浅析沙门菌属的临床检验方法与意义

于峰

浅析沙门菌属的临床检验方法与意义

于峰

目的探讨沙门菌属的临床检验方法与意义。方法26例肠胃炎患者,对其血液、粪便及尿液进行实验室检验,总结分析检验结果。结果对26例肠胃炎患者进行血液、粪便及尿液的实验室检验,26例患者的采集样本中均检出沙门菌属。结论沙门菌属常可导致患者出现肠胃炎、肠热症及败血症等疾病,为临床中常见细菌,通过对患者采集样本的实验室检验,可以确定患者发病原因,进行对症治疗。

沙门菌属；检验方法；鉴定

沙门菌属为一群寄生在人类与动物肠道内的生化反应与抗原结构相类似地革兰阴性杆菌,其可以从人与动物的体内分离获得［1］。沙门菌属的致病性具有一定的种属特异性,如伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌及甲型副伤寒沙门菌等种属均对人可致病,会引发患者出现肠炎与肠热症,而猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌及肠炎沙门菌等种属对人与动物均存在一定的致病作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年8月～2016年2月本院收治的肠胃炎患者26例,其中男13例,女13例,年龄16～66岁,平均年龄(39.2±14.1)岁,所有患者均根据病情的不同采集器血液、粪便及尿液,并进行实验室检验。

1.2 标本采集 根据患者病情与病程的不同,提取不同的标本进行检验(标本最好在患者使用抗生素前进行采集)。如根据患者肠热症的病程不同,在第1周内可取血液进行实验室检验,在第2～3周可取粪便或尿液进行实验室检验［2］。血清学的诊断需要在病程的不同时期分别进行2～3份的标本采集。如胃肠炎患者可取粪便及呕吐物进行实验室检验。

1.3 方法

1.3.1 检验方法

1.3.1.1 标本直接检查 取粪便、尿液等标本直接制作涂片,在革兰染色后进行镜检。

1.3.1.2 分离培养 进行分离沙门菌时常使用肠道培养基(MAC、SS、EMB等)与强选择性的培养基(亚硫酸铋琼脂与孔雀绿琼脂等)［3］。在对非伤寒沙门菌及各型副伤寒沙门菌之外的沙门菌分离时使用孔雀绿琼脂的效果相对较好,而进行伤寒沙门菌分离时选用亚硫酸铋琼脂的效果相对较好。除此之外,在暴发流行及筛选带菌患者时,当菌量较少时,初次进行分离使用亚硒酸盐及革兰阴性菌肉汤(GN肉汤)增菌效果相对较好。不同的样本在制作检验标本时所选用的培养基与培养方法各不相同,其方法分别为：①当样本为血液与骨髓液时,取血液样本5ml或骨髓样本0.5ml,将其加入到50ml的胆汁葡萄糖肉汤中进行增菌培养,如果有生长则可以移种到血平板与SS平板等培养基上；②当样本为粪便及肛门拭子时,可直接将其同时接种在SS平板与EMB/MAC平板等培养基上；③当样本为尿液与体液时,其需要以3 000 r/min进行离心操作30min后,取其沉淀物在增菌后接种在血平板或EMB/MAC平板等培养基上；④当样本为可疑食物时,需将其在研磨后加入10倍量无菌的生理盐水内进行混匀,而后接种在增菌肉汤与肠道选择性的平板上。沙门菌属在SS平板上为透明或不透明、中央黑色或无色的菌落,在MAC与 EMB平板上呈现无色透明的菌落群［4］。

1.3.2 鉴定方法 取上述的可疑菌落进行涂片染色,进一步的进行生化试验,如果反应的结果符合数据要求,则可以初步鉴定其为沙门菌属。而后再根据数据所列生化反应试验和血清学的试验鉴定菌属的种与型［5］。沙门菌属血清学的鉴定基本方法为：使用沙门菌属抗血清对已经分离的菌株按照O抗原、第一相以及第二相H抗原的顺序进行玻片凝集。在临床中常见的沙门菌属>95%为A～F群,因此需要先使用A～F多价O血清进行玻片的凝集,在确定其为A～F群后,使用单价O因子进行血清鉴定至具体群,而后再使用第一相和第二相H因子进行血清定型［6］。如果细菌生化的反应符合沙门菌属的反应,但和A～F多价O血清未产生凝集的现象,需要考虑是否存在表面抗原(Vi),可以将细菌悬液进行水浴加热30min后再次进行凝集试验。若除去Vi抗原后血清仍不能凝集,则需要考虑A～F以外的菌群可能。

