结直肠癌中肝癌衍生生长因子与p53蛋白的表达相关性分析

甄时建



结直肠癌中肝癌衍生生长因子与p53蛋白的表达相关性分析

甄时建

【摘要】目的 探究结直肠癌（CRC）中肝癌衍生生长因子和p53蛋白的表达相关性。方法 应用免疫组化染色法检测80例CRC和10例正常结直肠黏膜组织者中的肝癌衍生生长因子（HDGF）的表达，取30例CRC组织检测p53蛋白的表达水平。结果 80例CRC中HDGF阳性率为66.7%，而正常人群的结直肠黏膜组织均为阴性；30例CRC组织中p53蛋白的阳性率为70.0%，而正常结直肠黏膜者呈阴性。结论HDGF和P53蛋白在结直肠癌组织中的表达高于正常结直肠癌组织。

【关键词】结直肠癌；肝癌衍生生长因子

作者单位：412000株洲，湖南中医药高等专科学校附属第一医院病理科

结直肠癌（CRC）是一种危害性较大的恶性肿瘤，随着我国老龄人口数量的增加和环境的污染，使得CRC人数逐渐增加［1-2］。在临床寻找准确反映结直肠癌患者预后的预测指标，针对具高复发风险的患者进行个体化治疗，从而降低局部的复发和转移［3-4］。目前肝癌衍生生长因子和p53蛋白在结直肠癌中的表达和相关性未见报道，笔者为探测结直肠癌中肝癌衍生因子和p53蛋白表达的相关性，进行以下研究。

1　资料与方法

1.1一般资料

我院收治的80例CRC，手术后存档的石蜡标本作为本次的标本。其中女性32例，男性48例，年龄22～85岁，结肠癌41例，直肠癌39例。另取10例正常结直肠黏膜组织者，男性5例，女性5例，年龄23～84岁。

1.2方法

1.2.1仪器及试剂 HDGF单克隆抗体、免疫组化试剂盒、鼠抗人p53单克隆抗体、0.01 PBS，石蜡切片、显微镜日本Olympus公司、免疫组化用24片带盖反应保湿盒。

1.2.2检测方法 试剂盒由深圳深达公司提供，并严格按照SABC免疫组化检测试剂盒操作说明：（1）将石蜡连续切成厚为4μm的切片，贴片用多聚赖氨酸玻片， 60℃烤箱烘烤过夜。（2）将石蜡进行脱蜡和水化。（3）滴加3%的过氧化氢-甲醇溶液，室温进行孵化20 min，用PBS进行洗涤。（4）将切片用0.01 M的枸橼酸盐缓冲液进行冲洗，在微波中加热煮沸10 min，室温放置冷却后，用 PBS洗涤3×2 min。（5）滴加山羊血清进行封闭，室温孵化时间为20 min。（6）滴加HDGF抗体或者p35抗体， 4℃进行过夜。（7）60 min复温，用PBS冲洗，时间为3×3 min。（8）将生物素标记二抗工作液滴入，于常温中孵化至少15～20 min，再应用PBS冲洗，时间3×3 min。（9）将经过氧化物酶标记过的链霉素亲和素滴入后于常温下孵育至少15～20 min，再于PBS冲洗，时间3×3 min。（10）将现配现用的DAB溶液滴入后于镜下观察其显色情况，然后采用自来水冲洗以便终止其反应；之后采取苏木素复染，于1%盐酸酒精反蓝，待梯度酒精脱水与二甲苯透明后利用中性树脂进行封片。

阳性对照为用已知的HDGF阳性切片；阴性对照为无关的IgG代替抗体进行阴性对照；空白对照：PBS替代。

1.3判定标准

所有的切片经病理诊断资质资深的专家进行盲法阅读。HDGF判定：光镜下随机观察10个高倍镜视野，记录10×100个阳性细胞的百分比。阳性结果用Yamamoto等进行免疫组化评分，＞90%的肿瘤细胞质和细胞核均阳性染色，为高表达组；＜90%则为低表达组。

p53蛋白定位于细胞核，并呈黄色的颗粒，观察阳性百分数，阳性细胞数＜10%记为0，10%～25%为1，25%～50%为2，＞50%为3；因此，0～1分为阴性，2为阳性，3为强阳性。

