丹参注射液对叠氮化钠诱导的心肌细胞损伤的保护作用

胡 君丁玉娟熊存全周红成

1盐城卫生职业技术学院 江苏省盐城市 224005 2盐城市第三人民医院 江苏省盐城市 224001

丹参注射液对叠氮化钠诱导的心肌细胞损伤的保护作用

胡 君1丁玉娟2熊存全1周红成1

1盐城卫生职业技术学院 江苏省盐城市 224005 2盐城市第三人民医院 江苏省盐城市 224001

目的：研究丹参注射液对叠氮化钠损伤心肌细胞H9C2的保护作用。方法：建立叠氮化钠诱导心肌细胞H9C2氧化损伤的模型。将H9C2细胞分为空白对照组、叠氮化钠模型组，叠氮化钠+丹参酮ⅡA低剂量组（50μg/ml），叠氮化钠+丹参酮ⅡA高剂量组（200μg/ml），CCK8法检测心肌细胞活性的变化。结果：丹参注射液能显著减轻由叠氮化钠诱导的H9C2细胞损伤，提高心肌细胞的活性。结论：丹参注射液可保护心肌细胞H9C2免受氧化损伤。

丹参注射液；叠氮化钠；心肌细胞；细胞活性

在缺血性心脏病的治疗过程中，冠状动脉内溶栓及冠脉搭桥手术等被广泛使用，但同时心肌缺血再灌注损伤引起的问题也日益突出[1-2]。研究发现，缺血再灌注时产生大量的氧自由基（活性氧），诱导心肌细胞发生氧化损伤[3]。传统中药丹参是一种天然抗氧化剂，具有扩张血管、改善微循环、调节内分泌等作用[4]。本实验用叠氮化钠制作心肌细胞的氧化损伤模型，观察不同浓度的丹参注射液对叠氮化钠诱导的心肌氧化损伤的保护作用，为研究丹参的临床药理作用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

L-DMEM、胎牛血清、胰蛋白酶、叠氮化钠、注射用丹参、CCK8试剂盒。

1.2 实验方法

1.2.1 H9C2细胞培养

37℃、5%CO2条件下，H9C2心肌细胞培养在含10%胎牛血清的L-DMEM培养基中，每2d换液一次。当细胞生长至融合度达90%时，0.25%胰酶消化传代，调整细胞密度为5×104/ml，接种到96孔细胞培养板上。

1.2.2 丹参注射液处理

将接种至96孔板上的H9C2心肌细胞随机分为4组：空白对照组、叠氮化钠模型组（50μmol/L叠氮化钠）、丹参注射液低剂量组、高剂量组（分别加入50μg/ ml、200μg/ml的丹参注射液预处理细胞1 h，再加入50μmol/L叠氮化钠孵育6h）。

1.2.3 CCK8检测细胞的存活率

向处理后的H9C2细胞，每孔加入10 μl CCK8溶液，放置到培养箱中培养2h，酶标仪测定450 nm处的吸光度值。细胞活性的计算公式：细胞活性=[（实验孔OD值-空白孔OD值）/（对照孔OD值-空白孔OD值）]×100%。

1.2.4 统计分析

应用SPSS16.0进行数据分析，p<0.05具有统计学差异。

2 结果

与对照组相比，叠氮化钠模型组细胞活性明显下降，具有统计学意义；与模型组相比，200μg/ml丹参注射液处理后，细胞活性显著增加，但50μg/ml丹参注射液对H9C2的保护作用不明显，与模型组相比没有统计学意义。

3 讨论

氧化应激介导的心肌细胞凋亡是缺血再灌注损伤的主要机制[5]。叠氮化钠，线粒体有氧呼吸链中细胞色素c氧化酶的特异性抑制剂，可诱导氧化磷酸化和细胞呼吸异常，常被用做氧化应激下心肌细胞损伤模型的建立。丹参是传统中药，具有活血通脉、消炎止痛之功效，包含脂溶性和水溶性两部分。有文献报导丹参制剂能显著提高心肌细胞中超氧化物歧化酶活性，降低乳酸脱氢酶和丙二醛含量，降低细胞中脂质过氧化物浓度，达到清除氧自由基的作用[6]。本实验用不同浓度的丹参注射液对心肌细胞进行预处理发现，200μg/ml丹参注射液可显著改善由叠氮化钠诱导的心肌细胞损伤，提高受损心肌细胞的活性，提示丹参注射液可减少氧化应激诱导的细胞死亡，维持心肌细胞活力，从而最终改善心功能状态。

[1]侯少科,郝丽娜,李建辉等.联合应用贝那普利与丙泊酚对体外循环下冠脉搭桥术患者心肌缺血再灌注损伤的影响[J].中国老年学杂志.2015;35:5508-5510.

[2]Yao T,Ying X,Zhao Y,et al. Vitamin D receptor activation protects against myocardial reperfusion injury through inhibition of apoptosis and modulation of autophagy[J].Antioxid Redox Signal.2015;22(08):633-50.

[3]Bagheri F,Khori V,Alizadeh AM, et al.Reactive oxygen speciesmediated cardiac-reperfusion injury:Mechanisms and therapies [J].Life Sci.2016;165:43-55.

[4]Liu Y,Huang Y,Zhao C,et al. Salvia miltiorrhiza injection on pulmonary heart disease:a systematic review and metaanalysis [J].Am J Chin Med.2014; 42(06):1315-31.