Ras相关区域1A基因异常甲基化与甲状腺癌关联的Meta分析

马建赢 胡如进 柯立池 冯红芳 刘 钢 唐燕华

(鄂东医疗集团黄石市中心医院(湖北理工学院附属医院)乳甲外科，湖北 黄石 435000)

Ras相关区域1A基因异常甲基化与甲状腺癌关联的Meta分析

马建赢 胡如进 柯立池 冯红芳 刘 钢 唐燕华1

(鄂东医疗集团黄石市中心医院(湖北理工学院附属医院)乳甲外科，湖北 黄石 435000)

目的 应用meta分析的方法对比已经在国内外公开发表的关于Ras相关区域1A(RASSF1A)基因异常甲基化与甲状腺癌的临床综合研究。方法 采用Cochrane系统评价方法，计算机检索pubmed，EMBASE,MEDLINE,Cochrane协作网数据库，中国生物医学文献数据库，万方数据库等数据库的文献，收集有关比较RASSF1A基因异常甲基化与甲状腺癌的对照研究实验，并评价入选研究的质量。结果 共纳入符合标准的文献11篇，共803例患者，且11篇均为临床对照实验(CCT)。Meta分析结果显示：与对照组相比，甲状腺乳头状癌组的RASSF1A基因甲基化率高于对照组(95%CI：1.51～11.27，P<0.05)。但RASSF1A基因甲基化与甲状腺癌的性别无统计学差异(OR=0.61，95%CI：0.21～1.35，P>0.05)。RASSF1A基因甲基化在50岁分界组无统计学意义，但RASSF1A基因甲基化在40岁分界组有统计学意义，即>40岁组RASSF1A基因甲基化表达增加(95%CI：1.38～6.73，P<0.05)。RASSF1A基因甲基化与甲状腺癌的浸润与转移有统计学差异(OR=4.03，95%CI：1.39～11.75，P<0.05)。结论 RASSF1A甲基化是甲状腺乳头状癌的危险因素，在甲状腺乳头状癌的发生、发展中起到重要的作用；RASSF1A甲基化与性别无明显相关性，甲状腺癌浸润转移组的RASSF1A基因甲基化阳性率高于与无浸润转移组，但与年龄相关性仍然需要大样本多中心的研究。

甲状腺肿瘤；乳头状甲状腺癌；DNA甲基化；RASSF1A;Meta分析

甲状腺癌根据组织类型不同分为甲状腺乳头状癌(PTC)、甲状腺滤泡状癌(FTC)、髓样癌(MTC)、未分化癌(UTC)。其中PTC是最常见的一种类型。国内数据提示PTC占成人甲状腺癌的60%和儿童甲状腺癌的全部。美国一项研究数据提示PTC占所有甲状腺癌的85%〔1〕，尽管PTC恶性程度较低，但是近年来甲状腺癌的发病率越来越高〔2〕。DNA甲基化被认为与PTC有密切的关系〔3〕。本文采用Meta分析方法，系统性比较Ras相关区域1A(RASSF1A)基因异常甲基化与甲状腺癌的关联，以期对于高危人群的筛选以及甲状腺癌的早诊断起到积极的参考作用。

1 材料与方法

1.1 文献纳入与排除标准

1.1.1 文献纳入标准 (1)研究类型：临床对照实验(CCT)或随机对照试验，若数据符合病例对照设计的要求亦可，语种与时间不受限制；(2)研究样本：甲状腺癌组织标本均通过术后的病理检查确诊，对照组则为癌旁组织或者良性的甲状腺组织、正常的甲状腺组织；(3)所有研究关于RASSF1A基因甲基化与PTC相关性的文献；(4)所有纳入的文献都有数据提供，若数据不全，则联系作者获取相关数据。

1.1.2 文献排除标准 (1)甲状腺癌的诊断无病理诊断作为依据；(2)缺乏明确的RASSF1A基因甲基化的检测方法；(3)综述，动物实验，案例报道除外；(4)重复发表，资料不完整的文献；(5)非对照试验研究。

1.2 检索策略 计算机检索Cochrane 图书馆、中国知网、万方数据库、CBM、pubmed及Medline、EMBASE数据库，收集2016年2月以前发表的关于RASSF1A基因异常甲基化与甲状腺癌关联的文献，中文检索词包括：甲状腺肿瘤；PTC；基因；DNA甲基化；RASSF1A；Meta分析。英文检索词包括：thyroid cancer;papillary thyroid carcinoma;gene;DNA methylation;RASSF1A;meta analysis。

