超高效液相色谱指纹图谱在中药质量评价中的应用

邬伟魁　严倩茹（梅州市食品药品监督检验所，广东 梅州 514071）



超高效液相色谱指纹图谱在中药质量评价中的应用

邬伟魁严倩茹
（梅州市食品药品监督检验所，广东 梅州 514071）

【摘要】近年来，超高效液相色谱指纹图谱技术在中药质量评价中显示出独特的优势。本文对中药指纹图谱简况、色谱指纹图谱在中药质量评价中的应用、超高效液相色谱指纹图谱在中药（药材、饮片、中成药、医院制剂）质量评价、炮制工艺研究及联用技术中的应用情况进行综述，以期为符合中药特点的超高效液相色谱指纹图谱质量评价体系研究提供参考。

【关键词】超高效液相色谱；指纹图谱；中药

近年来，随着超高效液相色谱（ultra performance liquid chromatography，UPLC）的兴起，及其与指纹图谱技术的迅速融合，UPLC指纹图谱技术在中药质量评价中显示出独特的优势。有研究对比了土茯苓［1］药材的UPLC和高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，发现UPLC在10 min内完成的谱峰，HPLC需要75 min才能完成，说明UPLC的分析效率更高，可显著缩短分析时间，减少流动相的消耗；UPLC可检测更微量的样品，进样量为1∶20时，色谱峰高基本一致，说明UPLC的色谱分离效果更好、灵敏度更高；UPLC的洗脱条件比HPLC的变化更简单，色谱峰的漂移时间较短，在指纹图谱软件中色谱峰易于匹配。相关质控技术已成功应用于复方丹参滴丸，并被2010年版《中国药典》收载。本文就UPLC指纹图谱在中药质量评价中的应用情况进行综述。

1　UPLC指纹图谱在中药材质量评价中的应用

范旭航等［2］建立了 8 min快速鉴别牡丹皮的UPLC特征指纹图谱共有模式，标定了20个共有峰，并指认了10个主要色谱峰，15批牡丹皮药材的相似度为0.973～ 0.998，为有效控制和科学评价牡丹皮药材的质量提供依据。张琦等［3］建立了白芍药材的UPLC特征指纹图谱共有模式，标定了15个共有峰，指认了其中5个共有峰，15批白芍药材的相似度为0.891～ 0.996，实现了9 min快速评价白芍药材的质量，完善了白芍的质量控制方法。与此类似，还建立了茯苓的UPLC特征指纹图谱［4］，分析时间 ＜ 10 min，极大地缩短了时间。沈旭等［5］对不同产地的15批桃仁药材进行研究，建立了桃仁药材15 min内的UPLC特征指纹图谱共有模式，共标定了12个共有峰，指认了其中6个共有峰，15批桃仁药材的相似度为0.884～0.996。

2　UPLC指纹图谱在中药饮片质量评价中的应用

李会芳等［6］建立了大黄不同饮片的UPLC指纹图谱并用于比较市售大黄不同饮片化学品质的差异及稳定性。发现生大黄样品的平均相似度较高（0.817），酒大黄样品间指纹图谱平均相似度较低（0.640），而熟大黄和大黄炭样品各自的指纹图谱平均相似度高于0.9。生大黄、酒大黄的指纹图谱基本一致，熟大黄、大黄炭与生品相比有较大差异。市售生大黄、熟大黄、大黄炭饮片的化学品质较为稳定，而酒大黄饮片的差异较大，亟待进一步规范研究。

3　UPLC指纹图谱在中成药质量评价中的应用

3.1注射剂

刘卉等［7］测定了9个不同厂家的18批香丹注射液UPLC指纹图谱，结果显示，采用色谱指纹图谱轮廓能够在一定程度上反映出注射液的质量变化信息，与采用峰面积的分析方法差异不大，结果相似。该法可用于测定并比较不同来源的香丹注射液色谱指纹图谱相似度，并为快速中药质量评价和生产工艺监控提供可靠依据。

