CIK细胞疗法联合肝动脉化学治疗栓塞术治疗原发性肝癌的临床探究

李 娜 李 敏 冯 珉

·临床研究·

CIK细胞疗法联合肝动脉化学治疗栓塞术治疗原发性肝癌的临床探究

李 娜 李 敏 冯 珉

原发性肝癌(PLC)是临床常见的消化系统恶性肿瘤，早期发病较为隐匿，确诊时多为晚期。近年来其发病率呈上升趋势，中国PLC患者在全球中所占比例超过50%，且病死率较高，严重影响患者的生命健康[1]。目前肝动脉化学治疗栓塞(TACE)术广泛应用于PLC治疗中，可在一定程度上延长患者的生存时间，但术后复发率较高[2]。CIK细胞疗法通过细胞因子对肿瘤造成杀伤，也是临床治疗PLC的常用方法，但目前对于这两种方法联合使用的临床资料较少。本研究采用CIK细胞疗法联合TACE术治疗PLC，发现两种方法联合应用可有效提高患者的免疫力，临床治疗效果较好。

1 资料与方法

1.1 研究资料

选取2012年3月至2015年3月淄博市中心医院收治的PLC患者共90例，按照随机数字表法分为对照组和研究组(每组各45例)。研究组男32例，女13例，年龄39～75岁，平均年龄(52.36±3.24)岁；临床分期：Ⅰ期17例，Ⅱ期18例，Ⅲ期10例；肿瘤大体类型：巨块型15例，弥漫型19例，结节型11例。对照组男33例，女12例，年龄38～74岁，平均(52.41±3.31)岁；临床分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期17例，Ⅲ期12例；肿瘤大体类型：巨块型14例，弥漫型18例，结节型13例。两组患者性别、年龄、临床分期、肿瘤大体类型等一般资料的差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 纳入标准与排除标准

纳入标准：(1)本研究所有患者均知情同意；(2)经病理组织学检查确诊为PLC；(3)所有患者均未接受放射治疗、免疫治疗等其他治疗；(4)预计生存时间超过半年。排除标准：(1)具有严重凝血机制障碍；(2)转移性肝脏肿瘤、大量腹水以及消化道出血等严重并发症；(3)病毒性感染或酒精性肝病；(4)合并肺炎或传染性疾病，严重心、肝、肾等器质性疾病；(5)全身衰竭，不能进行股动脉插管的患者；(6)化学治疗禁忌证患者。

1.3 治疗方法

对照组：采用TACE术治疗。如在手术过程中出现肝动脉-肝静脉瘘，可在注入碘油之前使用明胶海绵进行封堵。化学治疗药物及剂量使用情况如下：吡柔比星20～40 mg、丝裂霉素4～8 mg、羟基喜树碱20～24 mg、顺铂60～80 mg。栓塞后对肝总动脉进行造影处理，栓塞满意后可将RH管拔出。对穿刺点进行15 min压迫止血处理并使用弹力绷带包扎，行穿刺部位肢体应制动24 h。第1次与第2次治疗间隔时间为1个月，根据患者具体病情决定治疗方案及剂量，最多接受5次治疗。3个月后对治疗效果进行评估。

研究组：在对照组基础上联合CIK细胞疗法治疗。(1)采集单个核细胞：使用采血机对患者外周血单个核细胞(PBMC)进行采集，数量以1×109～4×109为宜，总容积为40～70 mL。在符合要求的实验室中，经Ficoll淋巴分离液梯度离心，用毛细管吸取环状乳白色单个核细胞，用PBS缓冲液悬浮后再次进行离心，洗涤3次得到纯净PBMC，数量为1×107～3×107。吸取新鲜血浆以供培养树突状细胞(DC)-CIK细胞。(2)制备CIK细胞：使用无血清培养基将PBMC细胞密度调整为4×106～6×106，将其置于CO2(浓度为5%，温度为37℃)培养箱中，培养2 h后将非贴壁细胞收集，并将其密度调整为2×106～3×106/mL，加入干扰素γ 1000 U/mL，24 h后加入重组人白细胞介素-2(rhIL-2)1000 U/mL、CD3McAb 50 ng/mL和白细胞介素-1(IL-1)100 U/mL继续培养，密切观察每日的细胞情况。(3)培养CIK细胞：将制备好的CIK细胞置于培养液中进行培养，直至培养成熟。(4)回输：收集培养成熟的CIK细胞，进行细菌、内毒素以及真菌等检测，合格后加入生理盐水进行离心和洗涤(重复3次)，将所得细胞悬浮于生理盐水中，适当加入人血白蛋白，混合均匀后于1 h内静脉滴注患者体内。回输过程中对患者生命体征进行严密监视，可根据患者病情给予抗过敏、药物降温等处理。隔天回输1次，如出现复发等情况，可根据患者病情适当延长治疗时间，4次为1个疗程，共治疗2个疗程。