1.3 资料提取 2名研究者独立获取相关信息，然后交叉互相核查结果。如果遇分歧，则协商解决。内容主要包括基本信息(题目、出处、第一作者、单位，发表日期)、研究方法学特征、研究对象特征(样本量的大小、年龄、性别、病理组织学类型、肿瘤分期)等。

1.4 文献质量评价 随机对照试验参照Cochrane Reviewer Handbook 5.1偏倚风险评估标准进行质量评价，包括随机序列生成、分配隐藏、盲法、数据不完整、选择性报告结果、其他可能的偏倚等。非随机对照研究用Cochrane协作网推荐的偏倚风险评估方法(NOS)进行质量评价，包括组间可比性和结果评价。如NOS量表评分≥6分，则认为该质量较高。此评价由2名研究者单独进行，如遇分歧则通过讨论或由新的第3名研究者解决。

1.5 统计学方法 采用RevMan 5.3软件。二分类变量则采用优势比(OR)作为合并统计量；连续型变量采用加权均数差(WMD)或标准化均数差(SMD)作为合并统计量；计算95%可信区间(CI)。分析各研究间的异质性采用χ2检验，如研究结果间无异质性(P>0.05,I2<50%)，采用固定效应模型。如研究结果间存在异质性(P<0.05，I2>50%)，采用随机效应模型。当纳入的研究较多时，采用漏斗图检验发表偏倚。

2 结 果

2.1 文献纳入结果 计算机检索相关数据库检出相关文献1 489篇。通过阅读文题、摘要以及全文后，最终纳入11篇文献〔4～14〕，其中英文文献4篇，中文文献7篇。0篇随机对照试验，11篇CCT。见图1。

2.2 纳入Meta分析的文献基本情况 见表1。

2.3 纳入研究的文献的质量评价 见表1。

2.4 Meta分析结果

2.4.1 RASSF1A基因甲基化在PTC组与对照组表达的结果分析 11篇CCT〔4～14〕报道了RASSF1A基因甲基化在PTC组与对照组表达的情况。各项研究结果之间存在异质性(I2=79%，P<0.05)，采用随机效应模型合并统计量。结果显示：PTC组的RASSF1A基因甲基化率高于对照组(95%CI：1.51～11.27，P<0.05)。见图2。

2.4.2 RASSF1A基因甲基化与PTC性别的结果分析 3篇CCT〔8,10,14〕报道了RASSF1A基因甲基化与性别的关联分析。各研究结果间不存在异质性(I2=0%，P>0.05)，采用固定效应模型合并统计量。结果显示：RASSF1A基因甲基化与甲状腺癌的性别差异无统计学意义(OR=0.61，95%CI：0.21～1.35，P>0.05)。见图3。

图1 文献筛选途径

表1 纳入文献基本情况

图2 RASSF1A基因甲基化在实验组与对照组表达的Meta分析

图3 RASSF1A基因甲基化与甲状腺癌患者性别的关系

2.4.3 RASSF1A基因甲基化与年龄的结果分析 3篇CCT〔8，10，14〕报道了RASSF1A基因甲基化与年龄的关系，其中一篇报道的是>40岁和<40组，另外两篇研究的均是>50岁和<50岁组，将研究相同的进行分组统计，研究提示不存在异质性(I2=0%，P>0.05)，采用固定效应模型合并统计量。结果显示：RASSF1A基因甲基化与年龄差异无统计学意义(P>0.05)，即RASSF1A基因甲基化在50岁分界组无统计学意义。但总体存在统计学异质性，采用固定效应模型合并统计量，两组差异有统计学意义(95%CI：1.38～6.73，P<0.05)，即RASSF1A基因甲基化在40岁分界组有统计学意义，即>40岁组RASSF1A基因甲基化表达增加。见图4。

2.4.4 RASSF1A基因甲基化与PTC浸润与转移的结果分析 2篇CCT〔8,10〕报道了RASSF1A基因甲基化与PTC浸润与转移的关联分析。各研究结果间不存在异质性(I2=0%，P>0.05)，采用固定效应模型合并统计量。结果显示：RASSF1A基因甲基化与甲状腺癌的浸润与转移差异有统计学意义(OR=4.03，95%CI：1.39～11.75，P<0.05)，即可以认为甲状腺癌浸润转移组的RASSF1A基因甲基化阳性率高于与无浸润转移组。见图5。