3.2颗粒剂

杨运云等［8］对王老吉广东凉茶颗粒样品进行了相似度分析，23个批次样品的相似度均达到0.95以上；以28个共有峰的相对峰面积进行主成分分析，23批次样品均落在同一区域。相似度评价和主成分分析结果均表明，王老吉广东凉茶颗粒的产品质量稳定性好。该方法快速、高效、稳定，可用于王老吉广东凉茶颗粒的质量控制。姜新刚等［9］建立了津力达颗粒的 UPLC指纹图谱，共标定了50个共有峰，指认了其中9个共有峰，10批津力达颗粒指纹图谱的相似度均在 0.991～1.000。该方法具有良好的精密度、稳定性和重复性，可有效控制津力达颗粒质量。

3.3合剂

吴红梅等［10］对不同厂家生产的 15批康复新液进行研究，以11批湖南科伦药业与3批四川好医生攀西药业生产的康复新液标定了10个共有峰，相似度0.990；与对照指纹图谱比较，内蒙古京新药业生产的康复新液相似度0.900，标定8个共有峰，指认了指纹图谱中5个共有峰。所建立的方法快速有效，可用于评价康复新液的质量。

3.4胶囊剂

姜新刚等［11］建立了芪苈强心胶囊的UPLC指纹图谱，共标定了36个共有峰，指认了其中8个共有峰，10批芪苈强心胶囊指纹图谱的相似度均在0.979～ 1.000。该法具有良好的精密度、稳定性和重复性，为提高芪苈强心胶囊质量控制提供了新方法。

4　UPLC指纹图谱在医院制剂质量评价中的应用

暑热宁合剂［12］是天津中医药大学第一附属医院的院内制剂，临床应用多年，药效稳定，效果佳。目前已建立方法简便、操作性强的UPLC指纹图谱，对制剂中的多种成分和极性相近的成分均有良好的分离效果，不同批次间的相似度符合相关规定。

5　UPLC指纹图谱在工艺研究中的应用

目前很多中药有效成分未完全研究清楚，故炮制和提取工艺研究时采用某单一成分的含量为指标欠妥。而讲究整体性的指纹图谱恰恰满足了中药多成分、多途径、多靶点的作用特点和中药炮制工艺、提取工艺研究的需求。单鸣秋等［13］采用恒温干燥箱为加热设备，从200℃至250℃间隔10℃共6个温度，每个温度下分别烘制20 min，30 min，40 min，共得到18份样品；采用UPLC，以侧柏炭标准饮片为参照，分析各样品指纹图谱相似度，并结合外观性状，确定侧柏炭烘制温度以230℃，20 min为宜。建立了侧柏炭烘制工艺方法，为中药炭药的炮制工艺研究提供新的思路。杨荣平等［14］从炮制方法、加盐量、加水量、浸润时间、炮制温度、炮制时间6个因素进行考察，采用UPLC指纹图谱优化补骨脂炮制工艺。结果表明，补骨脂的最佳炮制工艺是：每100 g药材，加入15 mL含盐量为2.5 g的盐溶液，浸润5 h后，置锅内。260℃加热，炒2～ 3 min。故采用UPLC指纹图谱法优化补骨脂炮制工艺合理可行。另有研究［15］采用UPLC指纹图谱结合正交试验优选“二神丸”药对最佳醇提工艺。

6　UPLC-质谱（MS）指纹图谱在中药质量评价中的应用

UPLC具有超高压、超高灵敏度、超高分离度等特点，在中药复杂成分的分析上有明显优势。UPLC与 MS联用可以同时得到化合物的紫外光谱、保留时间、分子质量等信息，可获得更全面的分析数据，快速地阐明中药的化学物质基础，为中药质量评价提供大量的有效信息，是目前分析中药复杂系统的有力工具。

