免疫层析试纸条检测实验感染猪旋毛虫抗体的研究

李雁萍

（山西省畜牧兽医学校，山西太原 030024）



免疫层析试纸条检测实验感染猪旋毛虫抗体的研究

李雁萍

（山西省畜牧兽医学校，山西太原 030024）

［摘 要］旋毛虫又称“旋毛形线虫”，感染此病而诱发的旋毛虫病对人体危害大。目前，检验肉质中旋毛虫的方法，有肌肉压片镜检法和人工消化法，因各有弊端难以推广使用。笔者推荐免疫层析试纸条检测猪旋毛虫，方法：制备免疫层析试纸条，实验用猪30头，均采购本地规模猪场。分为2组，1组为感染组，20头；1组为正常组，10头。感染组，每头经5000条旋毛虫幼虫感染，试纸条进行血清及肉汁抗体检测，并与镜检法进行比较。结果：使用的免疫层析试纸条，具有操作简单、便捷快速、不需专业技能等优点，更便于推广应用。而且，更适合试纸条检测肉汁中旋毛虫抗体可用于新鲜肉及冷冻猪肉中旋毛虫检疫的初筛。

［关键词］旋毛虫抗体检测实验

1　前言

旋毛虫又称“旋毛形线虫”，感染此病而诱发的旋毛虫病对人体危害大。而致病程度，同样与诸多因素相关。例如：食入幼虫囊的数量、侵害人体的部位、机体本身功能状态。尤其，自身机体对旋毛虫免疫抗体能力的强弱，同样关系到此病的危害。多数情况，轻者症状不明显，重者临床症状复杂。诊治不及时，将在发病后1周死亡。

目前，检验肉质中旋毛虫的方法，有经典的肌肉压片镜检法，以及国际旋毛虫病委员推荐的人工消化法。肌肉压片镜检法有存在漏检的可能，尤其对肌肉不成囊的伪旋毛虫检出率较低。人工消化法是目前检测旋毛虫病的“硬标准”，但存在操作复杂，耗时较长的问题。

对此，20世纪90年代，出现一种新的检测技术—胶体金免疫层析法，具有操作简单、使用便捷、检出率快等优点。鉴于此，笔者制备免疫层析试纸条，实验尝试检测猪体中的旋毛虫。同时，为验证此试纸条用于旋毛虫的检疫效果，采集经旋毛虫幼虫感染后猪的血清和肉汁抗体，用试纸条检测与镜检结果比较效果。

2　免疫层析试纸条检测实验感染猪肉汁抗旋毛虫抗体的研究

2.1实验对象

虫种：实验选用旋毛虫，为本地太原猪源旋毛虫，由小鼠传代保种。

猪体：实验选用猪体，为2月龄健康本地猪。准备用30头，均采购本地规模猪场。分为2组，1组为感染组，20头；1组为正常组，10头。

2.2猪体感染

实验选用猪体，为2月龄健康本地猪。实验组用猪20头，取5000条旋毛虫幼虫，每头经口腔感染。感染后1周，无菌剖杀。剖杀前，采取血清。剖杀后，取膈肌一小块，压片镜检，检查有无旋毛虫感染。取实验猪臀肌、膈肌，将其分别密封放置在塑料管内，置于-20℃贮藏。检测时，待4℃下，制备肉汁。

2.3免疫层析试纸的制备

免疫层析试纸条的制备，用枸缘酸三钠还原氯金酸，制备颗粒直径为15 nm的胶体金溶液。测定胶体金的适宜SPA标记量，制备胶体金标SPA，用玻璃纤维吸附标记物，冷冻干燥制成结合垫。将旋毛虫肌幼虫排泄分泌（excre-tory-secretory，ES）抗原和人免疫球蛋白IgG（ Sigm。公司产品）在硝酸纤维素膜（NCM）上分别包被检测（test，T）线和质控（control，C）线，室温干燥后用3%的脱脂奶粉封闭；将结合垫、包被好的NCM、吸水材料组装在支持板上，并切割成3mm宽的试纸条，即为免疫层析试纸条，注明生产批次和时间，密封后4℃保存备用。

2.4检测方法

准备检测时，取试纸条，将测试端插入待测样本。样本猪血清，1：32稀释；肉汁，1：2稀释，待测10～20s后，有液体泳动NCM上时，取试纸条平放，半小时内观察变化情况。一般情况下，检测线和质控线显2条紫红色线时，可判定为阳性。仅一条质控线显紫红色时，可判定为阴性。如果不出现质控线，则表明试纸条失效。

2.5检测结果

经5000旋毛虫幼虫感染，用试纸检测血清抗体，阳性率为100%；用试纸检测臀肌、膈肌肉汁抗体，阳性率为100%。用试纸检测正常对照组血清和肉汁，均为阴性。而且，膈肌、臀肌压片镜检，虫体检测率同样高达100%。而且，每克腿肌，幼虫含量平均在231.36条。而正常组猪膈肌、腿肌，经镜检，均未发现有旋毛幼虫。

3　结果讨论

有学者尝试以100、300、500条旋毛虫感染昆明小鼠，3组小鼠感染后不同时间用ELISA检测肉汁与血清抗体水平均具有相关性；3组小鼠感染后6w用试纸条检测时血清与肉汁抗体阳性率均为100%。笔者还发现感染旋毛虫的小鼠隔肌虫荷与血清及肉汁抗体水平无相关性，每克小鼠肌肉仅含0.88条幼虫时，试纸条检测时亦为阳性。本文应用试纸条对5 000旋毛虫幼虫感染猪后10w的血清及肉汁检测时的抗体阳性率均为100%。

国外学者Nockler等，分别取200条、1000条、20000条旋毛虫幼虫感染猪只，感染后2个月，宰杀取血清、膈肌肉汁，用ELISA检测，发现被感染血清、肉汁中的旋毛虫抗体水平有着很强的相关性。由此可得出这样的结论，当猪只宰杀后，血清采集较困难时，完全可经酮体采集肉汁替代血清检测抗体。国外学者Kapel等，经同样的感染实验后，发现心肌抗体最高。其次，舌肌、膈肌、咬肌。而本次实验，经感染后的膈肌肉汁、臀肌肉汁，抗体检测阳性率均为100%；膈肌、臀肌，压片镜检虫体检出率同样达100%。由此可见，经镜检和试纸对旋毛虫病的检测敏感程度相同。此外，使用的免疫层析试纸条，对囊虫病、弓形虫病等寄生虫病均为交叉反应。同时，具有操作简单、便捷快速、不需专业技能等优点，更便于推广应用。经检测被感染猪肌肉冷藏-20℃8个月的肉汁抗体，与新鲜猪肉抗体检出率相似。

参考文献

［1］ 王中全，王洁，崔晶，等.免疫层析试纸条检测轻度感染小鼠肉汁抗旋毛虫抗体的研究［J］.中国人兽共患病学报，2008，24 （1）：9-12.

［2］ 秦银霞，崔晶，王中全.免疫层析试纸条诊断旋毛虫病的研究［J］.中国人兽共患病学报，2007，（9）：866-868.

［3］ 王洁，崔晶，王中全，等.小鼠实验感染不同种旋毛虫后肉汁抗体水平的研究［J］.中国预防兽医学报，2008，30（5）：393-397.