1.4统计分析

用统计软件SPSS 22.0进行分析比较，用Spearman和χ2检验进行相关性分析。P＜0.05，差异有统计学意义。

2　结果

2.1不同生理下HDGF、p35的表达

所有正常结直肠黏膜组织中HDGF表达为阴性，在80例结直肠癌中HDGF的阳性率为66.7%，而10例正常结直肠黏膜中HDGF为阴性，差异有统计学意义（P＜0.05）；80例患者中取30例CRC组织检测p53蛋白的表达水平，30例结直肠癌组织中p53蛋白的阳性率为70.0%，而10例正常结直肠黏膜中p53蛋白呈阴性，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2结直肠癌组织中HDGF与p53蛋白表达的相关性

结直肠癌组织中p53蛋白阳性率为70.0%，对结直肠癌组织中HDGF和p53进程蛋白表达的Spearman进行相关性分析，两者的相关系数为rs=0.33，P=0.001，表明HDGF表达与p53蛋白表达呈正相关。

3　讨论

最初是在人的肝癌细胞系HUH-7进行分离纯化得到HDGF［5-6］。目前临床已经表明HDGF广泛存在于多种肿瘤组织和恶性癌细胞中，对细胞的增生、血管生成和创伤修复等具有深远的影响［7-8］。在本次的研究结果中，HDGF在结直肠癌中的阳性表达高于正常的组织，这也提示了HDGF可能参与某些细胞的生物学行为，并在结直肠癌的发展中扮演重要角色。

本次30例结直肠癌组织中p53蛋白的阳性率为70.0%，而正常组织为阴性，提示结直肠癌组织与正常的组织的p53存在差异。此外HDGF表达与p53蛋白表达呈正相关，提示在HDGF的高表达中可能存在p53的突变，对于癌变细胞两者均具有促进作用。

HDGF和p53蛋白在结直肠癌组织中的表达高于正常结直肠黏膜组织，在结直肠癌组织HDGF与p53蛋白表达具有正相关。

参考文献

［1］王志宇，杨渤彦，窦征岳，等.MIC-1、VEGF和P53蛋白表达与直肠癌临床病理及预后的关系［J］.中国癌症杂志，2007，17 （8）：607-609.

［2］汪建平.重视结直肠癌流行病学研究［J］.中国实用外科杂志，2013，3（8）：622-623.

［3］王志宇，杨渤彦，高健，等.直肠癌中MIC-1， VEGF和P53表达的临床意义［J］.世界华人消化杂志，2010，15（19）：2171-2172.

［4］孙加升，潘运龙，覃莉，等.核转录因子kbp65血管内皮生长因子A和p53在直肠癌中的表达及其临床意义［J］.实用医学杂志，2009，25（10）：1578-1579.

［5］刘炎锋，郭森，赵锐，等.肝癌衍生生长因子和血管内皮生长因子在肝外胆管癌患者血清中的诊断价值［J］.中国现代普通外科进展，2015，18（7）：516-518.

［6］刘海平，胡泽民.肝癌衍生生长因子与肿瘤关系的研究进展［J］.中华普通外科学文学，2012，6（4）：49-50.

［7］郑璐，梁平，李靖，等.HDGF、VEGF在人肝细胞癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系［J］.第三军医大学学报，2010，32 （7）：680-683.

［8］林万华，赵林，刘晓灿，等.HDGF基因在肝癌和癌旁组织中表达情况的检测［J］.广西师范大学学报，2014，32（1）：118-122.

Expression and Correlation Analysis of Liver Cancer Derived Growth Factor and p53 Protein in Colorectal Cancer

ZHEN Shijian Department of Pathology，First Affiliated Hospital of Hunan Traditional Chinese Medical College，Zhuzhou 412000，China

【Abstract】

Objective Exploration of colorectal cancer（CRC） in hepatoma-derived growth factor and p53 protein expression correlation.Methods CRC 80 cases and 10 cases of normal colorectal mucosa organizer of hepatoma-derived growth factor（HDGF） expression by immunohistochemical staining,30 cases taken to detect the expression levels of p53 protein in CRC tissue.Results 80 cases of CRC in HDGF positive rate 66.7%,while the colorectal mucosa normal population was negative.The positive rate of 30 cases of CRC of p53 protein was 70.0%,while the normal colorectal mucosa were negative.Conclusion The expression of HDGF and P53 protein in colorectal cancer tissues was significantly higher than that in normal colorectal cancer tissues.

【Keyword】CRC，HDGF

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.04.122

【中图分类号】R735.3

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2016）04-0171-02