闫广利等［16］应用UPLC-MS联用技术进行检测，采集10个产地黄芩药材的色谱图，根据保留时间和分子离子m/z确定共有峰，创建提取离子色谱图用以计算峰面积，利用相关系数法和夹角余弦法计算相对峰面积的相似度。确定了黄芩药材的23个共有峰，建立了这 23个共有峰为特征指纹信息的黄芩药材UPLC-MS指纹图谱，10个产地样品的指纹图谱整体相似度0.9，各产地黄芩药材之间相似度良好。提示该方法准确可靠，可用于黄芩药材的整体质量评价。张宁等［17］采用UPLC-MS联用技术对自制10批地黄饮子样品进行分析，共标定了30个共有色谱峰，通过与对照品的保留时间及一级质谱信息的比对，确定2号、5号、14号、15号、17号、26号和27号峰分别为马钱苷、松果菊苷、乌头碱、新乌头碱、五味子醇甲、五味子乙素和茯苓酸。地黄饮子的指纹图谱特征性及专属性强，可结合含量测定用于全面控制地黄饮子的质量。朱粉霞等［18］建立了朝鲜淫羊藿和柔毛淫羊藿药材的UPLC指纹图谱分析方法，发现两个品种的指纹图谱差别较大，朝鲜淫羊藿标出 35个共有峰，质谱鉴定了26个峰，柔毛淫羊藿标出 13个共有峰，质谱鉴定了9个峰；同时研究了朝鲜淫羊藿和柔毛淫羊藿炮制前后 UPLC指纹图谱的变化规律，指纹图谱发生了五处变化。该法快速、简便，重现性好，从整体上显示淫羊藿药材和炮制品的特征，为淫羊藿的生品和炮制品的质量控制提供了有效手段。

7　结语

随着仪器的普及和检测器的多样化，HPLC在中药分析论文和质量标准中的应用迅速增加。色谱指纹图谱已成为国际公认的控制天然药物质量的有效手段，HPLC指纹图谱在中药质量评价方面应用日渐广泛。Waters公司于 2004年推出UPLC技术后，UPLC受到广泛的认可，并在不同国家、不同行业发挥着重要的作用。UPLC可用于中药成分定性鉴别、含量测定、指纹图谱构建、非法添加成分或限量成分检测。UPLC还是质谱分析很好的入口，与质谱联用还可用于中药血清化学、代谢产物和药动学等复杂的生物分析。与HPLC相比，UPLC具有较高的柱效、超高速度、超高分离度、超高灵敏度等优势。近年来，相关联用技术备受重视，UPLC-MS，UPLC-MS-MS等指纹图谱技术具有高效、快速、灵敏、节省溶剂等优势，在中药质量评价中应用的前景广阔。

参考文献：

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［2］ 范旭航，王振中，李清，等.牡丹皮药材UPLC特征指纹图谱研究［J］.中国中药杂志，2011，36（6）：715-717.

［3］ 张琦，王振中，萧伟，等.白芍药材UPLC特征指纹图谱研究［J］.中国中药杂志，2011，36（6）：712-714.

［4］张琦，王振中，萧伟，等.茯苓UPLC特征指纹图谱［J］.中国中药杂志，2012，37（7）：966-968.

［5］沈旭，李清，王振中，等.桃仁药材UPLC特征指纹图谱研究［J］.中国中药杂志，2011，36（6）：718-720.

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［18］ 朱粉霞，赵永刚，贾晓斌.淫羊藿炮制前后UPLC-PDA-MS的指纹图谱研究［J］.化学学报，2012，70（5）：635-642.

doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2016.02.009

收稿日期：（2015-08-12）

作者简介：邬伟魁，男，硕士，主管中药师。主要从事药品质量研究工作。通讯作者E-mail：weikuiwu@qq.com

Application of Ultra Performance Liquid Chromatography Fingerprint in Quality Evaluation of Traditional Chinese Medicine

Wu Weikui，Yan Qianru
（Meizhou Institute for Food and Drug Control，Guangdong Meizhou 514071，China）

ABSTRACTIn recent years，ultra performance liquid chromatography shows its unique advantages in the quality evaluation of traditional Chinese medicine（TCM）.In this paper，the fingerprint brief of TCM，the applications of chromatographic fingerprint in quality control evaluation of TCM as well as the application of ultra high performance liquid chromatographic fingerprint in quality evaluation of TCM（materials，prepared slices，Chinese patent drug and hospital preparations），research on processing technology and combined technology are reviewed in order to provide a reference for the study on quality evaluation system by ultra performance liquid chromatography suitable for TCM.

KEY WORDSUltra Performance Liquid Chromatography；Fingerprint；Traditional Chinese Medicine