何首乌多糖抗小鼠疲劳的效应机制

程 凯 张慧俭 陈玉龙 展俊平 张月腾 谢忠礼 朱艳琴 李晓冰

(河南中医学院，河南 郑州 450008)

何首乌多糖抗小鼠疲劳的效应机制

程 凯 张慧俭 陈玉龙 展俊平1张月腾2谢忠礼 朱艳琴 李晓冰

(河南中医学院，河南 郑州 450008)

目的探讨何首乌多糖抗疲劳作用及其机制。方法 雄性SPF 级昆明种小鼠150只，随机分为3批，每批50只，每批动物随机分为空白对照组、西洋参对照组、何首乌多糖高、中、低剂量组，连续灌胃14 d 后，分别进行负重游泳，测定力竭游泳时间、血清尿素氮、血乳酸含量、肝糖原含量及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果 与空白对照组比较，何首乌多糖力竭游泳时间显著延长；肝糖原含量及SOD活性显著升高；血清尿素氮、血乳酸含量及MDA含量明显降低。结论 何首乌多糖具有抗疲劳作用，其抗疲劳效应可能与其抗氧化作用有关。

何首乌；多糖；疲劳

疲劳在现代快节奏的生活及工作压力下，已成为人类的一种亚健康表现，延缓疲劳的发生、迅速消除疲劳恢复精力、保持旺盛的精力对身体健康极为重要〔1〕。何首乌(Polygonum multiflorumThunb)系著名滋补强壮中药，归肝、心、肾经，有补肝，益肾，养血，祛风之功效，用于肝肾阴亏，发须早白，血虚头晕，腰膝软弱，筋骨酸痛，遗精，崩带，久疟，久痢，慢性肝炎，痈肿，瘰疬，肠风，痔疾等症。现代研究表明，何首乌主要含有蒽醌类化合物，多糖是何首乌的主要成分之一〔2〕。现代研究多集中于何首乌多糖的提取分离纯化、免疫调节、抗衰老〔3～5〕方面，对何首乌多糖抗疲劳作用报道甚少。本实验通过负重游泳实验及与疲劳相关指标评估何首乌多糖的抗疲劳作用。

1 材料和方法

1.1 材料 昆明种(KM)小鼠，雄性，SPF级，体质量18～22 g，由河南省实验动物中心提供，合格证号：SCXK(豫)2010-0002。

1.2 主要仪器与试剂 分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)；西洋参含片购于福建上普药业有限公司；血乳酸(LAC)试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、尿素氮(BUN)试剂盒和肝糖原试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、丙二醛(MDA)试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

1.3 何首乌多糖提取 何首乌为蓼科植物何首乌干燥块根，购于河南省药材公司，并经鉴定为正品；经乙醇回流脱脂、水提取、浓缩、醇沉、除蛋白、透析、醇沉、真空干燥等程序，得何首乌多糖，4℃冰箱保存备用。

1.4 分组及给药方法 实验共分3批进行，每批50只KM小鼠。按体重随机分为空白对照组、西洋参对照组、何首乌多糖高、中、低剂量组。每批次实验用药方案：空白对照组灌胃生理盐水，西洋参对照组按西洋参每天0.3 g/kg灌胃，何首乌多糖高、中、低剂量组按每天400、200、100 mg/kg灌胃。实验给药14 d，1次/d。

1.5 测试指标与方法

1.5.1 负重游泳实验 用药最后1 d给予药物30 min后，将小鼠按照体重5%负重，放于温度为(25±1)℃的水槽中使其游泳，开始计时，直至小鼠沉入水底8 s不再浮起为力竭游泳结束，记录游泳时间。

1.5.2 血LAC含量测定 用药最后1 d给予药物30 min后，将小鼠放于温度为 (27±1)℃的水槽中游泳30 min，取出小鼠令其休息20 min，眼球内眦静脉丛采血，按照试剂盒说明书测定血LAC含量。

