前列腺癌组织中SOX7及SOX9基因的表达及意义①

张　新，朱广斌，张天宇，陈国强，刘湘彬

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003；2.大庆油田总医院，黑龙江 大庆 163001；3.大庆医学高等专科学校，黑龙江 大庆 163001)



前列腺癌组织中SOX7及SOX9基因的表达及意义①

张新1，朱广斌2，张天宇1，陈国强2，刘湘彬3

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003；2.大庆油田总医院，黑龙江 大庆 163001；3.大庆医学高等专科学校，黑龙江 大庆 163001)

摘要：目的：探讨前列腺癌组织中SOX7及SOX9的表达及意义。方法：采用免疫组化法对SOX7及SOX9在30例前列腺癌组织及30例前列腺增生组织中的表达差异进行验证，再采用反转录实时定量PCR(RT-QPCR)检测SOX7及SOX9mRNA在30例前列腺癌组织及10例前列腺增生组织中的相对定量差异。结果：实验组中的SOX7呈现了低表达，而在对照组中SOX7的表达偏高(P<0.05)；SOX9在前列腺癌组织中呈现高表达，在前列腺增生组织中呈现低表达(P<0.05)。在前列腺癌组织中，SOX7的Ct值相对SOX9偏高，说明前列腺癌组织中SOX7的表达量相对于SOX9低。相比对照组，SOX7在前列腺癌组织中的相对定量偏低，而SOX9在前列腺癌组织中的相对定量偏高。结论：SOX7与SOX9的表达呈负相关。SOX9的表达与前列腺癌恶性程度正相关，SOX7的表达与前列腺癌恶性程度负相关。它们的表达与年龄无明显相关。

关键词:前列腺癌;SOX7;SOX9

在西方国家，前列腺癌是老年男性发病率最高的肿瘤之一，死亡率仅次于肺癌，位于第二位[1]。而在我国，前列腺癌的死亡率也在逐年上升。生活习惯越偏向于西方化，许多传统饮食能带来的保护因素就越低[2]。作为一种基因病变，多种基因分不同步骤参与了前列腺癌的发生发展阶段，如受体HER22、EGFR及E2cadherin表达出现异常[3]，原癌基因ras、c2myc的激活，抑癌基因P53和Rb等出现失活或突变在前列腺癌中多有发生。SOX7位于人类染色体8p23.1，为Wnt/β-catenin_TCF信号通路的负性调节因子[4]，能编码30个氨基酸，是SOX基因F亚族成员之一。SOX7的低表达与包括原发性结肠癌、原发性肾肿瘤、乳腺癌在内的多种肿瘤的发生发展均有关[5]。SOX9位于17号染色体长臂上17q24.3-25.1，其HMG-box可以结合ImPortinβ、CaM[6]，SOX9能编码509个氨基酸，是SOX基因E亚族的成员之一。笔者应用RT-QPCR及免疫组化评分对前列腺癌组织及正常前列腺增生组织中SOX7、SOX9的表达差异进行了检测，并对其与临床病理参数之间的关系进行了分析。

1　材料与方法

1.1材料

2013-03～2014-11由大庆市油田总医院、大庆龙南医院两所医院泌尿外科经直肠前列腺穿刺、手术切除的30例前列腺癌组织标本，30例标本经过病理诊断证实为前列腺癌。另选取上述医院手术切除后病理诊断为前列腺增生的标本30例为对照组。标本离体后立即取材，半小时内冻存于液氮内并保存。

1.2方法

1.2.1免疫组化方法：液氮取出组织后脱水并石蜡包埋，自动切片机连续切片4μm并展片，按SP试剂盒说明进行一抗二抗染色操作。光镜下每张切片选择5个随机高倍镜视野(400×)，胞质或胞核出现棕色即判定为阳性细胞。按阳性细胞占总细胞的比例、阳性细胞染色强度对实验结果进行评判。阴性对照使用PBS，由两位病理学家对免疫组化结果进行评分。

