化学发光免疫分析法检测孕妇抗TP抗体阳性判断值探讨



化学发光免疫分析法检测孕妇抗TP抗体阳性判断值探讨

梅毒是由苍白螺旋体引起的一种慢性全身感染的性传播疾病，严重危害母婴健康[1]。为防止母婴传播，采用化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay，CLIA)检测孕妇血清抗梅毒螺旋体(treponema pallidum ，TP)抗体已列为常规工作，但由于孕妇内环境改变等因素的干扰，部分抗TP抗体呈阳性反应的样本并非真正的阳性[2]，尤其是信号/临界值(signal-to-cut off, S/CO)比值接近阳性判断值的样本。因此，在妇幼保健机构进行TP筛查时，将抗TP抗体 CLIA测定S/CO比值的阳性界值设定在何处较为合适，是一个值得探讨的问题。

材料和方法

一、材料

1. 样本及来源样本为来自于上海市嘉定区妇幼保健院2014年1至9月产检孕妇抗TP抗体检测S/CO比值≥1.0的样本，分离血清2 mL，-80 ℃保存待检。

2.试剂和仪器抗TP抗体CLIA试剂盒为北京科美东雅公司产品，阳性判断限S/CO比值≥1.0，批号为20131021；抗TP抗体免疫印迹法(western blotting, WB)试剂为德国欧蒙医学实验试剂公司产品，批号为LTP091401。试剂均在有效期内，按说明书操作。Chemclin CLIA系统由北京科美东雅公司生产。

二、方法

1.CLIA检测按照试剂说明书操作，在Chemclin CLIA系统上进行检测。试剂均在有效期内，同时检测上海市临床检验中心提供的质控品并在控。

2. WB检测对S/CO比值≥1.0的样本按照说明书进行WB确证试验。欧蒙TP-IgG-WB试剂膜条有4条特异性抗原带，分别为TpN15、TpN17、TpN45和TpN47。判断标准：未出现抗原带为阴性，1条抗原带显色为可疑阳性，2条及2条以上抗原带显色为阳性。

三、统计学方法

统计学分析应用SPSS 15.0软件，CLIA系统检测性能采用受试者工作特征(receiver operating characteristic， ROC)曲线确定。

结果

一、抗TP抗体的CLIA检测

13 974份样本经CLIA检测呈阳性反应152份，初筛阳性率为1.09%。对S/CO比值≥1.0的152份样本进行WB检测，结果为：阳性119例，占孕妇群体的0.85%，占初筛呈阳性反应样本的78.29%；不确定7例，占孕妇群体的0.05%，占初筛呈阳性反应样本的4.61%；阴性26例，占孕妇群体的0.19%，初筛呈阳性反应样本中假阳性率为17.11%。见表1。

表1　152份CLIA呈阳性反应样本WB确认结果

二、ROC曲线确定的抗TP抗体筛查试验的检测效能

根据以WB结果(WB结果为“不确定”的样本未列入)为金标准绘制的ROC曲线，当诊断效能最好 [约登指数(敏感性+特异性-1)最大(0.968)]时抗TP抗体 S/CO比值 的临界值为3.32，见表2；曲线下面积为0.997，见图1。

表2　抗TP抗体初筛试验不同临界值条件下的检测效能

图1　孕妇血清抗TP抗体检测的ROC曲线图

三、初筛试验结果阳性预测值≥95%时的S/CO比值的确定

鉴于抗TP抗体 CLIA的筛选作用，为达到既减少假阳性所致的不良后果，又能适当减少后续确证试验的样本数，特统计初筛试验不同临界值范围的阳性预测值，当初筛试验结果阳性预测值≥95%时，其S/CO比值为3.25。见表3。

表3　抗TP抗体初筛试验不同临界值范围的阳性预测值

续表3

讨论

妊娠合并梅毒对围产儿危害极大。孕妇梅毒患者血中的TP可播散到胎儿所有器官，易引起胎儿全身性疾病及先天性梅毒等[3]。国外发达国家和地区对孕妇有较完善的筛查制度[4]。目前国内妇幼系统大多采用CLIA筛查孕妇抗TP抗体，当特定样本的检测信号(发光值)超过试剂盒设定的阳性判断值时，即判断为反应性(国内通常称为阳性)[5]，并据此报告相应的检验结果。这种结果对于强阳性或明显阴性的样本，造成假阴性或假阳性的可能性很小，但对于处于临界值附近的弱反应性样本的影响可能较大，孕妇由于处于窗口期或妊娠期间体内免疫球蛋白等的改变，常常发生假阴性或假阳性现象。特别是假阳性结果不仅有害孕妇身心健康，而且极易诱发医疗纠纷。WB检测的抗TP抗体针对TP外膜的4种脂蛋白，具有理想的免疫活性，敏感性高、特异性好，克服了临床常用的甲苯胺红不加热血清试验(tolulized red unheated serum test，TRUST)、TP颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA)和CLIA等方法的不足。WB既是各参比实验室的常用检测方法，也是晚近文献建议的确证试验[6-8]。

本研究显示，孕妇群体中用Chemclin CLIA系统筛查抗TP抗体呈阳性反应的样本假阳性率为17.11%，阳性判断值(S/CO比值)宜作调整。本研究表明，1.09%(152/13 974)的孕妇为抗TP抗体初筛阳性，阳性率低于高昆等[9]报道的检测人群。对CLIA检测S/CO比值≥1.0的样本进一步用WB检测，2个及2个以上条带(阳性)119份(占孕妇群体的0.85%，占初筛呈阳性反应样本的78.29%)；单个条带(不确定)7份(占孕妇群体的0.05%，占初筛呈阳性反应样本的4.61%)；阴性26份(占孕妇群体的0.19%，初筛呈阳性反应样本中假阳性率为17.11%)。应用ROC曲线分析，在约登指数最大的条件下，阳性判断值(S/CO比值)为3.32；为减少筛查试验阳性所需补充确证试验的样本数，分析不同临界值范围的阳性预测值，确定初筛试验结果阳性预测值≥95%时的S/CO比值为3.25。根据本研究结果，建议将检测信号的S/CO比值的阳性判断值提高到3.32，对处于1.0~3.32之间的样本应纳入灰区[10]，执行灰区样本的处理程序，必要时进一步做WB或核酸检测等确证试验，以尽可能减少假阳性所造成的后果。

