肌肉组织染色方法的病理分析

于立伟

作者单位：154101 黑龙江省鹤岗市人民医院病理科



肌肉组织染色方法的病理分析

于立伟

作者单位：154101 黑龙江省鹤岗市人民医院病理科

【摘要】目的 探讨肌肉组织染色的方法及临床应用。方法 对肌肉组织染色Mallory磷钨酸苏木素染色法、偶氮桃红-鞣酸法和苏木素碱性复红苦味酸染色法方法操作方法进行分析。结果 横纹肌纤维、纤维素、细胞核、核仁和神经胶质纤维等呈蓝色，胶原纤维、网状纤维、软骨基质呈棕红色，弹力纤维呈紫色。结论 需要证明与区分组织为何种来源的肌纤维时，需要针对不同情况，选用相应的特殊染色进行显示和观察。

【关键词】肌肉组织染色；病理

肌肉组织根据其形态和功能特点，可将其分为平滑肌、骨骼肌和心肌。3者的胞质中均含有沿细胞长轴平行排列的肌原纤维，骨骼肌和心肌尚有由肌动蛋白和肌球蛋白排列而成的明暗相间横纹［1］。显示肌纤维常用的染色方法很多，肌纤维萎缩，色素沉着，脂肪变性，粘液变性等病变分别有各自的染色方法显示，现对病理科常用的观察横纹肌的几种染色方法和网状纤维、弹性纤维、胶原纤维、肌纤维四重染色法进行分析如下。

1 材料与方法

1.1 材料

对取新鲜肌肉组织直径0.5～2 cm，不加任何固定液，生理盐水浸过纱布包好送检。

1.2 方法

1.2.1 Mallory磷钨酸苏木素染色法（PTAH） （1）试剂配制：自然氧化成熟液：苏木素0.1 g，磷钨酸2.0 g，蒸馏水100 ml，将苏木素置于20 ml蒸馏水中加热溶解，再将磷钨酸溶于80 ml蒸馏水中。苏木素冷却后加入磷钨酸溶液，混合后置放于有阳光处数星期至数月才成熟，（大约2～3月）。可保存2～3年。化学促成熟液：苏木素0.1 g，磷钨酸2.0 g，蒸馏水100 ml，0.25%高锰酸钾水溶液5 ml（必须是新鲜配制的）将苏木素溶于20 ml蒸馏水中，磷钨酸溶于80 ml蒸馏水中，溶解后将两液混合，并加入高锰酸钾，12～24 h后即可使用［2］。可保存1～2周。（2）操作方法：组织固定10%福尔马林液，常规脱水包埋。切片脱蜡至蒸馏水。放入5%硫酸铁铵水溶液30 min。蒸馏水洗。入PTAH溶液室温12～24 h，60度温箱1 h。95%酒精分化（镜下控制着色情况）［3］。无水酒精快速脱水。二甲苯透明，中性树胶封固。

1.2.2 偶氮桃红-鞣酸法 （1）试剂配制：偶氮桃红液：偶氮桃红2 g，甲醇90 ml，冰醋酸10 ml，混合溶解后，静置一夜，用时吸取上清液。5%鞣酸水溶液：鞣酸5 g，蒸馏水加至100 ml。1%磷钼酸水溶液：磷钼目酸1 g，蒸馏水加至100 ml。甲醇冰醋酸液：甲醇90 ml，冰醋酸10 ml。（2）操作方法：新鲜组织固定于Camoy液6 h以上，直接转入95%酒精脱水，常规脱水包埋。切片脱蜡至蒸馏水［4］。Mayer苏木素冲洗5～10 min。自来水冲洗10～15 min后洗蒸馏水。5%鞣酸水溶液作用15 min。蒸馏水冲洗。1%磷钼酸水溶液处理15 min。蒸馏水洗。偶氮桃红液染5 min。用甲醇冰醋酸液分化，镜下控制，至肌纤维呈鲜红色为止。直接用无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

1.2.3 苏木素碱性复红苦味酸染色法 （1）试剂配制：明矾苏木素液：苏木精0.5 g，硫酸铝铵6 g，黄色氧化汞0.25 g，甘油30 ml，冰醋酸4 ml，蒸馏水70 ml。先将苏木素和硫酸铝铵分别溶解于蒸馏水中，然后将两液混合煮沸，徐徐加入氧化汞，继续煮10 min，迅速冷却，冷却后过滤［5］。过滤后再加入冰醋酸和甘油。0.1%碱性复红液：碱性复红0.1 g，丙酮100 ml。（2）操作方法：组织固定10%福尔马林液，常规脱水包埋。切片脱蜡至蒸馏水。用明矾苏木素液染色20 s～1 min。自来水洗5 min，蒸馏水洗。用碱性复红液染色5～10 min。蒸馏水洗10 s。丙酮液洗一下。用苦味酸丙酮液迅速分化5～15 s，至无红色染液从切片上流下为止。丙酮液迅速脱水，二甲苯透明，中性树胶封固［6］。

