两种结核菌培养基培养抗酸杆菌应用评价

黄菲菲

(苏州工业园区娄葑医院检验科　江苏　苏州　215000)



两种结核菌培养基培养抗酸杆菌应用评价

黄菲菲

(苏州工业园区娄葑医院检验科江苏苏州215000)

【摘要】目的：探讨罗氏培养基与本实验室自制罗氏培养基对抗酸杆菌检测的效果。方法：本次选取痰标本40份，标准菌株10份，同时对罗氏培养基及实验室自制罗氏培养基接种，记录阳性出现时间，阳性率，污染率，生长时间，并展开不同培养基间的对比。结果：本次送检的40份痰标本中，罗氏培养基阳性和实验室自制罗氏培养基阳性均为7例，占17.5%，无明显差异(P>0.05)。罗氏培养基污染率为5%，自制培养基污染率为15%，有统计学差异(P<0.05)。两组出现阳性的时间即生长时间无差异(P>0.05)。但10份标准菌株在罗氏培养基上生长的时间明显短于在自制培养基上生长的时间，有统计学差异(P<0.05)。结论：临床针对结核菌，采用不同的培养基对抗酸杆菌培养，结果示贝索罗氏培养基在抗酸杆菌检测效果上优于自制，降低了污染率，缩短了培养时间，具有非常重要的应用价值，有临床有广泛的实施前景，为结核病的防治提供了强有力的保障。

【关键词】罗氏培养基；实验室自制罗氏培养基；抗酸杆菌

结核病对人类健康构成了极大危害，目前诊断时，仍以抗酸杆菌分离培养为金标准，在早期发现和治疗控制疾病上意义显著。对合适的结核菌培养基进行选择，对提高阳性率，降低污染率等具非常重要的价值。本次选取相关痰标本，分别采用罗氏培养基和实验室自制罗氏培养基检测效果展开对比，现总结结果如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料 选取我院患者痰标本40例，H37RV质控菌株标准菌株10份。贝索罗氏培养基，本实验室自制培养基。主要成份为新鲜鸡蛋液、天门冬素、孔雀石绿、马铃薯粉。培养前对削尖化液处理，主要成分为氢氧化钠、柠檬酸钠、N-乙酰-L-半胱氨酸，依据《结核病诊断实验室检验规程》配置。

1.2 方法 准备仪器和设备，包括曲线控制恒温培养箱，蒸汽血清凝固器等。用消化液消化痰标本15min后，取缓冲液加入中和，行3000r/min离心操作，取沉淀在1支贝索罗氏培养基和1支实验室自制罗氏培养基中接种，为0.2ml接种量；均对标准菌株稀释1个麦氏单位后，在孵育箱(37℃)中放置培养，每日行1次观察，对菌落肉眼可见的时间记录。出现菌落生长情况，立即实施涂片染色镜检，对是否为抗酸杆菌进行确定，若为抗酸杆菌，即按培养阳性判断。无菌落生长5d，按阴性统计。

1.3 统计学分析 统计学软件采用SPSS13.0版，组间计量数据采用(x±s)表示，计量资料行t检验，计数资料行X2检验，P<0.05差异有统计学意义。

2.结果

本次送检的40份痰标本中，罗氏培养基阳性和实验室自制罗氏培养基阳性均为7例，占17.5%，无明显差异(P>0.05)。罗氏培养基污染率为5%，自制培养基污染率为15%，有统计学差异(P<0.05)。两组出现阳性的时间即生长时间无差异(P>0.05)。但10份标准菌株在罗氏培养基上生长的时间明显短于在自制培养基上生长的时间，有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1　两种培养基培养效果比较 (x±s，d)