1.5.3 血BUN含量的测定 用药最后1 d给予药物30 min后，将小鼠放于温度(27±1)℃的水槽中游泳90 min，取出小鼠令其休息60 min，摘眼球取血，取血清按试剂盒说明书测定血BUN含量。

1.5.4 肝糖原含量的测定 用药最后1 d给予药物30 min后，将小鼠放于温度(27±1)℃的水槽中游泳60 min，立即处死小鼠，取肝脏，按试剂盒说明书测定肝组织中肝糖原含量。

1.5.5 肝组织匀浆中 MDA、SOD活性测定 用药最后 1 d给予药物30 min后，将小鼠放于水温(27±1)℃的水槽中游泳120 min，立即处死小鼠，取肝脏，测定肝组织中MDA及SOD活性。

1.6 统计学方法 应用SPSS18.0软件行单因素方差分析(ANOVA)、LSD-t检验。

2 结 果

2.1 何首乌多糖对小鼠力竭游泳时间的影响 与空白对照组〔(59.72±10.28)min〕比较，何首乌多糖低剂量组小鼠力竭游泳时间〔(85.57±23.16)min〕明显延长(P<0.05)；何首乌多糖中、高剂量组〔(101.28±25.38)min、(112.76±30.85)min〕和西洋参用药组〔(110.46±20.39)min〕小鼠力竭游泳时间显著延长(P<0.01)。

2.2 何首乌多糖对血清BUN、血LAC含量的影响 与空白对照组比较，何首乌多糖低、中剂量组小鼠血清BUN明显降低(P<0.05)；何首乌多糖高剂量组和西洋参用药组小鼠血清BUN显著降低(P<0.01)。与空白对照组比较，何首乌多糖低剂量组小鼠血LAC含量明显降低(P<0.05)；多糖中、高剂量组和西洋参用药组小鼠血LAC含量显著降低(P<0.01)。见表1。

组别剂量(mg/kg)BUN(mmol/L)LAC(mmol/L)空白对照组-10 13±2 757 02±1 25西洋参对照组3006 89±1 242)4 83±0 632)何首乌多糖组1007 74±1 591)5 27±1 181)2007 26±1 321)4 73±0 842)4006 59±0 892)4 51±0 722)

与空白对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；下表同

2.3 何首乌多糖对肝糖原的影响 与空白对照组〔(25.63±4.37)mg/g〕比较，何首乌多糖中剂量组小鼠肝糖原含量〔(35.83±10.22)mg/g〕明显升高(P<0.05)；多糖高剂量组〔(39.25±11.51)mg/g〕和西洋参用药组〔(36.14±8.26)mg/g〕小鼠肝糖原含量显著升高(P<0.01)。何首乌低剂量组肝糖原含量(32.58±7)mg/g。

2.4 何首乌多糖对肝组织MDA、SOD活性影响 与空白对照组比较，何首乌多糖低剂量组小鼠SOD活性明显升高(P<0.05)；多糖中高剂量组和西洋参用药组小鼠SOD活性显著升高(P<0.01)。与空白对照组比较，多糖中剂量组和西洋参用药组MDA含量明显降低(P<0.05)，多糖高剂量组MDA含量显著下降(P<0.01)。见表2。

组别剂量(mg/kg)SOD(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)空白对照组-233 48±51 286 08±1 39西洋参对照组300310 53±68 072)5 03±0 761)何首乌多糖组100284 72±47 231)5 86±0 83200308 23±59 632)5 19±1 061)400315 67±75 962)4 87±0 952)

3 讨 论

疲劳是一种复杂的生理心理症状，当机体处于一定环境条件下，长时间或过于负重、紧张等所导致的工作效率暂时降低的状态〔6〕。游泳时间的长短可以反映运动疲劳程度，运动耐力实验可直观反映抗疲劳能力。本研究提示何首乌多糖有延缓运动性疲劳产生的功效。

血BUN为蛋白质代谢产物，在高强度、超长时间运动时，糖、脂肪分解代谢提供能量不足以满足机体需要，骨骼肌中蛋白质与氨基酸参与分解代谢供能，产生BUN〔7〕，是反映机体负荷的灵敏指标。本研究显示，何首乌多糖可明显加快血清BUN清除，使疲劳的发生显著延缓。