综上所述，孕妇样本中有较高比例的抗TP抗体假阳性，可能是其体内免疫、血脂及内分泌环境等因素改变引起的干扰所致，这有别于快速血浆反应素环状卡片试验及TRUST方法的生物学假阳性。为降低抗TP抗体筛查试验假阳性所造成的不良后果，又减少须进行确证试验的样本数，各实验室应针对不同人群和检测系统(试剂)建立合适的临界值，并确定筛查试验呈阳性反应的样本需进行确证试验的S/CO比值范围。

参考文献

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[3]杨日东，刘金花，田广南，等. 治疗干预对不同妊娠期潜伏梅毒孕妇新生儿影响的研究[J]. 岭南皮肤病性病科杂志，2006，13(4)：276-278.

[4]CARLES G，LOCHET S，YOUSSEF M，et al. Syphilis and pregnancy[J]. J Gynecol Obstet Biol Reprod(Paris)，2008，37(4): 353.

[5]李金明. 感染性疾病血清学检验中应重视对弱反应性标本的确认[J].中华检验医学杂志， 2006，29(7)：577-580.

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[8]侯晓菁，梁艳，陈洁，等.化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的实验评价[J].检验医学，2010，25(5)：365-367.

[9]高昆，韩倩. 三种梅毒血清学试验在梅毒诊断中的应用[J]. 放射免疫学杂志，2013，26(2)：223-224.

[10]彭静，管青，王斌，等. HBsAg检测结果弱反应的分析与处理[J].临床检验杂志，2008,26(4)：284-285.

(本文编辑：姜敏)

蔡徐山 ，齐结华， 陈宇，王东江，吴守乐

(上海市嘉定区妇幼保健院检验科， 上海 201821)

摘要：目的建立适合孕妇的抗梅毒螺旋体(TP)抗体化学发光免疫分析法(CLIA)阳性判断值。方法用科美东雅Chemclin CLIA系统检测13 974例孕妇血清抗TP抗体，对抗TP抗体筛查试验呈阳性反应[信号/临界值(S/CO)比值≥1.0]的样本，用免疫印迹法(WB)分析确认。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CLIA的检测性能。结果Chemclin CLIA系统检出抗TP抗体 S/CO比值≥1.0的样本152例，初筛呈阳性反应的样本比率为1.09%；初筛呈阳性反应样本经WB确认，阳性119例，不确定7例，阴性26例，初筛呈阳性反应样本中假阳性率为17.11%。根据ROC曲线，约登指数最大时，抗TP抗体 S/CO比值为3.32；Chemclin CLIA系统抗TP抗体筛查试验阳性预测值≥95%的S/CO比值为3.25。结论为既降低抗TP抗体筛查试验假阳性率，又减少须进行补充确证试验的样本数，各实验室应建立针对不同人群和检测系统(试剂)合适的界值，以确定筛查试验阳性样本需进行确证试验的S/CO比值范围。

关键词：抗梅毒螺旋体抗体；化学发光免疫分析法；确证试验；阳性判断值； 孕妇

Investigation on the positive cut off value of anti-TP antibody in pregnant women by chemiluminescence immunoassayCAIXushan，QIJiehua，CHENYu，WANGDongjiang，WUShoule.(DepartmentofClinicalLaboratory，MaternalandChildrenHealthcareHospitalofJiading，Shanghai201821，China)

Abstract:ObjectiveTo establish a reasonable positive cut off value of anti-treponema pallidum (TP) antibody in pregnant women by chemiluminescence immunoassay(CLIA). MethodsA total of 13 974 serum samples from pregnant women for anti-TP antibody were collected. All the samples were determined by Kemei Dongya Chemclin CLIA system. The positive samples [signal-to-cut off (S/CO) ratio≥1.0] were further verified by western blotting (WB). The performance was evaluated by receiver operating characteristic (ROC) curve. ResultsThe 152 samples of S/CO ratio≥1.0 were determined by Chemclin CLIA system. The screening positive reaction rate was 1.09%. The results verified by WB for the screening positive samples showed that 119 samples were positive， 7 samples were indeterminate，and 26 samples were negative. The false positive rate of screening positive reaction samples was 17.11% . The ROC curve indicated that the S/CO ratio for anti-TP antibody was 3.32 when Youden index reached maximum. The S/CO ratio was 3.25, when positive predictive value was ≥95% of Chemclin CLIA system. ConclusionsIn order to both reduce the false positive rate of anti-TP antibody screening and minimize the number of samples to be further determined by confirmation assay，each laboratory should set up a suitable S/CO ratio for different populations and determination systems (reagents) and determine the S/CO ratio scope to be further determined by confirmation assay.

Key words:Anti-treponema pallidum antibody; Chemiluminescence immunoassay; Confirmation assay; Positive predictive value; Pregnant woman

收稿日期：(2015-05-19)

作者简介：蔡徐山，男，1972年生，硕士，副主任技师，主要从事免疫学及分子生物学检验和研究工作。

中图分类号：

文章编号：1673-8640(2015)12-1190-03R446.61

文献标志码：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.12.006