1.2.2目标基因mRNA检测：采用Trizol法提取实验组织总RNA，按照试剂盒说明反转录合成cDNA并储存在-20℃冰箱备用。以cDNA为模版，进行RT-QPCR扩增SOX7、SOX9及内参GAPDH基因，引物序列见表1。扩增体系由10μLSYBR Green I Master Mix、6.4μL超纯水、2μLcDNA、0.8μLPrimer Mix组成。设置PCR仪的反应条件为：95℃预变性60S，95℃变性10S，60℃退火15S，72℃延伸20S，共40个循环。SOX7、SOX9的mRNA表达水平为2- Ct， Ct=Ct(目标基因)-Ct(内参基因)。

表1　引物序列

1.3统计学方法

2　结果

2.1免疫组化结果

30例前列腺癌组织中SOX7阳性表达12例，阳性率40%；30例前列腺增生组织中SOX7阳性表达21例，阳性率70%(χ2=5.455，P <0.05)。30例前列腺癌组织中SOX9阳性表达28例，阳性率93.3%，30例前列腺增生组织中SOX9阳表达22例，阳性率73.3%(χ2=4.320，P <0.05)。前列腺癌组织中SOX7表达明显低于前列腺增生组织，SOX9在前列腺癌组织中表达明显强于前列腺增生组织。

图1　SOX7染色结果(400×)，左为前列腺癌组织，右为前列腺增生组织

图2　SOX9染色结果(400×)，左为前列腺癌组织，右为前列腺增生组织

2.2SOX7、SOX7染色评分对比临床病理参数

见表2。

表2　SOX7、SOX9染色评分与临床病理参数的关系

2.3SOX7及SOX9mRNA在Pca组织和BPH组织中的表达

对SOX7及SOX9在前列腺癌组织及前列腺增生组织中的mRNA表达量进行独立样本t检验，结果可见SOX7在前列腺癌组织中的mRNA表达量为(2.760±0.908)，而在前列腺增生组织中的表达量为(4.274±0.874)，差异具有显著性(P <0.05)。

2.4不同临床病理参数Pca组织中SOX7及SOX9mRNA的表达

见表3。

表3　SOX7、SOX9mRNA表达量与临床病理参数的关系

3　讨论

前列腺癌是男性生殖系统中最常见的癌症。在对前列腺癌的早期诊断中，血清PSA一直是临床上广泛使用的"金标准"，但在实际临床工作中，我们经常可以见到术前应用PSA评估病情未达到前列腺癌诊断标准，术后病理诊断却证实为前列腺癌的病例；有些病例是术前PSA经过反复检查一直偏高，术后病理诊断却是良性前列腺增生。这样的病例并非偶然，血清PSA的诊断灰区正在令临床医生变得越来越尴尬。前列腺癌是一种病因尚未明确的复杂性疾病，目前针对前列腺癌的治疗多种多样，诸如雄激素抑制治疗(Androgen suppression therapy, AST)这样的治疗方法对于前列腺癌，尤其是转移性前列腺癌，已经被公认为是最为有效，但几乎所有经过一段时间AST的患者均会产生雄激素抵抗，而一旦发展为AIPC或HRPC，前列腺癌就会复发并变得无法治愈[7]。因此，找到对前列腺癌早期诊断有帮助，且对判断前列腺癌进展及预后有一定提示作用的新的分子标志物变得越来越迫切。

根据先前的研究，在某些人类肿瘤细胞系中，如宫颈癌Hela S3、结肠癌SW480等，SOX7并没有检测到表达，进而推测SOX7基因在这些肿瘤的发生发展过程中可能充当了抑癌基因的角色[8]。在前列腺癌中，SOX7的mRNA及蛋白表达均被证实是下调的，这在本实验中得到证实，这种下调的表达被认为是其特异性启动子甲基化所造成的。 Drivdahl等人[9]在2004年发现，在前列腺癌细胞株中具有较高表达的SOX9可以导致正常细胞增殖率的下降，使正常细胞周期停滞于G0/G1，SOX9同时还增加了细胞凋亡的敏感性；Wang等人[10]也表明，在复发性激素难治性前列腺癌细胞中的SOX9呈现更高的表达；SOX9通过促进肿瘤细胞的增殖，从而参与了前列腺癌肿瘤重新激活的发展过程，这些之前的研究都与本次实验有着相似的结果。

