橙皮苷对D-氨基半乳糖小鼠急性肝损伤氧化应激的影响

龚子恒　(荆州中学高三6班，湖北 荆州 434000)

范瑞琴　(荆州市第二人民医院肝病科，湖北 荆州 434000)



橙皮苷对D-氨基半乳糖小鼠急性肝损伤氧化应激的影响

龚子恒(荆州中学高三6班，湖北 荆州 434000)

范瑞琴(荆州市第二人民医院肝病科，湖北 荆州 434000)

[摘要]目的：研究橙皮苷对D-氨基半乳糖(D-GalN)小鼠急性肝损伤氧化应激的影响。方法：40只小鼠随机分为正常组、模型组、橙皮苷低、高剂量组，各组分别灌胃给药7d后，通过腹腔注射D-GalN诱导急性肝损伤模型，计算小鼠肝指数，测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛 (MDA)。结果：模型组与正常组比较小鼠肝指数显著升高，血清ALT、AST及ALP水平显著升高，肝组织匀浆中GSH-Px 、SOD活性显著降低，MDA含量显著升高。橙皮苷低、高剂量组与模型组比较，降低了D-GalN致肝损伤小鼠肝指数，降低血清中ALT、AST及ALP水平，提高肝组织匀浆中GSH-Px 、SOD活性，降低MDA含量。结论：橙皮苷对D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤具有明显保护作用，其机制可能与减轻小鼠肝损伤氧化应激反应有关。

[关键词]橙皮苷；D-氨基半乳糖；肝损伤；氧化应激

橙皮苷是橙皮素与芸香糖形成的二氢黄酮苷类化合物，广泛存在于豆科、芸香科、柑橘属等植物之中，在柑橘类植物果皮内含量尤为丰富[1]。研究发现，橙皮苷具有抗菌、抗氧化、抗血栓形成及抗肿瘤等多种药理学作用[2,3]。本实验采用D-GalN致小鼠急性肝损伤模型，研讨橙皮苷对急性肝损伤氧化应激的影响。

1材料与方法

1.1动物

昆明种雄性小鼠40只，体重18～20g，由武汉大学动物实验中心提供。

1.2药物

橙皮苷和D-氨基半乳糖(D-GalN)均购于Sigma公司；羧甲基纤维素钠(CMC-Na)购于上海国药集团；谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等购于南京建成生物工程研究所。

1.3方法

1)分组与给药将小鼠随机分为4组，即正常组、模型组、橙皮苷低剂量组(150mg/kg)及高剂量组(300mg/kg)。正常组及模型组给予0.5%CMC-Na灌胃，橙皮苷低、高剂量组将橙皮苷溶于0.5%CMC-Na配成不同剂量的溶液灌胃，持续7天。末次给药2h 后，除正常组外，剩余各组腹腔注射10%D-GalN生理盐水溶液600mg/kg诱导小鼠急性肝损伤。末次处理后各组动物禁食24h，不禁水。

2)标本检测指标小鼠摘眼球取血，静置后离心分离血清，严格参照试剂盒说明检测ALT、AST及ALP水平。小鼠处死后立即摘取肝脏，生理盐水漂洗，吸干准确称重，肝指数(%)=(肝脏重量/ 体重)×100%。取部分肝左叶组织制备10% 肝匀浆，检测GSH-Px 、SOD及MDA水平。

1.4统计学分析

2结果

2.1橙皮苷对肝指数的影响

表1　橙皮苷对肝指数的影响

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，下同。

模型组与正常组比较肝指数显著升高(P<0.01)，而橙皮苷低、高剂量组与模型组比较肝指数显著降低(P<0.01)，见表1。

2.2橙皮苷对血清ALT、AST及ALP的影响

模型组与对照组比较，ALT、AST及ALP水平显著升高(P<0.01)。橙皮苷低、高剂量组与模型组比较，ALT、AST及ALP水平显著降低(P<0.05或P<0.01)，其中高剂量组作用更明显(P<0.01)，见表2。

表2　橙皮苷对血清ALT、AST及ALP的影响

2.3橙皮苷对肝组织中GSH-Px 、SOD及MDA的影响

模型组与正常组比较，肝组织匀浆中GSH-Px 、SOD的活性显著降低(P<0.01)，MDA的含量显著升高(P<0.01)；橙皮苷低、高剂量组与模型组比较，显著升高肝组织中GSH-Px 、SOD活性，显著降低MDA含量(P<0.01)，见表3。

