临床病死犬细菌分离鉴定及耐药性分析

李　超，王作昭，王玉英，康　泰，项路娟，黄　凯，纪鸿翔，杨宗统，尹燕博

（1.青岛农业大学动物科技学院，山东 青岛 266109；2.吉林大学军需科技学院，吉林 长春 130062；3.青岛博隆实验动物有限公司，山东 青岛 266225；4.青岛澳兰百特生物工程有限公司，山东 青岛 266101）

临床病死犬细菌分离鉴定及耐药性分析

李超1，王作昭2，王玉英1，康泰1，项路娟3，黄凯3，纪鸿翔4，杨宗统1，尹燕博1

（1.青岛农业大学动物科技学院，山东 青岛 266109；2.吉林大学军需科技学院，吉林 长春 130062；3.青岛博隆实验动物有限公司，山东 青岛 266225；4.青岛澳兰百特生物工程有限公司，山东 青岛 266101）

为更全面地掌握犬源细菌的流行及抗生素耐药情况，本试验对2012-2015年采集自某规模化养殖场的60余份病死犬样本进行细菌分离鉴定，并参考CLSI推荐的纸片扩散法检测了部分分离菌对21种抗菌药物的敏感性。结果显示，3年共计分离鉴定出28株病原菌和条件致病菌，混合感染为犬细菌感染的主要形式；分离菌普遍呈多重耐药，以大肠杆菌耐药性最为严重。犬的细菌感染应在临床引起足够的重视，临床治疗应合理有效用药。

犬源细菌；分离鉴定；耐药性

宠物携带的病原菌呈现耐药率升高的趋势，耐药谱也越来越广，尤其是一些重要的人兽共患病病原菌，对人类健康造成严重威胁，宠物细菌耐药性助推了人兽共患细菌病的流行[1-2]。鉴于宠物细菌病是影响人类健康的重要问题，因此，加强宠物性细菌病的预防、控制和对策研究，是提高我国人类健康水平的重要措施[3]。为更全面地掌握犬源细菌的流行及其为犬的细菌病的控制提供用药依据，本研究对2012-2015年3年间临床病死犬进行了病理剖检、细菌分离鉴定和药敏试验，从而为犬细菌病的预防和控制奠定基础。

1　材料与方法

1.1试剂材料药敏纸片、微量生化鉴定管，购自浙江省杭州天和微生物试剂有限公司；营养琼脂（NA）、麦康凯培养基（MAC）、伊红美蓝培养基（EMB）、S.S.琼脂培养基、胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）培养基等，购自青岛高科园海博生物技术有限公司；血琼脂平板自行配置；其他试剂材料均由青岛澳兰百特生物工程有限公司诊断中心提供。

1.2细菌的分离与鉴定病料是某规模化比格犬养殖场送检的临床症状表现为腹泻、咳嗽及皮肤病等症状的病死犬，按照标准的实验室微生物鉴定方法（如革兰染色、生化鉴定等）和分子生物学方法鉴定分离菌，鉴定好的菌株于-80℃下保存于含25%甘油的无菌生理盐水中。

1.3抗菌药物的敏感性试验采用CLSI推荐的纸片扩散法对部分分离细菌进行药物敏感性试验，根据CLSI动物种特异的兽医病原菌抑菌圈直径解释标准[4]进行判定。

2　结果与分析

2.1细菌的分离与鉴定本研究从2012-2015年共计分离鉴定出28株病原菌和条件致病菌，其中包括大肠杆菌11株、假单胞菌2株、葡萄球菌2株，巴氏杆菌2株，链球菌、节杆菌、鞘氨醇单胞菌、温和气单胞菌、奇异变形杆菌、枯草芽孢杆菌、变形菌、志贺菌、嗜血红素嗜血杆菌、产碱普罗威登斯菌、约氏乳酸杆菌各1株。大肠杆菌的分离率最高，为39.3%。

2.2分离菌耐药性研究结果由表1可知，2012-2015年临床病死犬分离菌的耐药情况，18株测试菌株中除嗜血杆菌、巴氏杆菌、假单胞菌外，其他分离菌株普遍呈多重耐药性，耐药菌株存在“耐同类药物中的多重药物”的情况。由表2可知，9株测试的大肠杆菌中，除阿米卡星、头孢西丁、头孢他啶外，对其他15种所测试抗生素的耐药率均超过50%，对头孢克肟的耐药率高达100%。