从本次RT-QPCR结果中可以看出，SOX7在对照组及实验组呈现了明显的定量差异，在前列腺癌组织中，SOX7的相对定量偏低，而SOX9与之相反，在前列腺癌组织中呈现了高表达量。实时荧光PCR扩增曲线的Ct值代表了扩增所需要的循环数，而Ct值与相对定量成反比，实验组中SOX9的Ct值相对SOX7低，相应其表达量就偏高，结合免疫组化实验中前列腺癌组织中SOX9蛋白的高表达，不难看出SOX9可能是促癌基因，它的上调可能对前列腺癌的进展起了促进作用。SOX7可能是抑癌基因，它的下调也参与了前列腺癌的进展。

参考文献:

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[5]幸荣臻，刘湘彬，朱广斌，等.rs4242384多态性与大庆地区人群的前列腺癌遗传易感的相关研究[J].黑龙江医药科学，2014,37(6)：63-65

[6]Sudbeck P,SchererG.Two independent nuclear localization signals are present in the DNA -binding high -mobility group domains of SRY and SOX9[J]. J BiolChem,1997,272(44):27848-27852

[7]陶然，罗振国，韩旭，等.血清中MiRNA-26a检测在早期前列腺癌诊断中的意义[J].黑龙江医药科学，2013,36(4)：43-44

[8]Cermenati S, Moleri S, Cimbro S,et al.Sox18 and Sox7 play redundant roles in vascular development[J].Blood,2008, 111:2657-2666

[9]Drivdahl R,Haugk KH,Sprenger CC,et al. Suppression of growth and tumorigenicity in the prostate tumor cell line M12 by overexpression of the transcription factor SOX9[J].Oncogene,2004, 23(26):4584-4593

[10]Wang H, Leav I,Ibaragi S,et al. SOX9 is expressed in human fetal prostate epithelium and enhances prostate cancer invasion[J].Cancer Res,2008,68(6):1625-1630

The expression of prostate cancer SOX7 and SOX9 gene and its significance

ZHANGXin1,ZHUGuang-bin2,ZHANGTian-yu1,CHENGuo-qiang2,LIUXiang-bin3

(1.The First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China; 2.Daqing Oilfield General Hospital, Daqing 163001, China; 3.Daqing Medical College, Daqing 163001, China)

Abstract:Objective:To discuss prostate cancer (prostate cancer, PCa) tissue expression and the significance of SOX7 and SOX9mRNA.Method:Immunohisto chemical method was used to stain the differences of SOX7 and SOX9 expression differences in prostate cancer tissues and 30 cases of benign prostatic hyperplasia verify. Then quantitative real-time reverse transcription PCR (RT-QPCR) and SOX9mRNA SOX7 were used to detect prostate cancer in 30 cases quantitative differences in the relative organization and 10 cases of benign prostatic hyperplasia.Result:SOX7 experimental group presented low expression, while in the control group, the expression of SOX7 was high (P<0.05). SOX9 was highly expressed in prostate cancer tissues, but showing low expression (P<0.05) in benign prostatic hyperplasia. In prostate cancer, compared with SOX7, Ct values of SOX7 was relatively high, indicating that the expression of SOX7 in prostate cancer was low compared with SOX9. Compared to the control group, relative quantification of SOX7 in prostate cancer tissues was low, and relative quantification of SOX9 in prostate cancer tissues was high.Conclusion:SOX7 and SOX9 expression is negatively correlated. SOX9 expression is positively related to the degree of malignancy of prostate cancer. The expression of prostate cancer is negatively correlated to malignancy SOX7. Their expressions were no significant correlation with age.

Key words:prostate cancer ( PCa);SOX7;SOX9

中图分类号：R737.25

文献标识码：A

文章编号：1008-0104(2015)06-0009-03

基金项目：①1.黑龙江省卫生厅科研课题，编号：2011-398；2.黑龙江省科技厅自然基金面上项目，编号：D201225。

作者简介：张新(1987～)男，内蒙古呼伦贝尔人，在读硕士研究生，医师。

通讯作者：刘湘彬(1955～)男，黑龙江大庆人，硕士，教授，硕士研究生导师。E-mail:liuxbin@vip.sina.com。

(收稿日期：2015-03-26)