研究认为，氧化应激反应是运动性疲劳的重要机制之一。生理状态下，自由基生成与清除维持动态平衡。当机体过量运动时，线粒体能量代谢发生障碍，氧自由基大量生成。同时，抗氧化酶大量消耗，自由基清除能力减弱，生物膜完整性、流动性及通透性被破坏，诱导疲劳反应〔6〕。本实验显示何首乌多糖可提升SOD活性，降低MDA含量，具有较强的抗氧化作用，有利于活性氧的清除，使机体抗脂质过氧化作用增强。推测何首乌多糖减少运动时自由基的生成以减少其对组织的损伤作用可能是其发挥抗疲劳效应机制之一。

1 李云宁，程仁丽，程 静.疲消乐口服液对小鼠抗疲劳和耐缺氧作用的实验研究〔J〕.中医药导报，2012；18(11)：82-4.

2 葛朝亮，刘 颖.何首乌多糖对免疫功能低下小鼠的免疫保护作用〔J〕.中国新药杂志，2007；16(24)：2040-2.

3 朱庆麒，吕丽爽.何首乌多糖的纯化及功能性研究〔J〕.当代化工，2014；43(10)：2005-8.

4 张志远，苗明三，顾丽亚.制何首乌多糖对小鼠免疫功能的影响〔J〕.中医研究，2008；21(6)：18-9.

5 纪庆丽，魏晓东，欧 芹.何首乌多糖对衰老模型大鼠肝mtDNA损伤及复合体ⅣCOⅠ、ATPase 6 mRNA表达的影响〔J〕.黑龙江医药科学，2009；32(6)：45-6.

6 尹瑞欣，白江涛，张晓红，等.补阳还五汤对运动性疲劳大鼠抗氧化酶活性的影响〔J〕.广东医学，2015；36(10)：1487-9.

7 Xu C，Lv J，You S，etal.Supplementation with oat protein ameliorates exercise-induced fatigue in mice〔J〕.Food Funct，2013;4(2)：303-9.

〔2016-01-17修回〕

(编辑 袁左鸣)

Anti-fatigue effect and mechanism of polygonum multiflorum Polysaccharide in mice

CHENG Kai,ZHANG Hui-Jian,CHEN Yu-Long,et al.

Henan University of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou 450008,Henan,China

Objective To explore the anti-fatigue effect and mechanism of polysaccharides from Polygonum multiflorum．Methods 150 Kunming mice were randomly divided into 3 batches，each of which consisted of 5 groups:blank control,Panax quinquefolius，Polygonum multiflorum Polysaccharide low,middle and high dose groups.After fourteen days of treatment,all the mice were evaluated for their exhaustive swimming time and the contents of blood urea nitrogen(BUN) and blood lactic acid，hepatic glycongen,superoxide dismutase (SOD),MDA．Results Compared with those of blank control group,exhaustive swimming time of Polygonum multiflorum Polysaccharide group was extended,hepatic glycongen and SOD activity were improved greatly，BUN and blood lactic acid,MDA levels were decreased remarkably.Conclusions Polygonum multiflorum Polysaccharide could alleviate physical fatigue,which might be due to the improvement of antioxidation.

Polygonum multiflorum;Polysaccharide;Fatigue

国家自然科学基金(No.81173177)；河南省教育厅自然科学研究计划(No.2010B36001)；郑州市科技创新团队资助项目(No.121PCXTD520)，河南中医学院基本科研业务费(No.2014KYYWF-QN10)；河南中医学院科技创新人才(No.2015XCXRC05)

李晓冰(1980-)，女，副教授，博士，主要从事多糖药理学研究。

程 凯(1980-)，女，讲师，硕士，主要从事多糖药理学研究。

R28

A

1005-9202(2016)24-6054-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.003

1 河南省中医院 2 广州中医药大学