腹泻患者艰难梭菌检测及分析

严凤娟

腹泻患者艰难梭菌检测及分析

严凤娟

目的 观察腹泻患者艰难梭菌检测情况。方法 收集我院348例腹泻患者的粪便标本，并选择K-B法检测艰难梭菌耐药性，观察检测结果。结果 348例粪便标本，18例（5．17%）细菌培养为阳性，其中77．78%（14/18）为住院患者；61．11%（11/18）为60岁以上患者；艰难梭菌对甲硝唑、阿莫西林/克拉维酸及哌拉西林等药物敏感性较好。结论 艰难梭菌对常规抗菌药物敏感性较好，其感染主要为院内感染。

腹泻；艰难梭菌；检测

艰难梭菌又称难辨梭菌、难辨棱状芽孢杆菌。艰难梭菌（CD）是院内感染性腹泻、伪膜性肠炎等疾病的重要致病菌。近年来，艰难梭菌感染发病率呈升高趋势［1］，艰难梭菌感染临床症状无典型性，因此在临床诊断、治疗方面存在较大困难，如何准确诊断艰难梭菌感染成为人们研究的热点。本研究收集348例腹泻患者的粪便标本，观察艰难梭菌检测情况。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

回顾性总结我院2015年3月～2016年3月收集的348例腹泻患者的粪便标本。筛选标准：（1）每天腹泻频次至少3次者；（2）性状为稀便或水样便。将标本置入4℃冰箱中保存待检。

1.2 方法

（1）细菌分离培养及鉴定：量取0.5 ml粪便富集芽胞，然后接种于艰难梭菌选择（CCFA）肉汤中，并于37℃有氧条件下孵育1周；将标本与无水乙醇等比例混合摇匀，于20℃～25℃条件下静置60 min，离心并去除上清，将下层沉渣接种于艰难梭菌选择培养基（培养基等来源于英国Oxoid公司）中，并将其放入35℃厌氧罐中培养2 d；通过菌落形态、气味等方面实施初步判断。将可疑菌落同时接种艰难梭菌培养基，分离培养厌氧菌，并及时使用无菌棉签将其洗脱至20%脱脂牛奶与无菌水中，然后置于-70℃条件下低温保存待检：将标本取出并经镜检、耐氧试验等步骤依次进行鉴定，采用山东鑫科XK型全自动微生物鉴定仪鉴定细菌；（2）药物敏感性试验选择K-B法测定菌株耐药性，判断结果以CLSI/NCCLS法为准；（3）抗菌药物纸片：万古霉素、克林霉素、莫西沙星、阿莫西林/克拉维酸、青霉素及哌拉西林/他唑巴坦纸片等。

1.3 统计学分析

使用SPSS 13.0软件对数据进行分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 艰难梭菌检测结果分析研究

348例粪便标本，其中18例细菌培养为阳性；18例阳性病例，其中11例黏液便、7例水样便。每天腹泻次数4～6次，且伴有发热情况。血常规检查发现白细胞数目有所上升，C-反应蛋白水平基本不变；大便潜血试验检查结果显示阳性；大便涂片试验发现球/杆菌比例失调。

2.2 艰难梭菌耐药性分析研究

经药敏试验发现，除克林霉素耐药率（88.89%，16/18）较高外，其它抗菌药物耐药率均较低：万古霉素（16.67%，3/18）、甲硝唑（11.11%，2/18）、氨苄西林（16.67%，3/18）、莫西沙星（22.22%，4/18）、美罗培南（5.56%，1/18）、阿莫西林/克拉维酸（11.11%，2/18）、哌拉西林（5.56%，1/18）、哌拉西林/他唑巴坦（5.56%，1/18）等，上述结果提示临床应暂停使用克林霉素，其它药物可作为治疗艰难梭菌的首选药物，尤其是哌拉西林与美罗培南，与其它药物耐药率比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 艰难梭菌阳性病例其它情况分析

18例阳性病例，27.78%（5/18）为14岁以下儿童，61.11%（11/18）为60岁以上患者；77.78%（14/18）为住院患者，22.22%（4/18）为门诊患者。18例阳性病例均伴有基础疾病，其中16例伴抗生素服用史。