3　讨论

统计细菌混合感染情况发现，细菌感染的17份样本中，细菌多重感染为9份，混合感染率为52.9%。犬的细菌混合感染时常出现，这可能与呼吸道生理环境、细菌的“二次感染”和耐药菌株的出现有关[5]。“双重感染率”为41.2%，分别为温和气单胞菌和奇异变形杆菌混合感染，枯草芽孢杆菌与金黄色葡萄球菌混合感染，大肠杆菌与节杆菌混合感染，大肠杆菌与鞘氨醇单胞菌混合感染，大肠杆菌与产碱普罗威登斯菌混合感染，大肠杆菌与约氏乳酸杆菌混合感染，嗜血红素嗜血杆菌与巴氏杆菌混合感染；“三重感染率”为11.8%，分别为大肠杆菌、巴氏杆菌、假单胞菌混合感染，大肠杆菌、志贺菌、假单胞菌混合感染，大肠杆菌参与混合感染的频率最高。

细菌在犬的化脓创、皮肤病、肺炎等病程中起着关键的作用，化脓创是致病菌经皮肤或伤口侵入机体出现一系列应答反应的结果[6]；而继发细菌感染的脓皮病，治疗难度更大，如治疗不及时可导致败血症死亡[7]；本试验发现犬肺炎的主要致病微生物包括大肠杆菌、假单胞菌、巴氏杆菌和土壤源细菌，犬肺炎感染的病原菌大多为“双重感染”或“三重感染”、革兰阳性菌与革兰阴性菌混合感染；节杆菌和鞘氨醇单胞菌是从犬体内分离到的2株土壤源细菌；巴氏杆菌、假单胞菌、志贺菌、奇异变形杆菌等是分离到的人兽共患病细菌。

抗菌药物在养殖业的广泛应用引起了动物源细菌耐药性的日益加重与广泛传播，动物源细菌耐药性的流行加大了疫病的防控难度，给养殖业造成巨大损失[8]。为防止耐药性的产生，应尽可能选用窄谱抗生素，避免治疗初就选用广谱抗生素，经验用药时，应尽量避开耐药性已很高的品种，从而获得确切疗效。监测细菌耐药性、指导合理使用抗菌药物是抗感染治疗的重点[9]。犬的细菌性疾病治疗过程中，按规定剂量、规定方法和疗程用药，切勿乱用药，这是避免耐药菌株继续增多的根本方法。

能量缺乏是造成某些细菌感染的重要因素，在犬只缺乏能量的情况下，抵抗力下降，机体平衡失调从而造成细菌感染。细菌感染可导致犬营养不良、生长发育障碍和工作能力丧失，导致幼龄犬死亡率升高。为防止细菌病的发生，规模化养殖场应最大限度的避免或防止犬出现应激反应，日粮中应注意营养搭配均衡，保证日常能量所需，保证良好的饲养管理条件，加强环境卫生管理，做好必要的消毒工作。

[1]Johnson J K，Perencevich E N，Lincalis D P，et al.Dog bite trans⁃mission of antibiotic-resistant bacteria to a human[J].Infect Con⁃trol Hosp Epidemiol，2006，27（7）：762-763.

[2]焦新安，黄金林.宠物重要人兽共患细菌病流行现状及其控制策略[J].中国比较医学杂志，2010，11、12：015.

[3]李金元，程抱林，王远清，等.宠物疫病防控的隐患与对策[J].养殖与饲料，2009，4：102-104.

[4]CLSI.Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated From Animals；Ap⁃proved Standard-Fourth Edition[J].CLSI document VET01-A4. Wayne，PA：Clinical and Laboratory Standards Institute，2013.

[5]张晓远.犬呼吸道致病菌药敏试验[J].中国兽医杂志，2012，45（8）：60-61.

[6]左之才，邓俊良，余树民，等.手术开放疗法治愈犬顽固性耳血肿[J].黑龙江畜牧兽医，2006（9）：83-85.

[7]张旭，曾玲.中间型葡萄球菌的鉴定及抗生素敏感性观察[J].实用医技杂志，2003，10（5）：504-505.

[8]吴聪明，汪洋.动物源细菌耐药性监测与流行病学研究[J].中国兽药杂志，2010，44（1）：23-25.

[9]沈磊磊，虞耀土，张忠杰，等.细菌分离培养和药敏试验对兽医临床用药的指导意义[J].浙江畜牧兽医，2008（2）：30-31.

S852.65+5

B

0529-6005（2016）07-0090-02

2015-03-23

李超（1989-），男，硕士生，从事预防兽医学研究工作，E-mail：lichao07115614@126.com
王作昭（1979-），男，实验师，硕士，从事实验室相关工作，E-mail：zuozhaowang@163.com
注：王作昭与李超对本文具有同等贡献

尹燕博，E-mail：yanboyin2011@163.com