bFGF在长春瑞滨致兔组织损伤后不同时间实施干预的效果

黄利全　胡　野　毛宇飞　朱楼英　陈桂园　丁明星　张　焱　张　辉　梁淑霞　姜丽萍

(金华职业技术学院医学院，浙江　金华　321007)



bFGF在长春瑞滨致兔组织损伤后不同时间实施干预的效果

黄利全胡野毛宇飞朱楼英1陈桂园丁明星张焱张辉1梁淑霞2姜丽萍3

(金华职业技术学院医学院，浙江金华321007)

摘要〔〕目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在长春瑞滨外渗家兔组织不同时间干预的效果。方法建立54只长春瑞滨外渗的家兔模型，分别在建模后30 min、24 h、72 h开始实施bFGF湿敷、硫酸镁湿敷及不干预，通过肉眼及光镜观察上述各组干预后3、5、8、11、14、22 d的皮肤组织损伤程度。结果长春瑞滨外渗后30 min、24 h干预后，bFGF组皮损评分及病理损伤评分均显著低于硫酸镁组及对照组(P<0.05)；外渗后72 h干预时,bFGF组皮损评分及病理损伤评分均显著低于对照组(P<0.05)；硫酸镁组仅于外渗后72 h干预时病理损伤评分低于对照组(P<0.05)。结论长春瑞滨外渗时采用bFGF湿敷能减轻组织损伤，尤以外渗后30 min开始干预效果显著。

关键词〔〕碱性成纤维细胞生长因子；长春瑞滨；药物渗漏损伤；动物模型

1金华市实验动物中心2浙江大学金华医院手术室

3温州医科大学护理学院

第一作者：黄利全(1973-)，女，硕士，副教授，主要从事基础护理及血管管理研究。

长春瑞滨是一种细胞周期特异性抗肿瘤药物，已被广泛应用于非小细胞肺癌、乳腺癌等的治疗，但其刺激性强，一旦外渗可致局部皮肤红肿、疼痛、溃疡、坏死，若未及时发现、处理不当，可导致肢体功能障碍。当前，对长春瑞滨外渗后早期处理方法较多，包括局部封闭、湿敷、注射解毒剂、外涂消炎药等方法，而对延迟发现的严重病例处理较局限，虽有报道使用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的方法，但文献中均以联合用药为主，或未深入研究该药对长春瑞滨外渗后不同时间实施干预的效果〔1〕。本文通过比较bFGF在长春瑞滨外渗后不同时间实施干预的疗效，探讨其产生机制。

1材料和方法

1.1材料54只健康新西兰同种家兔，体重2.5～3.0 kg，雌雄各半，由金华市实验动物中心提供〔生产许可证号：SYXK(浙)2010-0151〕，单笼饲养，随机编号、排序。bFGF(贝复济，重组牛bFGF外用溶液，批号：20130803)产自珠海亿胜生物制药有限公司。硫酸镁粉产自南昌白云药业有限公司，500 g/袋，批号：20130701。注射用长春瑞滨为江苏豪森医药股份有限公司产品(商品名：NVB,批号：130702)。

1.2实验方法

1.2.1建立损伤模型 选健康新西兰兔54只，取兔双背双臀作为实验区。实验前24 h用脱毛剂将家兔背部及臀部脱毛，制成每个注射区域直径约5 cm×5 cm大小的无毛区，背部以兔的脊柱为中心，划分为左背部与右背部，臀部平分为左右两区，分别在各区域皮下注射长春瑞滨1 ml(0.5 mg/ml)制成皮丘直径约2～2.5 cm的化疗药物渗漏损伤模型〔2〕,一旦发现药量不足或皮丘直径不合要求即剔除在外，重新补入。

1.2.2分组与干预将54只家兔按随机数字表法分成bFGF组、硫酸镁组、对照组，每组18只。各组分别在建模成功后30 min、24 h、72 h实施首次干预。bFGF湿敷法:用含bFGF药液(200 IU/cm2)的2 cm×2 cm 无菌湿纱布两层覆盖于外渗局部，敷布范围超出渗漏区域0.5 cm，再湿敷一层塑料薄膜，后用绷带包扎，3次/d，每次15 min，共7 d。硫酸镁湿敷法：除所覆药物换成50%硫酸镁溶液外，其他同bFGF湿敷法。对照组不采取任何干预措施。

1.2.3观察指标肉眼观察损伤面积：三组家兔于各自首次干预后的第3、5、8、11、14、22天用圆规、直尺测量，计算创面中两条最长的垂直长度的乘积为损伤面积。皮肤损伤评分参照杨翠芹等〔2〕的方法，结合本实验特点赋分:皮肤正常为0分；红肿直径≤3 cm为1分；>3 cm为2分；溃疡直径≤1 cm为3分；>1 cm为4分。

病理观察：各组家兔在上述6个时间点，用1%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔麻醉后用外科手术法切取外渗性损伤部位，切除组织置于10%甲醛中固定、梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，制备4 μm切片。经HE染色，中性树胶封片后由未参与实验的专业病理医生在光镜下观察各组外渗性损伤程度。病理损伤评价参照郭鹏等〔3〕的方法，轻度损伤：弥散性炎性细胞浸润、表皮完好；中度损伤：组织水肿、散在出血、明显炎性细胞浸润；重度损伤：溃疡、组织坏死、出血。结合实际，加入超重度损伤：组织结构完全消失，广泛坏死。计分方法：轻度为1分，中度为2分，重度为3分，超重度为4分。

