血瘀证与NF-kB信号通路的相关性探讨※

● 胡小勤 周 蓓 王 强 吴燕春

血瘀证与NF-kB信号通路的相关性探讨※

● 胡小勤*周 蓓 王 强 吴燕春

血瘀证见于多种疾病，是一种综合性的病理状态，形成机理非常复杂。研究证明，血瘀证形成与炎症反应、免疫失调关系密切。NF-κB通过调控众多靶基因的转录表达而在免疫应答、炎症反应等许多生理学过程中发挥重要作用。血瘀证与NF-κB信号通路从理论和实验中的研究结果表明：NF-κB信号通路在血瘀证形成中扮演重要角色。血瘀证与NF-κB信号通路的相关性探讨，将进一步揭示血瘀证炎症、免疫机制的分子生物学基础，深化血瘀证形成机理的研究。

血瘀证 NF-κB信号通路 理论探讨

证候本质的研究一直是中医基础理论研究的重要内容。血瘀证见于多种疾病，是一种综合性的病理状态，形成机理非常复杂。研究证明，血瘀证形成与炎症反应、免疫失调关系密切[1]。现代医学认为，NF-κB(核因子-κB)信号通路在机体的免疫应答、炎症反应等方面发挥重要作用[2，3]。信号通路的研究对象是机体的调控网络，是整体观指导下的生物分子间相互作用及其传递规律，符合中医学证候复杂性[4]的特点。血瘀证与NF-B信号通路虽然分属中医学和分子生物学两个理论体系，但都与炎症、免疫密切相关。

1 血瘀证与炎症免疫

近年来，血瘀证一直是中医学和中西医结合研究中较为活跃的领域。血瘀证与炎症反应及免疫失调密切相关，相关研究已有大量文献报道。

邵爱红等[5]通过检测血清样本超敏C反应蛋白(hs-CRP)与急性心肌梗死(AMI)患者血瘀证的相关性，结果发现AMI患者的血清hs-CRP表达较对照组显著升高，且血瘀证组高于非血瘀证组；血瘀证与hs-CRP水平呈正相关(r=0.239，P<0.05)，认为AMI患者具有一定程度炎性反应而在血瘀证中表达更为明显。

陈婵等[6]探讨了气虚血瘀证与单核细胞(PBMC)的相关性及其可能的炎症机制，通过复制心梗气虚血瘀证动物模型，采用半定量RT-PCR技术检测模型组及假手术组动物术后第7天、14天、28天外周血单核细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1的表达情况。结果发现不同时间点模型组动物单核细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1的表达均高于假手术组动物(P<0.05)。认为气虚血瘀证(心肌缺血)与单核细胞活化密切相关，可能成为该证候重要的微观指标。包怡敏等[7]通过皮下注射盐酸肾上腺素复合冰水浴造成大鼠血瘀证模型。发现模型组血清细胞因子TNF-α浓度与正常对照组比较显著升高，差异有统计学意义(P<0.001)。江泳等[8]将受试者分为阴虚热盛证、湿热困脾证、气阴两虚证、阴阳两虚证4组，每组之中再分成兼血瘀证和无血瘀证两个亚组，检测血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)等细胞因子含量。结果兼血瘀证组sICAM-1浓度显著大于无血瘀证组(P<0.05)。认为血瘀证贯穿于糖尿病始终，且与血管内皮细胞功能障碍具有相关性。

以上研究表明血瘀证与CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、sICAM-1等炎性因子存在密切相关性。

血瘀证与免疫功能失调关系密切。刘雅等[9]发现气虚血瘀证大鼠外周血T细胞亚型计数以CD8+T的减少更为显著，3H-TdR掺入量显著降低，肾上腺皮质功能先亢进而后又转入了抑制状态。认为气虚血瘀证动态演变过程中始终存在以T细胞数量、T细胞转化能力以及HPA轴免疫调节功能异常为主的免疫功能失衡。张博生等[10]对缺血性中风血瘀证患者的红细胞免疫功能进行了测定。结果表明，患者RBC-C3bRR明显低于正常，而RBC-ICR则明显高于正常，均有非常显著意义。认为缺血性中风血瘀证的发病与红细胞免疫功能减退有密切关系。

