复方丹参滴丸对糖尿病大鼠心肌组织的保护作用

王海英 王庆辉 孙亚东

(吉林省人民医院，吉林 长春 130021)

复方丹参滴丸对糖尿病大鼠心肌组织的保护作用

王海英 王庆辉 孙亚东

(吉林省人民医院，吉林 长春 130021)

目的观察不同剂量复方丹参滴丸对2型糖尿病大鼠心肌组织炎症和氧化应激反应的影响。方法 以高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素诱导制备2型糖尿病大鼠模型。将2型糖尿病大鼠模型随机分为复方丹参滴丸大、小剂量组和模型组，正常对照组普通饲料喂养。8 w后检测各组大鼠心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量、血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果 与模型组比较，复方丹参滴丸组大鼠血清hs-CRP、TNF-α降低，心肌组织中MDA含量降低，SOD活性有所恢复(均P<0.05)。结论 复方丹参滴丸可减轻2型糖尿病大鼠心肌组织的炎症及氧化应激，对糖尿病大鼠心肌组织有明确的保护作用。

糖尿病心肌病；复方丹参滴丸；氧化应激；肿瘤坏死因子α

早期预防和延缓糖尿病(DM)心血管并发症的进展是降低2型糖尿病(T2DM)患者病死率的重要环节。目前已有大规模的研究证实〔1，2〕，血糖升高可以使多种炎症细胞因子表达增加，如，肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)、多种白细胞介素等，引起心血管系统细胞凋亡以及氧化应激反应。本研究通过观察复方丹参滴丸对DM大鼠心肌组织炎症及氧化应激的影响，探讨复方丹参滴丸对T2DM大鼠心肌病变的保护作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料及设备 链脲佐霉素(STZ)购自美国Sigma 公司；Wistar雄性大鼠由吉林大学实验动物中心提供；复方丹参滴丸(DSP)为天津天士力集团有限公司产品；罗氏便携式血糖仪及血糖检测试纸为德国罗氏公司产品；空腹胰岛素(FINS)测定试剂盒购自北方生物技术研究所；TNF-α ELISA试剂盒为美国ADL公司产品；超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.2 DM动物模型制备及分组 选8周龄健康Wistar雄性大鼠45只，体重(270±20)g。适应性喂养1 w后，随机分为模型组 (DM，35只)和正常对照组 (CT，10只)。参照文献方法〔3〕，给予高糖高脂饲料喂养制模，4 w末一次性腹腔注射STZ 30 mg/kg。72 h后随机取尾静脉血用便携式血糖仪测血糖2次，血糖≥16.7 mmo1/L为T2DM模型大鼠。存活的DM模型大鼠共24只，随机分组，给药情况：DSP小剂量组(DL)，8只，按2 mg·kg-1·d-1+蒸馏水3 ml灌胃治疗;DSP大剂量组(DH)，8只，按4 mg·kg-1·d-1+蒸馏水3 ml灌胃治疗;模型组(DM)，8只，蒸馏水3 ml灌胃治疗；正常对照组(NC)同时给予蒸馏水3 ml灌胃治疗。以上处理方法每周根据个体体重变化随时调整。用药8 w后，断尾采血、留取血清标本。断颈处死大鼠，抽净心腔内血液，取出心脏组织，用冷等渗盐水洗净，滤纸吸干，组织标本编号，-70℃液氮中保存备用。

1.3 观察项目及方法 使用罗氏便携式血糖仪经尾静脉采血测定空腹血糖(FBG)。血清FINS通过放射免疫法测定，计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，HOMA-IR=In(FBG×FINS/22.5)。血清hs-CRP由全自动生化分析仪测定。血清TNF-α通过酶联免疫吸附(ELISA)法测定，按试剂盒说明书进行操作。取少许心尖组织制成组织匀浆，离心后留取上清液，MDA含量测定采用硫代巴比妥酸法，波长532 nm处比色，测各管吸光度值；SOD活力测定采用黄嘌呤氧化法，波长550 nm处比色。剩余心脏组织标本以4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片，进行苏木精伊红染色。

1.4 统计学处理 使用SPSS10.0软件行t检验。

2 结 果

2.1 心肌组织HE染色结果 正常对照组心肌纤维、心肌细胞排列整齐，胞质染色均匀，细胞核大小均一；模型组心肌细胞排列紊乱，纤维断裂，部分胞质浓缩深染，细胞核大小不规则；药物治疗后心肌组织改变有所减轻。见图1。

图1 心肌组织HE染色结果

2.2 糖代谢水平比较 与正常对照组比较，模型组大鼠FBG、血清FINS、HOMA-IR均明显升高(P<0.01)。与模型组比较，复方丹参滴丸各组FBG降低，DH组有统计学意义(P<0.05)；复方丹参滴丸各组血清FINS、HOMA-IR有所降低(P<0.05)。见表1。