3 讨论

艰难梭菌又称难辨棱状芽孢杆菌（c-diff），属厌氧性细菌，一般寄生在人的肠道内，是一种条件致病菌［2］。当肠道正常环境出现菌群失调，艰难梭菌的菌群生长速度加快，影响肠道中其他细菌，引发炎症，导致腹泻，甚至迁延为伪膜性肠炎［3］。据临床观察，因艰难梭菌造成医院感染的发生率及死亡率逐年增加，流行菌株的毒性也逐年，在美国曾造成暴发流行［4］。

艰难梭菌引起的感染短期内很难控制，治疗时间相对较长。所以，提高艰难梭菌的检测水平，对积极有效的预防控制艰难梭菌感染有着重大意义［5］。目前，产毒培养试验是检验艰难梭菌感染的“金标准”，它具有准确度高及特异性强等优点，然而该方法对技术条件要求高、操作较为复杂，因此限制了其临床的广泛应用［6］。本次研究运用的方式是粪便细菌法，它具有灵敏度高，重复性好等优点，此种方式既可检测出艰难梭菌，成本低，且一般实验室即可进行，是一种有效、经济、实用的实验室检测手段。有关研究资料发现［7］，过度应用抗生素是造成艰难梭菌感染的主要原因。如果过度服用某些抗生素，艰难梭菌的菌群生长速度加快。艰难梭菌产生大量的外毒素A和B，外毒素A与黏膜细胞，造成初级的破坏，外毒素B进而造成更大的破坏，导致腹泻，且症状较重［8］。本研究发现，除克林霉素耐药率较高外，艰难梭菌对其它抗菌药物均具有良好的敏感性。为预防控制出现艰难梭菌感染，首先医院通过采用手部卫生护理、接触防护、环境清洁和消毒等措施进行有效预防，其次临床中严格规范应用抗生素，对预防控制艰难梭菌感染也有着重要意义。综上所述，随着艰难梭菌造成医院感染的发生率及死亡率逐年增加，我们必须积极预防控制艰难梭菌感染，严格规范应用抗生素，防止菌群失调；并对已患感染患者进行随访。

［1］ 李文革，靳会娟，岑瑞琦，等．乡村医疗机构与城市医院来源的艰难梭菌MLST分型对比研究［J］． 中华医院感染学杂志，2012，22（12）: 2699-2701．

［2］ 严其容，李文革，许文荣，等．25株艰难梭菌多位点序列分型［J］．临床检验杂志，2012，30（3）: 183-186．

［3］ 冯云，王传清，金嘉琳，等． 上海部分地区儿童艰难梭菌相关性腹泻的临床分析［J］． 微生物与感染，2010，5（3）: 151-155．

［4］ 章黎华，董丹凤，江岑，等．院内感染艰难梭茵的毒素检测及核糖体分型研究［J］． 上海交通大学学报（医学版），2012，32（11）：1436-1439．

［5］ 刘元元，刘文恩，简子娟，等．住院腹泻患者艰难梭菌检测与分析［J］． 中国感染控制杂志，2012，11（4）: 293-296．

［6］ 何英，陆学东，李海静，等．检测艰难梭菌感染的五种方法比较［J］．中华检验医学杂志，2010，33（12）: 1139-1144．

［7］ 郭威．伪膜性肠炎的相关危险因素研究［J］． 中国全科医学，2012，15（4）: 397-399．

［8］ 唐海先，肖洪广，杨玉静，等． 腹泻患者艰难梭菌的检测及分析［J］． 中国卫生检验杂志，2013，23（17）：3328-3331．

Detection and Analysis of Clostridium Difficile in Diarrhea Patients

YAN Fengjuan Department of Clinical Laboratory，Shuangyashan People's Hospital，Shuangyashan Heilongjiang 155100，China

Objective To observe the detection of clostridium with diarrhea patients． Methods Stool samples from 348 patients with diarrhea in our hospital were collected and their drug resistance was detected by K-B method． Results 348 cases samples，including 18（5．17%）bacterial culture positive cases，77．78%（14/18）was hospitalized patients，and 61．11%（11/18）patients were over 60 years old． The susceptibility of Clostridium botulinum for metronidazole，amoxicillin/clavulanic acid and piperacillin is better． Conclusion Clostridium is sensitive to conventional antimicrobial agents，and the infection is mainly nosocomial infection．

Diarrhea，Clostridium，Detection

R446

A

1674-9316（2016）23-0156-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．23．086

黑龙江省双鸭山市人民医院检验科，黑龙江 双鸭山 155100