注：*P<0.05。

3.讨论

3.1 结核病诊断中抗酸杆菌分离培养价值

在痰标本中，抗酸杆菌与各种杂菌同时存在，要将抗酸杆菌分离，需将其他痰标本中的杂菌杀死，且要尽量多的抗酸杆菌存活。在实施抗酸杆菌分离培养时，存在污染率情况的高低，与培养基的选择、前处理方法、操作技术、标本性状等因素有密切关联。前处理应用药物有较高的浓度，处理时间越长，越可起到较好的杀菌效果，降低了杂菌污染率，但相对的，也可对抗菌杆菌的生长抑制，可能对阳性率产生影响。结核病诊断中，抗酸杆菌分离培养意义显著，是早期发现结核病的重要措施。虽多项报道均显示，相较固定培养基，在抗酸杆菌检测中，液体培养效果更为明显，但液体培养基及仪器设备昂贵，在基层实验室工作开展中不适合应用。本次选取的贝索罗氏培养基，无需配合自动化仪器设备，价格低，为临床普及提供了较好条件。结核病在临床属一种慢性传染性疾病，相较实验室自制罗氏培养基，贝索公司罗氏培养基具污染率低、快速等特点，可对抗酸杆菌生长形态直观观察。

3.2 贝索罗氏培养基特点及优势

抗酸杆菌属非运动性、非孢子生殖、需氧的细菌，有较慢的生长速度，一代繁殖用时是2h至>20h，品种不同，表现也有差异。故在抗酸杆菌培养基中可用的种类较多，可大致按液体培养基和蛋基培固定养基划分。以对罗氏培养管属所含有的蛋基固定培养基特色包括：若确保不蒸发干化，可较长时间冷藏储存。因制备时经蒸汽灭蛋白质和灭菌的过程，不易引起吹件。相较琼脂培养基，大多数分枝杆菌在培养基中可更好生长。培养基中含有的鸡蛋液和丙三醇配方对结核分枝杆菌的生长起到了促进作用，并提供给机体最佳的养分和环境，且孔雀石绿对结构分枝杆菌生长未造成影响，可对其它杂菌的生长有效抑制。而临床针对液体培养基培养，多为自动化培养，可就抗酸杆菌生长的更好的条件和环境进行提供，但对仪器设备有较高的要求。此外，本次贝索罗氏培养基在感染率上，低于实验室自制培养基，这可能与样本数较小相关，而贝索培养基污染率较实验室自制罗氏培养基低，表明有较强的抗污染能力。

3.3 贝索罗氏培养基检测结果

传统培养抗酸杆菌的方法是需行4-8周培养才可生长。本次研究中，针对痰标本培养，贝索罗氏培养基与自制培养基在培养阳性平均速度上无明显差异，但在对标准菌株培养时，贝索罗氏培养基速度明显快于自制培养机，阳性出现的时间分别为(6.1±1.2)d、(15.2±2.1)d。分析培养结果，虽两种培养基在阳性结果和阳性率上一致，但阳性出现的时间有一定差异性。阳性出现的平均时间贝索罗氏培养基相较实验室自制罗氏培养基明显提高。可能与贝索罗氏培养基在含量及成份上均与自制罗氏培养基有所区别，加之其工艺控制较好，规模化生长，也为其获得较好的培养结果提供了理想的条件；同时也可能与抗酸杆菌对抗生素的拮抗作用、生长环境及遗传特性等多因素相关。而在培养痰标本时，两组有表现相当的生长时间，可能与样本量选取的偏少相关。蔡兴珊等报道，针对7583例送检标本采用罗氏培养基增培养，阳性出现的时间为24.6d，接近于本次研究。

综上，临床针对结核菌，采用不同的培养基对抗酸杆菌培养，结果示贝索罗氏培养基在抗酸杆菌检测效果上优于自制，降低了污染率，缩短了培养时间，具有非常重要的应用价值，有临床有广泛的实施前景，为结核病的防治提供了强有力的保障。

参考文献

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【中图分类号】R825.2

【文献标识码】B

【文章编号】1009-6019(2015)23-0062-02