组别nFBG(mmol/L)Fins(mU/L)HOMA⁃IRCT组10105 29±0 389 64±0 822 59±0 42DM组8922 67±4 631)23 41±3 751)26 91±7 091)DL组8821 81±3 771)18 57±2 781)2)18 96±4 121)2)DH组8818 24±3 251)2)16 33±2 121)2)15 45±2 281)2)

与CT组比较：1)P<0.01;与DM组比较：2)P<0.05

2.3 炎症及氧化应激指标的比较 与正常对照组比较，糖尿病各组大鼠MAD含量升高，SOD活性降低，hs-CRP、TNF-α水平降低(P<0.05，P<0.01)。用药8 w后，与模型组相比，各用药组心肌组织的MAD含量降低，SOD活性有所恢复，hs-CRP、TNF-α水平降低，DH组上述指标改变显著(P<0.05，P<0.01)，见表2。

组别nMDA(nmol/mg)SOD(nU/mg)hs⁃CRP(mg/L)TNF⁃α(mg/L)CT组10107 3±5 2458 98±8 321 39±0 761 98±0 29DM组8919 67±6 192)26 75±7 462)6 39±2 622)3 15±0 512)DL组8814 96±3 151)3)31 39±8 071)3)4 18±0 561)3)2 78±0 423)DH组8810 84±4 681)4)42 67±9 132)4)2 95±0 411)4)2 16±0 311)4)

与CT组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；与DM比较：3)P<0.05，4)P<0.01

3 讨 论

DM的防治不只是降低血糖，还要预防和延缓并发症的发生和发展。DM心肌病是DM最严重的并发症之一，发病机制复杂，目前认为与能量代谢紊乱、氧化应激、细胞凋亡、微血管病变、心肌间质纤维化变等多个因素相关联〔3〕。

体内高血糖引起氧化应激是多途径的，氧化应激是DM心肌病病理生理过程，各途径之间可以将氧化应激放大，导致恶性循环。产生的活性氧簇可通过直接激活TNF-α死亡受体途径，促进心肌细胞凋亡。本研究结果发现：复方丹参滴丸可改善早期DM大鼠的胰岛素抵抗，降低血糖，降低血清Hs-CRP及TNF-α水平，心肌组织MDA含量降低，心肌组织SOD活性提高，且大剂量治疗组更显著，对DM大鼠的心肌细胞起到纠正代谢紊乱、抗炎、抗氧化应激的保作用。近年来研究发现许多能保护心肌细胞及血管内皮功能的中药。主要由丹参、三七、冰片三者组成的复方丹参滴丸，对心脏有良好的保护作用，药理及分子生物学研究也进一步证实〔4，5〕，复方丹参滴丸通过多靶点调节糖脂代谢而改善胰岛素抵抗，抑制促进成纤维细胞增殖效应，降低心肌成纤维细胞胶原蛋白的合成作用。

目前DM心肌病的治疗不仅限于调节血糖，应在DM早期使用药物延缓DM心肌病的发生及发展，针对DM心肌病发病的各环节进行干预，降低糖DM患者发生致命性心血管疾病的风险。复方丹参滴丸可减轻早期T2DM大鼠心肌组织的炎症及氧化应激，对DM大鼠心肌组织有明确的保护作用，但相关机制还有待进一步探索。

1 谭学莹，赵林双. microRNA-30c通过调节自噬参与调控糖尿病心肌病机制的研究〔J〕.国际内分泌代谢杂志，2012；32(2)：127-30.

2 Ofstad AP，Urheim S，Dalen H，etal.Identification of a definite diabetic cardiomyopathy in type 2 diabetes by comprehensive echocardiographicevaluation A cross-sectional comparison with non-diabetic weight-matched controls〔J〕.J Diabetes，2014；(10)：1753-66.

3 刘 奎，周丽诺.氧化应激与糖尿病心肌细胞凋亡〔J〕.国际内分泌代谢杂志，2009；29(3)：204-7.

4 郭治昕.复方丹参滴丸的中药现代化研究〔J〕.中国中医药信息杂志，2000；7(4)：14-5.

5 陈 频，郑全林，陈文玉，等.复方丹参滴丸对2型糖尿病大鼠肾组织HIF-1α及VEGF表达的影响〔J〕.中华保健医学杂志，2011；13(3)：200-3.

〔2015-10-19修回〕

(编辑 徐 杰)

王海英(1976-)，女，副主任医师，医学博士，主要从事糖尿病的预防与治疗研究。

R58

A

1005-9202(2016)24-6091-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.021