2.5 发表偏倚 漏斗图分析提示纳入的研究潜在发表偏倚的风险。见图6。

2.6 敏感性分析 由于研究指标“RASSF1A基因甲基化在PTC组与对照组表达”存在异质性(I2=89%)，但是去除徐美容等〔8〕的研究后异质性显著降低(I2=41%)，且研究最终结果没有改变，仍然存在统计学意义(P<0.05)，去除徐美容等〔8〕研究后异质性为0，总体仍有统计学意义，表明纳入的文章质量良好。见图7。

图4 RASSF1A基因甲基化与年龄的关系

图5 RASSF1A基因甲基化与浸润与转移的关系

图6 RASSF1A基因甲基化在甲状腺乳头状癌组与对照组的结果分析的漏斗图

图7 敏感性分析

3 讨 论

甲状腺癌是临床上最多见的起源于甲状腺上皮细胞的内分泌系统恶性肿瘤，目前病因学不明确，随着表观遗传学的快速发展，人们越来越重视其在肿瘤的发生发展的重要作用。最近研究比较多的表观遗传学是DNA甲基化，DNA甲基化与癌基因，抑癌基因的转录有一定的关系，癌基因的去甲基化以及抑癌基因的高度甲基化都可能导致肿瘤的发生并可能促进肿瘤的快速发展。国内外研究显示，甲状腺肿瘤与p53,p16,RASSF1A等相关基因有关联，其中RASSF1A为新近研究的一种基因，基因库查询知，其位于人类染色体3p21.3，该区域较常见的出现杂合子和纯合子的丢失最终导致肿瘤的发生〔15,16〕，然而对于RASSF1A与PTC的相关性仍然处于初步的探索阶段。

本研究最终纳入英文文献4篇，中文文献7篇，共包含803名受试者。对于RASSF1A基因甲基化在PTC组与对照组表达的结果分析提示PTC组的RASSF1A基因甲基化率高于对照组，与最近Mohammadiasl等〔17〕研究的结果符合，故可以认为RASSF1A甲基化是PTC的危险因素，在PTC的发生、发展中起到重要的作用。RASSF1A基因甲基化与年龄研究的结果提示RASSF1A基因甲基化在50岁分界组无统计学意义，但是由于纳入文献的研究的年龄区间不同，分组研究后发现RASSF1A基因甲基化在40岁分界组有统计学意义，即>40岁组RASSF1A基因甲基化表达增加，由于纳入的文献较少，对于RASSF1A基因甲基化与年龄的关系需要大样本的多中心研究予以证实。

本篇Meta分析有一定局限性，首先，纳入的文献数量有限，缺乏随机对照试验，而且普遍质量不高，英文文献较少。其次，纳入的病例对照试验多为回顾性试验，相关数据不排除有重叠的可能，这都可能影响分析结果。再者，每一篇文献的研究年限不一样，可能导致文献有异质性，本研究部分指标存在异质性。另一个方面，纳入文献的样本量不多，其中不是所有的指标都涉及，最终可能导致分析的可靠性降低。最后，本篇Meta分析研究的指标较少，并没有对RASSF1A基因甲基化与不同类型的甲状腺癌的相关性进行分析，亦没有RASSF1A基因甲基化与肿瘤TNM分期的关系进行评估。

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3 Galusca B,Dumollard JM,Lassandre S,etal.Global DNA methylation evaluation:potential complementary marker in differential diagnosis of thyroid neoplasia〔J〕.Virchows Arch,2005;447(1):18-23.

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5 徐美荣,陈 云,周绍荣,等.Ras相关区域家族1A半乳糖凝集素3和甲状腺过氧化物酶mRNA在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义〔J〕.中华肿瘤杂志,2009;31(5):356-60.

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〔2016-04-15修回〕

(编辑 袁左鸣)

国家自然科学基金(81160019)

胡如进(1962-)，男，硕士生导师，主任医师，主要从事乳甲外科常见疾病的相关研究。

马建赢(1986-)，男，硕士，住院医师，主要从事乳甲外科常见疾病的相关研究。

R604

A

1005-9202(2016)24-6175-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.062

1 南昌大学第二附属医院