2 结果

2.1 Mallory磷钨酸苏木素染色法（PTAH）

横纹肌呈深蓝色，神经胶质纤维呈深蓝色，纤维素呈深蓝色，细胞核呈淡蓝色，胶原纤维呈玫瑰红色，骨组织呈玫瑰红色。化学促成熟液，因加入氧化剂后，时间过长就慢慢失效，故最好现用现配。但首选自然氧化成熟液。本法已对原方法进行了改良，用60℃温箱染1 h，可加快染色速度，效果很好，最适合病理科诊断急需［7］。

2.2 偶氮桃红-鞣酸法

胶原纤维及横纹呈鲜红色，结缔组织呈黄色，细胞核呈蓝色。

2.3 苏木素碱性复红苦味酸染色法

缺血缺氧心肌、弹性纤维，胶原纤维，红细胞呈鲜红色至深红色。正常心肌呈黄色或黄棕色，细胞核呈蓝黑色。

3 讨论

一般HE染色对正常心肌和骨骼的纵纹尤其是横纹，本来显示的就不十分清楚，当肌纤维的线粒体发生水肿所致混浊肿胀时，其肌原纤维特别是横纹表现模糊不清，则更不易观察到。应用PTAH等染色可帮助鉴别是否检测肌源性肿瘤［8］。为了显示和观察正常与异常的肌纤维颗粒变性、肌原纤维变性所发生的肌浆凝集、断裂和所出现的颗粒、团块、收缩带等病理变化，常常需要应用显示肌纤维的特殊染色进行观察。横纹肌纤维的脂肪变性，在石蜡切片HE染色时脂滴呈空泡状，肌纤维纹理不清，与浊肿、水泡变性等有时不易鉴别。肌纤维的粘液变性、糖原储积症等，可应用显示与区别粘液及糖原的异染性染色法、PAs等粘液与糖原特殊染色法鉴别。肌纤维坏死及坏死后修复过程的病变，可分别应用结缔组织多色染色法和胶原纤维、网状纤维、弹性纤维的特殊染色法，进行显示和观察。

参考文献

［1］ 辛榕，郭德玉. 几种显示新型隐球菌的组织病理学染色方法的应用比较［J］. 第三军医大学学报，2009，31（17）: 1685-1686.

［2］ 胥维勇. 现代病理学技术条件下特殊染色的应用价值［J］. 实用医技杂志，2012，19（3）: 313-314.

［3］ 王玉芳，徐晓艳，武彦. 常用特殊染色在病理诊断中的应用［J］.实用医技杂志，2013，20（12）: 1357-1358.

［4］ 曾汉英，于桂臣，杨秋佳. 特殊染色在肿瘤病理组织学诊断中的应用［J］. 第四军医大学吉林军医学院学报，2002，24（3）: 139-140.

［5］ 饶秋，周晓军. 免疫组织化学在肾脏肿瘤病理诊断中的应用［J］.中华病理学杂志，2006，35（4）: 244-247.

［6］ 刘复生，刘骅，吕福东，等. 免疫组织化学技术在肿瘤病理诊断中的应用及其存在的问题［J］. 癌症进展，2007，5（4）: 355-361.

［7］ 张卫琴. 免疫组化技术在病理诊断中的应用［J］. 安徽医药，2012，16（11）: 1700-1702.

［8］ 魏荣，吴丽然，张晓琴，等. 肌肉组织活组织检查中特殊染色及免疫组化技术在神经肌肉疾病诊断中的意义［J］. 临床医药实践，2012，21（7）: 522-525.

Pathological Analysis of Muscle Tissue Staining Method

YU Liwei Department of Pathology，People's Hospital of Hegang City，Hegang 154101，China

【Abstract】

Objective To explore the method of muscle tissue staining and its clinical application. Methods On the muscle tissue staining mallory phosphotungstic acid hematoxylin staining method，azo pink-tannic acid method and hematoxylin pigment alkaline complex red bitter ignorant acid staining method method of operation were analyzed. Results Striated muscle fibers，cellulose，nuclei，nucleoli and glial fiber was blue and collagen fiber and reticular fiber，the cartilage matrix was brownish red，elastic fibers was purple. Conclusion The need to prove why and distinguish the sources of muscle fiber，the need for different conditions，using special staining corresponding display and observation.

【Key words】Muscle tissue staining，Pathology

【中图分类号】R361

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2016）03-0170-02

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2016.03.125