1.3统计学方法应用SPSS17.0软件,计量资料组间差异比较采用独立样本t检验或单因素方差分析,方差齐性比较采用LSD 法,方差不齐者进行TamhaneT3检验。

2结果

2.1长春瑞滨外渗不同处理组局部组织损伤程度肉眼观察比较bFGF湿敷组在长春瑞滨外渗后30 min、24 h开始干预后皮肤组织损伤以红肿为主；硫酸镁湿敷组皮肤组织红肿、溃破；对照组皮肤破溃明显。肉眼损伤评分比较，bFGF湿敷组在外渗后30 min、24 h干预显著低于硫酸镁湿敷组及对照组(P<0.05)，而在72 h开始干预时仅与对照组比较结果有统计学意义(P<0.05)，见图1，表1。

A:bFGF组(30 min干预5 d);B:硫酸镁组(30 min干预5 d);C:对照组(30 min干预5 d);D:bFGF组(24 h干预8 d);E:硫酸镁组(24 h干预8 d);F:对照组(24 h干预8 d);G:bFGF组(72 h干预11 d);H:硫酸镁组(72 h干预11 d);I:对照组(72 h干预11 d)；下图同图1　兔渗漏组织肉眼观察

组别30min24h72hbFGF组1.20±0.291)2)1.27±0.531)2)1.00±0.542)硫酸镁组1.73±0.361.94±0.741.91±0.73对照组1.73±0.432.33±0.962.58±0.55F/P值3.63/0.044.09/0.042.77/0.01

与硫酸镁组比较：1)P<0.05 ；与对照组比较：2)P<0.05

2.2在病理观察比较在长春瑞滨外渗后30 min、24 h、72 h开始干预后，bFGF组可见组织水肿、散在出血、炎性细胞浸润；硫酸镁组光镜下可见溃疡、组织坏死、出血；对照组病理观察可见大片炎症细胞浸润，甚至微脓肿形成。三组病理评分比较，bFGF湿敷组在长春瑞滨外渗后30 min、24 h开始干预后与硫酸镁湿敷组、对照组比较有统计学差异(P<0.01)，而72 h开始干预时与对照组比较结果有统计学意义(P<0.05)；硫酸镁组于外渗后仅72 h干预时与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。见表2,图2。

图2　兔渗漏组织病理变化(HE染色，×100)

组别30min24h72hbFGF组1.16±0.381)2)2.00±0.841)2)1.83±0.702)硫酸镁组2.00±0.842.16±0.922.66±0.483)对照组2.50±0.782.83±0.922.83±0.38F/P值16.66/0.044.35/0.0417.56/0.01

与硫酸镁组比较：1)P<0.01；与对照组比较：2)P<0.01，3)P<0.05

3讨论

目前，化疗药物主要通过静脉途径给药，一旦发生外渗，常造成血管及局部皮肤组织的化学性炎症反应。据报道，发疱剂外渗发生率在儿童中为11%，成人中为22%〔4〕。长春瑞滨属于发疱型化疗药,渗漏至血管外12～24 h即发生反应〔5〕,当渗透入皮下间隙,可导致局部浓度增高,破坏细胞膜内外渗透压平衡,局部 pH值改变,致静脉或毛细血管痉挛,局部供血减少,使组织缺血、缺氧,局部出现水疱,形成硬结和溃疡〔6〕。可见，及时发现长春瑞滨外渗并积极处理是治疗的关键。

本研究发现，bFGF对长春瑞滨外渗后30 min、24 h及72 h开始干预时对损伤组织均具有保护作用，能有效控制外渗损伤的大小、深度及炎症细胞的浸润程度，说明bFGF具有一定的抗炎作用，其作用机制可能是bFGF抑制了肿瘤坏死因子(TNF)-α的分泌，从而阻断了由此引发的炎症反应〔7〕。bFGF组创面愈合较快，进一步说明bFGF在局部炎症反应阶段、细胞增殖分化及肉芽组织形成阶段、组织重建阶段均有不同程度的促进作用〔8〕。国内外已在皮肤等组织工程中应用bFGF并显示出其独特的优势与前景〔9～11〕。本文的结果尤其对那些因未早期发现药物渗漏而致局部组织明显红肿、溃破患者的治疗提供了有效的方法。

实验发现bFGF对长春瑞滨外渗后30 min开始干预时疗效最为明显，分析原因可能是创伤早期局部受创组织中内源性bFGF的含量处于缺乏状态，到创伤后第2～4周其血清水平再达到分泌高峰〔12〕，需用外源性的bFGF促进并刺激组织分泌bFGF，从而达到治疗作用。说明越早干预效果越显著，如能在30 min内干预，效果最理想。

参考文献4

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3郭鹏,卢红,王莉,等.化疗药物渗漏对大白鼠皮肤副反应及处理方法的研究〔J〕.四川肿瘤防治,2007;20(1):19-21.

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12 Weiss S,Zimmermann G,Pufe T,etal.The systemic angiogenic response during bone healing〔J〕.Arch Orthop Trauma Surg,2009;129(7):989-97.

〔2015-03-26修回〕

(编辑袁左鸣)

通讯作者：毛宇飞(1964-)，男，副教授，副主任医师，主要从事肿瘤及基础病理研究。

基金项目：浙江省科技厅实验动物科技计划项目(No.2013C37023)

中图分类号〔〕R471；R363〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2015)23-6703-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.025