谈法医分子病理学研究实践

田云霞，徐海宇内蒙古呼伦贝尔市阿荣旗公安局刑事科学技术室

谈法医分子病理学研究实践

田云霞，徐海宇
内蒙古呼伦贝尔市阿荣旗公安局刑事科学技术室

在法医病理学研究领域里，出现了很多运用分子病理学的基础性研究和相关的应用研究。此外，除了同一认定之外，分子病理学还有其他用途，如：确定死亡方式和死亡原因、确定死亡时间和血痕形成时间、组织确认、损伤时间推断、毒理遗传学等。有学者使用分子病理学技术诊断心律失常，并提出了分子解剖的概念。与临床研究不同，法医病理的主要对象还是尸体组织，尤其是腐败组织，或者甲醛浸泡的组织。也正因如此，法医学者不太可能依靠分子病理来解决所有的问题，我们的目的是尝试解决一些基本的、常见的问题。

法医；分子病理学；研究实践

在法医病理学研究领域里，出现了很多运用分子病理学的基础性研究和相关的应用研究。此外，除了同一认定之外，分子病理学还有其他用途，如：确定死亡方式和死亡原因、确定死亡时间和血痕形成时间、组织确认、损伤时间推断、毒理遗传学等。有学者使用分子病理学技术诊断心律失常，并提出了分子解剖的概念。与临床研究不同，法医病理的主要对象还是尸体组织，尤其是腐败组织，或者甲醛浸泡的组织。也正因如此，法医学者不太可能依靠分子病理来解决所有的问题，我们的目的是尝试解决一些基本的、常见的问题。

一、死亡原因

确定死亡原因有不同的方法，而不同的方法对应不同的检验对象。传统死因确定的方法是尸体解剖，解剖用于推断死亡原因时，有个别案件由于缺乏形态学的阳性改变，故分析死因时存在一定的困难。解剖加上其他一些辅助性方法，如组织化学、死后生化和毒物分析等方法后，大多数案件可以正确诊断死因。但是还是会有很少部分的案件难以诊断出来，如心律失常死亡案件。此外，青少年猝死案例中很多就死因不明，据统计约有30%青壮年心源性猝死案例解剖时是阴性的。这部分案例中，很多都有家族遗传倾向。这种情况下，检测突变基因就变得极为重要。但是检测突变基因时要注意这些突变在功能上的重要性，以及这些基因突变与死因存在的直接关联性。

感染性疾病的诊断。分子病理学技术在诊断感染性疾病方面也有重要作用，而且可用于年代久远的尸体组织疾病诊断，如木乃伊组织。在法医学领域，该技术目前主要用于诊断心肌炎。

常见的引起病毒性心肌炎的病毒包括腺病毒、肠道病毒、禽流感病毒、细小病毒B19等。活体上病毒性心肌炎的诊断除了依靠病史和临床检查外，还需要心内膜活检。活检的心内膜可通过PCR、RT－PCR以及原位杂交、免疫组化来寻找病毒感染的证据。但是分子病理检测结果与免疫组织化学染色诊断结果不一定相关。如形态学上正常的心脏可出现病毒检测阳性，反之亦然。心肌内检出病毒可以用于死因诊断，尤其是出现了心肌坏死、心肌细胞自溶以及淋巴单核细胞浸润时更是如此。已经有一些有关猝死案例中检出病毒的文献报道。对于婴幼儿猝死综合征来说，大概30%的案例可检出病毒，尤其是肠病毒、腺病毒或者细小病毒B19等，而这些发现可作为死因诊断的依据。

二、RNA分析

死后RNA分析在法医中很有应用价值，如可用于组织鉴定或者死亡时基因表达水平的判定。死亡时基因表达水平的判定对于死因和死亡环境、存活时间、疾病的病理生理变化以及损伤判定来说很有意义。但是基因表达水平的判定，首先要解决的问题是死后内参基因的选择问题。RNA分析能为判断引起死亡的疾病及死亡机制提供思路，也有望成为法医病理死因诊断的有力工具。当然还有一些其他应用，如判定损伤时间、死亡时间及体液鉴定等。

1.血痕形成时间和死亡时间判定

体外RNA降解是一个复杂而非线性的过程，但是其降解程度可用做斑痕质量和形成时间判定的指标。Bauer等（2008）研发了一种联合使用半定量双RT－PCR和竞争式RT－PCR的方法来量化RNA降解水平。他们采用这种方法研究了106例血痕。这些血痕保存时间最长达15年。结果发现标准品与目的基因mRNA的峰面积比值与样品保存时间相关。血痕形成时间差别在5年及以上的样品中，标准品与目的基因mRNA峰面积比值具有明显差异。此外Bauer等（2003）也利用FASN多重PCR方法对PNA片段进行定量，并表明这些RNA量与死亡时间相关。总RNA降解在实验条件下是一个缓慢的过程，因此可用于死亡时间3～4d之内的PMⅠ研究。

2.体液鉴定

通过测定组织细胞特异性基因mRNA量来鉴定组织是一种除DNA分型以外的另一种新技术。这里面最主要的是选取组织特异性的基因，通过反转录PCR来研究该特异性基因的表达情况。如基质金属蛋白酶（MMP）mRNA只存在于子宫内膜细胞而不能在其他血细胞和上皮细胞内检出，因此可作为内膜细胞特异性基因，即有望成为月经血的特异性指标。进一步的月经血斑痕研究显示MMP表达水平确实可作为月经血检测的特异指标。

3.mRNA

目前通过mRNA定量分析来鉴定体液是一种标准的常用方法。也有很多研究逐步改善了该方法，以提高方法的精确度，扩大该方法检测的生物检材种类。然而，mRNA在死后容易降解，因此其稳定性一直是检测基因表达时的关注点。有研究报道mRNA降解后，受损的"八完整性会影响到检测效果。这对法医采用mRNA定量来说尤其重要，因为法医碰到的检材经常暴露于蚊虫、紫外线、温度、湿度等潜在促进mRNA降解的环境中。虽然mRNA稳定性广受质疑，但是毫无疑问的一点是，某一小段长度的单链RNA可能不易降解而具有较好的稳定性。因此在法医领域具有重要的研究价值。

4.法医病理学家对死者亲属的责任

检测到死者突变基因后，法医也有责任对死者家属进行风险告知和遗传咨询。当分子解剖得出合理的死因之后，法医也有义务告知家属所有的解剖结果。由于一些遗传疾病，如扩张性心肌病和长QT综合征等具有遗传倾向，死者家属也很有可能罹患同样的疾病，因此告知家属可以有效预防悲剧再生。遗传咨询是对心源性猝死者家属关怀必不可少的一部分，因此，需要法医病理学家、医学遗传学家以及心脏病学家通力合作。法医病理学家的基本任务就是要考虑到心源性猝死案例的遗传因素，并且合理保存组织检材以备后续基因分析。