表3　橙皮苷对肝组织中GSH-Px、SOD及MDA的影响

3讨论

D-GalN导致小鼠急性肝损伤是一种经典的筛选保肝药物的动物模型，与人类急性肝炎的病理学变化相似[4]。D-GalN作为一种磷酸尿嘧啶核苷酸干扰剂，通过竞争生成二磷酸尿苷半乳糖使磷酸尿苷耗竭，引起肝细胞代谢障碍，导致肝细胞凋亡或死亡；同时过量自由基的产生和膜脂过氧化反应，损伤细胞膜结构，改变膜的通透性，影响肝细胞功能，最终导致肝损伤[5]。本研究发现，模型组肝功能指标ALT、AST、ALP水平及肝指数显著升高，表明肝损伤模型诱导成功；肝组织匀浆中GSH-Px 、SOD的活性显著降低，MDA的含量显著升高，提示模型组肝损伤与氧化应激反应有关。

橙皮苷给药干预结果显示，低、高剂量组与模型组相比，显著降低了小鼠肝指数，降低ALT、AST及ALP水平，且有一定的剂量依赖关系，明显改善肝组织病变程度，表明橙皮苷对D-GalN导致的急性肝损伤有一定的保护作用。研究还发现，肝组织匀浆中GSH-Px、SOD活性显著升高，MDA含量显著下降，机体内抗氧化体系包括酶和非酶系统两类，酶系统中重要的抗氧化酶有GSH-Px和SOD等，能有效清除代谢过程中产生的自由基，MDA是膜脂过氧化的终产物，伤害细胞膜结构，其含量高低可以判断肝细胞损伤程度及氧化应激水平[6]，提示橙皮苷对肝损伤的保护机制可能与提高肝脏抗氧化酶活性，清除氧自由基，防止过度的氧化应激反应有关。

本研究证实中药有效成分橙皮苷对D-GalN诱导的急性肝损伤有较好的保护作用，其机制可能与减轻小鼠肝损伤氧化应激反应有关，此结果为开发有效的病毒性肝炎防治药物奠定实验基础，但橙皮苷药理学作用广泛，是否还有其他保肝作用机理尚需进一步探究。

[参考文献]

[1]李荣，胡成穆，姜辉，等.橙皮苷的提取及其抗炎活性研究[J].安徽医科大学学报，2007，42(5)：546～549.

[2]Morand C, Dubray C, Milenkovic D, et al.Hesperidin contributes to the vascular protective effects of orange juice: a randomized crossover study in healthy volunteers[J].Am J Clin Nutr, 2011,93(1)：73～80.

[3]Pradeep K, Ko K C, Choi M H, et al.Protective effect of hesperidin, a citrus flavanoglycone, against γ-radiation-induced tissue damage in Sprague-Dawley rats[J].J Med Food, 2012, 15(5)：419～427.

[4]Keppler D，Lesch R，Reutter W，et al.Experimental hepatitis induced by D-galactosamine[J].Exp Mol Pathol，1968，9(2)：279～290.

[5]Decker K，Keppler D.Galactosamine hepatitis: key role of the nucleotide deficiency period in the pathogenesis of cell injury and cell death[J].Rev Physiol Biochem Pharmacol，1974，71：77～106.

[6]Zheng S，Sanada H，Dohi H，et al.Suppressive Effect of Modified Arabinoxylan from Rice Bran (MGN-3) on D-Galactosamine-Induced IL-18 Expression and Hepatitis in Rats[J].Biosci Biotechnol Biochem，2012，76(5)：942～946.

[编辑]方多

[引著格式]龚子恒，范瑞琴.橙皮苷对D-氨基半乳糖小鼠急性肝损伤氧化应激的影响[J].长江大学学报(自科版)，2015，12(36)： 98～99，107.

[中图分类号]R285.5

[文献标志码]A

[文章编号]1673-1409(2015)36-0098-02

通信作者：

[作者简介]龚子恒(1998-)，男，在读学生；范瑞琴，fanruiqing79@163.com。

[收稿日期]2015-09-04 2015-08-25