1.4 观察指标

(1)肝功能指标：分别于治疗前、治疗后观察肝功能变化情况，包括天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。(2)临床疗效：治疗结束后参照实体瘤疗效判定标准进行判断：靶病灶消失，没有出现新病灶，常规检查显示肿瘤标志物正常为完全缓解(CR)；靶病灶最大直径之和减少程度超过30%为部分缓解(PR)；靶病灶最大径之和增加幅度未超过20%，或减小程度未超过30%为疾病稳定(SD)；靶病灶最大直径之和增加幅度超过20%或者有新病灶出现为疾病进展(PD)。以上各种症状至少需维持4周以上，总有效率为CR、PR、SD之和。(3)观察外周血T细胞亚群：分别于治疗前、治疗1个月后、治疗结束时在同一时刻采用流式细胞仪进行检测，包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+。(4)不良反应发生率：治疗期间观察两组患者是否出现骨髓抑制、肝功能受损、发热、过敏、皮疹、变态反应等不良反应。

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 肝功能比较

治疗前两组患者的AST、TBil、ALT水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，两组治疗后的指标显著高于治疗前(P<0.05)，治疗后两组数据比较的差异无统计学意义(P>0.05)，详见表1。

表1 两组患者肝功能的比较

注：与治疗前相比较，aP<0.05

2.2 临床治疗效果比较

研究组的总有效率显著高于对照组，且差异具有统计学意义(P<0.05)，详见表2。

表2 两组患者临床治疗效果的比较

2.3 外周血T细胞亚群变化的比较

两组患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+在治疗前的差异无统计学意义(P>0.05)；两组患者治疗1个月后以及治疗结束时的上述指标与治疗前相比较，差异具有统计学意义(P<0.05)，研究组的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均较治疗前显著升高(P<0.05)，而CD8+则显著降低(P<0.05)；对照组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均较治疗前显著降低(P<0.05)，而CD8+则显著升高(P<0.05)；治疗结束时，研究组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+显著高于对照组(P<0.05)，CD8+显著低于对照组(P<0.05)，详见表3。

2.4 不良反应发生率

研究组的不良反应发生率显著低于对照组，且差异具有统计学意义(P<0.05)，详见表4。

表3 两组患者外周血T细胞亚群变化的比较

注：与治疗前相比较，aP<0.05；与治疗1个月相比较，bP<0.05；与对照组相比较，cP<0.05

表4 两组患者不良反应发生率比较

3 讨论

目前TACE术在临床上被广泛应用于治疗PLC，该方法主要利用新生血管，在充分了解动脉血供特点的情况下，在肿瘤供应血管内注入化学治疗药物以及栓塞剂等，通过阻断新生血管的供血达到促使肿瘤细胞坏死的目的[3]。采用TACE术治疗后可有效改善患者的生活质量，延长生存期。陈挺松等[4]研究显示，采用TACE术对60例PLC患者进行治疗，发现总有效率为62.54%。本研究结果显示，对照组治疗的总有效率为64.44%，与上述研究结果基本一致。但此方法仍存在一定的不足，如化学治疗药物等不能完全促使肿瘤组织坏死，且肿瘤分支血供建立的速度极快，治疗后肿瘤细胞的增殖和侵袭能力会更强，将对患者的免疫功能造成严重损害[5]。化学治疗后患者易产生骨髓抑制、肝功能损伤等不良反应，将进一步损伤患者的免疫功能[6]。张艳梅等[7]研究结果指出，采用TACE术治疗后，患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均较治疗前显著降低，而CD8+显著升高。本研究结果显示，对照组治疗1个月后以及治疗结束时CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均较治疗前显著降低，CD8+显著升高，AST、TBil、ALT的水平显著升高，不良反应发生率为31.11%，提示TACE术可改善免疫功能，但安全性仍存在局限。

CIK细胞疗法可在不损害免疫系统的前提下，对肿瘤细胞具有直接杀伤作用，可有效清除残留病灶，对PLC的复发有一定预防作用，可在很大程度上改善患者的生活质量[8]。CIK细胞可通过黏附因子途径与肿瘤细胞相结合，分泌大量可穿透靶细胞膜的颗粒(如释放颗粒酶等)，从而达到裂解肿瘤细胞的目的[9]。CIK细胞在体外进行培养，可分泌出直接抑制肿瘤的多种细胞因子[如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等]，这些细胞因子对机体免疫系统的反应性具有调节作用，可间接对肿瘤细胞进行杀伤[10]。此外，CIK细胞对肿瘤细胞凋亡基因具有较强的活化作用，可促使肿瘤细胞凋亡[11]。通过回输将CIK细胞注入机体内，通过肿瘤抗原刺激，其可向毒性T细胞进行转变，且具有杀伤活性，增殖并活化T细胞，同时充分发挥抗肿瘤作用[12]。佟立权等[13]的研究采用TACE术与CIK细胞疗法联合治疗90例PLC患者，发现经治疗后患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均较治疗前显著升高，CD8+显著降低。这与本研究的结果相一致。本研究还指出，研究组的总有效率显著高于对照组，且不良反应发生率显著低于对照组，提示两种方法的联合使用相较于单一使用TACE术的效果更好，且不会加重肝功能损伤，可有效提高临床治疗的效果。

综上所述，CIK细胞疗法联合TACE术治疗PLC相较于单纯使用TACE术的效果更好，可有效提高患者的机体免疫力，值得临床使用和推广。

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(本文编辑：周骏)

255000 山东省淄博市中心医院内一科

10.3969/j.issn.1673-534X.2016.06.012

2016-07-10)