兔巴氏杆菌病的诊断与药敏试验

郑吾兴（山东省博兴县畜牧兽医局山东滨州256500）

兔巴氏杆菌病的诊断与药敏试验

郑吾兴
（山东省博兴县畜牧兽医局山东滨州256500）

2015年11月，山东省博兴某兔场发生了一起以兔体温升高、精神沉郁、呼吸急促、流黏液性鼻液为主要特征的疫病。为对疫病进行确诊，并为疫病的防治提供参考依据，本研究经发病情况、临床特征、病理变化等临床诊断以及涂片镜检、细菌分离培养、生化试验、致病性试验、PCR检测等实验室诊断确诊为兔巴氏杆菌病，药敏试验显示病原菌对氟苯尼考等15种药物高度或中度敏感，为发病兔场确定了致病原因并提供了治疗性药物。

兔巴氏杆菌；诊断；药敏试验

兔巴氏杆菌病（Rabbit pasteurellosis）是由兔多杀性巴氏杆菌（Pasteurelamultocida）引起兔的一种急性、烈性、高度接触性传染病［1］，该病发病率高，传播途径多，传播速度快，发病后若治疗措施不及时可引起兔大批死亡，若治疗措施及时可明显降低死亡率，但也会引起兔生长迟缓及治疗费用增加等［2］，使该病成为困扰我国养兔业健康发展的主要疾病之一。

2015年11月，山东省博兴某兔场发生了一起以兔体温升高、精神沉郁、呼吸急促、流黏液性鼻液为主要特征的疫病，根据发病情况、临床特征、病理变化等初步诊断为疑似兔巴氏杆菌感染，为进一步确诊，本研究进行了涉及涂片镜检、细菌分离培养、生化试验、致病性试验、PCR检测等实验室诊断，并通过药敏试验掌握了针对该致病菌的敏感性药物，为兔场及时制定防控措施提供了参考。

1　发病情况

该兔场存栏兔1 000余只，发病兔221只，发病率达20%。兔发病后一般1～3 d死亡，死亡兔132只。该兔场曾进行过兔瘟疫苗的免疫，但未进行兔巴氏杆菌病疫苗的免疫。

2　临床症状

病兔表现为精神沉郁、食欲减退、体温升高、被毛凌乱、打喷嚏、呼吸急促、眼结膜和鼻腔黏膜出血、流黏液性鼻液。

3　病理变化

剖检病死兔可见鼻腔内积聚大量脓性黏液，鼻窦和副鼻窦黏膜红肿，鼻腔黏膜部分区域糜烂，喉气管有点状出血，肺气肿、出血，脾脏肿大，小肠、肠系膜出血。

4　涂片镜检

无菌采取病死兔的肺、肝脏等组织涂片、革兰氏染色、镜检，可见革兰氏阴性、短杆菌，单个或多个散在排列。

5　细菌分离培养

将无菌采取的肺、肝脏等组织接种于血清琼脂平板，37℃培养箱中培养24 h，可见边缘整齐、光滑湿润、半透明、灰白色菌落。取典型菌落经涂片、革兰氏染色、镜检，可见革兰氏阴性短杆菌。

6　生化试验

将分离菌株培养液接种各种生化反应管，结果显示，分离菌株能发酵果糖、葡萄糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇，不能发酵乳糖、麦芽糖、肌醇，吲哚、触酶、氧化酶试验为阳性，尿素、VP试验为阴性，符合巴氏杆菌的生化特性。

7　致病性试验

将10只健康家兔随机分为2组（试验组和对照组），试验组兔每只颈部皮下注射分离菌株培养物1.0m L（1.0×1010CFU/m L），对照组兔每只颈部皮下注射灭菌培养基1.0mL。12 h后，试验组兔开始出现精神沉郁、体温升高、咳嗽等症状，24～48 h内死亡4只，1只兔在48 h后症状开始减轻，逐步恢复健康，但极度消瘦，10 d后剖杀。死亡兔的病理变化主要表现在肺出血、坏死，心外膜、呼吸道黏膜、淋巴结有出血点。未死亡兔出现肺出血，脓肿严重。死亡兔和未死亡兔的肺、肝等组织经涂片、革兰氏染色、镜检，均可见为革兰氏阴性短杆菌。对照组的5只兔全部健活，无任何临床症状。

8　PCR检测

参照秦翠丽等［3］的方法设计合成1对兔巴氏杆菌检测引物，并参照秦翠丽等［3］的PCR扩增方法进行分离菌株的PCR检测，结果显示分离菌株的PCR扩增产物在526 bp处有一条特异性条带，与秦翠丽等［3］报道的大小完全一致，说明分离菌株为兔多杀性巴氏杆菌。

9　药敏试验

按常规方法测定分离菌株对常见药物的敏感性，结果显示分离菌株对氟苯尼考、氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻呋、磺胺六甲氧嘧啶、四环素、阿莫西林等7种药物高度敏感，对诺氟沙星、氯霉素、头孢曲松钠、阿米卡星、氨苄西林、庆大霉素、红霉素、头孢曲松钠等8种药物中度敏感，对新霉素、磷霉素2种药物耐药。

10　讨论

由于本研究中的病例需要提供针对致病菌的治疗性药物，因此通过病原菌的分离鉴定与PCR检测相结合的方法进行了病例的确诊，使确诊结果更加准确、可靠。从本研究中的药敏试验结果来看，此兔场用药比较合理，17种常见药物中仅有2种药物耐药，耐药性并不是十分严重，但17种之中也有8种药物的敏感性降低，应引起重视。（编辑:赵晓松）

［1］石刚，张耀鹏，尹生辉.兔巴氏杆菌病的诊断要点及综合防控措施［J］.畜牧与饲料科学，2015，35（8）:125-126.

［2］祖立闯，李娇，王金良，等.兔巴氏杆菌病的诊断与综合防治［J］.中国养兔，2015（，5）:32-35.

［3］秦翠丽，牛明福，李松彪，等.兔多杀性巴氏杆菌PCR检测方法建立及优化［J］.中国公共卫生，2011，27（4）:527-528.

The Diagnosis of Rabbit Pasteurellosis and Drug Sensitive Test

Zheng Wuxing
（AnimalHusbandry and Veterinary Bureau，BinZhou ShanDong，256500）

In November 2015， Shandong Province Boxing a rabbit farm there was a rabbit fever， depression，shortness of breath， nasal mucus flow as the main feature of the disease. For the disease were diagnosed， and provide reference for the prevention and treatment of disease， the clinical diagnosis of the present study was approved by the incidence， clinical features， pathological changes and smear microscopy， bacterial isolation and culture， biochemical tests， pathogenicity test， PCR testing laboratory diagnosis diagnosed with pasteurellosis rabbit， susceptibility test showed the pathogen to florfenicol and other 15 kinds of drugs highly or moderately sensitive to determine the causes for the onset of rabbit farm and provides a therapeutic drug.

Rabbit pasteurellosis； Diagnostic； sensitivity test

10.3969/j.issn.1008-4754.2016.8.041

郑吾兴（1968-），男，汉族，本科，助理兽医师，研究方向：临床兽医。