度分别为48、24、12、6 mg∕mL生茶溶液。熟茶溶液的制备方法同生茶溶液的制备方法。

2.2牛切牙标本的制备市场上买新鲜拔出的牛切牙100颗，去除牙根、牙髓和软组织，用注射器抽水冲洗干净，用0.9%的生理盐水超声40 min，自然晾干。从100颗牙齿样品中筛选出72颗无裂痕，无龋齿和氟斑的牛切牙，再随机将72颗牛切牙随机分为12组，每组6颗，分别用去离子水、氟化钠、生茶（96、48、24、12、6 mg∕mL）、熟茶（96、48、24、12、6 mg∕mL）各100 mL浸泡48 h后自然晾干，最后把经过上述处理的牙齿粉碎成20目的细粉，密封，置于-20℃的冰箱中保存备用。

2.3抗酸脱矿在自动电位滴定仪恒温杯中加入75 mL的脱矿液，置于（37±0.1）℃恒温，再准确称取96 mg∕mL的生茶组牙粉10 mg，放入上述的脱矿液中，用自动电位滴定仪向上述脱矿液中滴加99.09 mmol∕L的醋酸，并用恒pH法控制pH为4.0，每10 min定时记录1次醋酸的加入量，记录至150 min，重复3次。醋酸的加入量与时间的关系曲线即为96 mg∕mL的生茶组牙粉的脱矿动力学曲线。同样的方法绘制生茶组牙粉（48、24、12、6 mg∕mL）、熟茶组牙粉（96、48、24、12、6 mg∕mL）、去离子水组牙粉、NaF组牙粉的脱矿动力学曲线。

3 结果

3.1 HAc体积消耗比较NaF组，96 mg∕mL的生茶组，6、12 mg∕mL的熟茶组HAc的消耗量都比去离子水组消耗的少，差异具有统计学意义（P＜0.05）；同浓度的生茶组和熟茶组相比较，生茶组消耗的HAc比熟茶组消耗的多，且消耗HAc的量差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组脱矿消耗HAc的体积（）

表1 各组脱矿消耗HAc的体积（）

注：与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.05；生茶与熟茶组间比较P＜0.05。

消耗HAc的体积∕mL 1.684±0.263 0.872±0.015*1.758±0.134 1.764±0.007 2.418±0.493 1.870±0.530 1.476±0.675**1.222±0.175**1.381±0.030**2.823±0.753 3.293±0.164 2.197±0.174组别去离子水组NaF组测定次数生茶■■■■ ■■■■■ ■ ■■■■■熟茶■■■■ ■■■■■ ■ ■■■■■6 mg∕mL 12 mg∕mL 24 mg∕mL 48 mg∕mL 96 mg∕mL 6 mg∕mL 12 mg∕mL 24 mg∕mL 48 mg∕mL 96 mg∕mL 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3时间∕min 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150

3.2脱矿动力学曲线的考察绘制生茶组、去离子水组、NaF组消耗HAc与时间的关系曲线，见图1。结果表明，消耗HAc越多，脱矿速率越快，抗酸能力越弱。脱矿速率由高到低分别为低浓度生茶组、去离子水组、高浓度生茶组、NaF组，其中抗酸作用最强的是NaF组。

图1 生茶组、去离子水组、NaF组脱矿动力学曲线

同法绘制熟茶组、去离子水组、NaF组消耗HAc与时间的关系曲线，见图2。脱矿速率由高到低分别为高浓度熟茶组、去离子水组、低浓度熟茶组、NaF组，其中抗酸作用最强的是NaF组。

图2 熟茶组、去离子水组、NaF组脱矿动力学曲线

4 讨论

牙釉质是由釉柱构成的无细胞结构且高度矿化的结构，而釉柱的化学结构是以富含钙和磷的羟基磷灰石晶体为主〔7〕。在正常生理条件下口腔唾液pH为6.6～7.1，但随着牙菌产酸增加，口腔唾液pH降低至5.5以下时〔8〕，牙齿中的钙、磷被H+置换，使得羟基磷灰石晶体不稳定甚至崩解。抗酸脱矿就是为了防止牙齿中羟基磷灰石晶体的崩解。

普洱茶是原产于我国西双版纳及思茅一带的一类历史名茶〔9〕，是由大叶种茶树的树叶经加工制成，根据加工方式的不同可分为生茶与熟茶。生茶是指鲜茶叶经过杀青、揉捻、干燥而制成的晒青毛茶，而熟茶是指鲜茶叶经过杀青、揉捻、干燥、发酵（潮水渥堆再晒干）而制成的晒干毛茶〔10〕。普洱茶中的防龋主要成分为氟、茶多酚。茶多酚的主要成分是儿茶素、黄酮类、黄酮醇类、花青素类〔11〕等。茶多酚的防龋机制主要体现为：通过抑制致龋菌的生长发育和抑制不溶性葡萄糖的合成以减少细菌的黏附、聚集，从而控制菌斑，其中后者是预防龋病的关键〔12〕。普洱茶里的氟主要以氟化物的形式存在，氟有保护牙齿的事已达成共识，适量的氟能形成牙釉质使羟基磷灰石生成硬度更高、稳定性更好的氟磷灰石，增强其抗酸性，从而起到防龋的作用。晒青毛茶制成熟茶的过程中，虽然水溶性茶多酚含量下降〔13〕，但熟茶的氟含量是生茶的32.7倍〔14〕，所以低浓度的熟茶就具有明显的抗酸脱矿作用。高浓度生茶的抗酸作用可能和茶多酚有关，浓度越高，茶多酚含量越高。另外，高浓度的熟茶抗酸作用不明显可能和茶叶中的茶黄素、没食子酸有关（具有酚羟基消耗HAc）。由于牙齿中的脂、糖、蛋白质等的含量不足5%，且牙齿在脱矿处理时脂、糖、蛋白质等物质没有明显变化，故而可以排除这些物质的影响。

综上所述，高浓度的普洱生茶具有抗酸脱矿作用，低浓度的普洱熟茶具有抗酸脱矿作用，提示熟茶的防龋作用优于生茶。

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Research on Kinetics of Demineralization and Anti Acid of Pu'er Tea on Bovine Incisors

Tian Fuming,Yang Huafu,Liang Yingdong,Chen Ying,Lan Hai*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To study the influence of different concentrations of Pu'er Tea,ripe tea on the demineralization rate of bovine incisors.Methods:Through constant pH method,kinetics experiment was used to compare the effect of anti acid and demineralization of bovine incisors processed by deionized water,NaF,different concentrations of raw tea and ripe tea.Results:Demineralization rate curve shows that NaF group consumed the least amount of HAc and had the lowest demineralization rate;raw tea group（96 mg∕mL）, ripe tea group（6 mg∕mL,12 mg∕mL）had the low demineralization rate comparing with the deionized water group and the ripe tea consumed less HAc comparing with raw tea in the same concentrations.Conclusion:NaF group,enjoyed the best effect of anti acid and demineralization compared with the high concentration of raw tea group,low concentration of ripe tea group,which shows that ripe tea has better anti-caries effect than raw tea.

Pu'er tea;acid resistant;demineralization;kinetics

R285

A

2096-2266（2016）12-0047-03

10.3969∕j.issn.2096-2266.2016.12.011

（责任编辑 李 杨）

大理大学大学生科研基金资助项目（KYSX20155096）

2015-11-30

2016-01-10

田富明，2012级药物制剂专业本科生. *通信作者：蓝海，教授.