以上研究表明：血瘀证与外周血T细胞数量、T细胞转化能力、HPA轴免疫调节功能异常及红细胞免疫功能减退等相关。

马晓娟等[11]利用表达谱芯片技术，按照单通道芯片差异基因的筛选原则，分别筛选与冠心病血瘀证和非冠心病血瘀证相关的差异基因，两者共同的部分认为是血瘀证相关的差异基因。结果发现与炎症免疫相关的基因有5个，5条通路涉及炎症免疫反应。认为炎症和免疫反应在一定程度上介导了血瘀证的发生发展。

2 NF-κB信号通路与炎症免疫

NF-κB是一类能特异性地识别结合DNA的Rel类蛋白质二聚体转录因子。NF-κB家族有5个成员，最常见的形式是由p65和p50组成的异源二聚体。在静息细胞中，NF-κB与抑制性蛋白IκBs结合形成复合物，并被滞留于细胞质中而处于非活化状态；当细胞受到各种胞内外刺激时，IκBs被迅速地降解，NF-κB得以释放并进入细胞核，从而发挥其转录调节功能。NF-κB通过调控众多靶基因的转录表达而在免疫应答、炎症反应等许多生理学过程中发挥重要作用[12]。

3 血瘀证与NF-κB信号通路

信号转导是当前生命科学研究的热点[13]。目前，已有学者开始通过分析证候与信号转导通路之间的相关性来研究证候实质。如李炜弘等[14]利用第一代功能分类基因芯片技术分析了老龄肾阳虚证与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。

关于血瘀证与NF-κB信号通路的相关性，尚未见详细报道。目前有少量文献报道了血瘀证与NF-κB蛋白表达之间的关系。如黄政德等[15]发现血瘀证心肌缺血再灌注损伤(IRI)兔心肌细胞NF-κB蛋白表达显著增高。本课题组在以往的研究中发现，血瘀证大鼠血管内皮细胞黏附分子ICAM-1、VCAM-1及炎症酶iNOS表达增高[16]，而这些炎症细胞因子和炎症酶的基因均为NF-κB的靶基因[17]。

血瘀证与NF-κB信号通路从理论和实验中的研究结果表明：NF-κB信号通路在血瘀证形成中扮演重要角色。血瘀证与NF-κB信号通路的相关性探讨，将进一步揭示血瘀证炎症、免疫机制的分子生物学基础，深化血瘀证形成机理的研究，也为寻找新型活血化瘀药物作用靶点提供实验依据，同时，将为中医学证候实质研究提供方法学上的借鉴，具有重要的理论意义和应用价值。

[1]李林森，田金洲，蔡艺灵，等.血瘀证生物学基础研究进展[J].山东中医杂志，2010，29(12)：863-865.

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[3]Li Huang，Changjiang Weng.Encephalomyocarditis Virus 3C Protease Attenuates Type I Interferon Production and Disrupts TANK Inhibition Effect on TRAF6-mediated NF-kB Signaling through Cleavage of TANK[J].Scientific Program.

[4]郭 蕾，王学伟，王永炎，等.论高维高阶与证候的复杂性[J].中华中医药杂志，2006，21(2)：76-78.

[5]邵爱红，齐 新，贾文军，等.急性心肌梗死血瘀证患者纤维蛋白原、超敏C反应蛋白与补体系统表达变化[J].天津中医药大学学报，2016，35(4)：234-237.

[6]陈 婵，郭淑贞，王 伟，等.气虚血瘀证(心肌缺血)大鼠模型单核细胞炎性因子表达的相关性探讨[J].中医药学报，2010，38(4)：16-19.

[7]包怡敏，赵妍，李梅，等.银杏酮酯对急性血瘀证大鼠血液流变学和免疫功能调控[J].中国中医基础医学杂志，2013，19(8)：904-906.

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[11]马晓娟，殷惠军，陈可冀.血瘀证患者差异基因表达谱研究[J].中西医结合学报，2008，6(4)：355-340.

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[15]张竞之，刘吉昌，范志勇，等.从丹皮酚对TLR-NF-KB信号通路的影响探讨高血压病血瘀证的形成机制[J].广州中医药大学学报，2014，31(3)：330-334.

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广西壮族自治区中医药管理局中医药科技专项课题(GZKZ10-039)；广西中医药大学重点课题(ZD2010005)

胡小勤，男，医学博士，教授。主要从事血瘀证临床和基础研究。

广西中医药大学(530001)