2 结果

对26例肠胃炎患者进行血液、粪便及尿液的实验室检验,26例患者的采集样本中均检出沙门菌属。

3 讨论

沙门菌属部分毒株可以借助菌毛吸附在小肠黏膜的上皮细胞处。存在Vi抗原的部分沙门菌属具有较强的侵袭力,可以穿过小肠的上皮达固有层部分。沙门菌属存在相对较强的内毒素,可以引起患者出现发热及白细胞改变,甚至是中毒性休克。其还能激活患者的补体系统,引发一系列的病理与生理的变化［7］。部分沙门菌属(如鼠伤寒沙门菌)可以产生与大肠埃希菌类似的肠毒素,会导致患者出现早期水样的腹泻。沙门菌属主要通过污染水源与食物经口进行感染,可以引发胃肠炎、食物中毒、慢性肠炎及败血症。如果患者的肠热症的病程较长,因使用抗生素,患者的临床症状不具有典型性,且临床标本的分离阳性率相对较低,因此常使用肥达反应进行辅助诊断。肥达反应为使用已知的伤寒沙门菌O、H抗原与甲型、乙型及丙型副伤寒沙门菌H抗原同受检患者的血清开展凝集试验,检测受检患者的血清中是否存在相应的抗体以及效价,以此来辅助诊断伤寒与副伤寒。其检测结果需要结合患者的临床表现、病程及病史等情况进行综合的分析。O抗原刺激机体出现免疫球蛋白M(IgM)抗体,患者的症状出现的较早,抗体在其血清中存在时间相对较短［8-10］。H抗原在刺激机体后产生免疫球蛋白G(IgG),患者症状出现的较迟,但持续的时间相对较长。健康的机体因隐性的感染及疫苗的接种,在血清中可能会存在一定数量抗体。通常伤寒沙门菌 O凝集的效价达到1：80及以上、H抗体的效价达到1：160及之上、各型的副伤寒沙门菌的H抗体效价达到1：80及以上。通常情况下,O、H的凝集效价均会升高,则可判断为伤寒或副伤寒等。O凝集的效价不提升,H凝集的效价上升。O凝集的效价上升而H凝集的效价不提升则可以判断为早期感染或其他的沙门菌感染,其可以在1周后进行复查,如果H升高则可以进行诊断。

［1］陈强,余晓君,李俏俏,等.引起儿童腹泻的沙门菌属临床分离株的耐药特点及分子流行病学研究.中华检验医学杂志,2011,34(3):249-253.

［2］肖征,刘秀贞.恒温扩增核酸法检测沙门菌属效果分析.中华医院感染学杂志,2012,22(22):5167-5169.

［3］江晓,叶艳华,金萍,等.双色实时荧光PCR法快速检测感染性腹泻人群中的沙门菌和志贺菌.中国卫生检验杂志,2015,25(15): 2453-2455.

［4］王胜启,李爱华,郭琪,等.两种基因分析法在口岸沙门菌检测中的应用评价.中国国境卫生检疫杂志,2015(3):168-170.

［5］李爱华,王胜启,秦东春.沙门菌属stn基因LAMP快速检测方法的建立及应用.中国卫生检验杂志,2014,24(9):1217-1220.

［6］童学农.3例患儿感染沙门菌属细菌的分析与体会.检验医学与临床,2012,9(14):1812-1813.

［7］孙向利.沙门菌属微生物学检验.家庭心理医生,2014(2):180.

［8］李爱华,陈金玲,陈志晓,等.沙门菌属流行血清型分型及耐药性分析.检验医学与临床,2012,9(23):3019-3020.

［9］黄宝兴,马东礼.某儿童医院2014年8月-12月沙门菌属菌群分布及耐药性分析.实用预防医学,2015,22(7):880-881.

［10］张代涛,阚飙.沙门菌属分子分型技术研究进展.中国人兽共患病学报,2009,25(5):465-468.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.21.031

2016-09-14］

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