乙肝疫苗接种后新生儿乙型肝炎表面抗原一过性阳性的研究

刘　华，　王颖智，　沈云岳，　庄亦晖，　康　懿，

王雯静，　吴树英，　蒋　炜，　高　锋

(上海交通大学附属第六人民医院检验科，上海 200233)



乙肝疫苗接种后新生儿乙型肝炎表面抗原一过性阳性的研究

刘华，王颖智，沈云岳，庄亦晖，康懿，

王雯静，吴树英，蒋炜，高锋

(上海交通大学附属第六人民医院检验科，上海 200233)

摘要：目的回顾性分析并探讨接种乙型肝炎(简称乙肝)疫苗与新生儿乙型肝炎表面抗原(HBsAg)一过性阳性的关系。方法对进行HBsAg检测的178例新生儿资料进行回顾性分析，对疫苗接种后的HBsAg阳性发生率、“乙肝二对半”模式、HBsAg浓度及与接种时间的关系等进行了统计分析，通过胆红素干扰试验排除新生儿黄疸对HBsAg检测的影响，根据新生儿血容量进行乙肝疫苗体外稀释,检测其HBsAg浓度。结果178例新生儿共检测184次，检出HBsAg阳性16例，其中11例为乙肝疫苗引起的HBsAg阳性，3例为母婴垂直传播引起的HBsAg阳性，2例不确定。新生儿乙肝疫苗接种后HBsAg阳性主要发生于接种疫苗后0～7 d，与疫苗接种后8～14 d及15～31 d比较，HBsAg的阳性率差异有统计学意义(P值分别为0.046、0.032)。疫苗接种后的HBsAg浓度为0.12(0.07～0.25)IU/mL，属低值水平。接种疫苗后0～2 d，HBsAg浓度最高，之后逐渐下降。乙肝疫苗接种后11例以HBsAg单项阳性为主，其中3例同时伴乙型肝炎表面抗体(HBsAb)阳性，不同于乙肝病毒感染后常见血清模式。将乙肝疫苗1∶600稀释后检测HBsAg为0.13 IU/mL，与乙肝疫苗引起的HBsAg阳性浓度[0.12(0.07～0.25)IU/mL]近似。干扰试验显示383.9 μmol/L总胆红素、29.9 μmol/L直接胆红素不影响HBsAg检测。结论接种乙肝疫苗2周内的新生儿发生HBsAg一过性阳性的可能性较大，建议HBsAg检测在乙肝疫苗接种2周后再进行。

随着检验技术的进步，化学发光法检测乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)的灵敏度已达到0.15 ng/mL。近几年来，我们在临床检验工作中就遇到不少新生儿HBsAg一过性阳性的情况，而他们的母亲多数不是乙型肝炎(简称乙肝)患者。这引起了我们的极大关注。因此，我们对检测HBsAg的新生儿的相关病史进行了回顾性分析，同时分析了乙肝疫苗引起的HBsAg一过性阳性发生时间、频率、浓度、乙肝标志物模式，将乙肝疫苗按新生儿血容量进行体外稀释，模拟体内疫苗浓度并检测HBsAg含量，通过胆红素干扰试验排除新生儿黄疸对HBsAg检测的影响，为临床合理解释新生儿HBsAg阳性结果提供实验室依据，也为临床合理掌握检测HBsAg节点提供指导性建议。

材料和方法

一、研究对象

收集2010年1月至2013年8月上海交通大学附属第六人民医院儿科住院部新生儿检测HBsAg的病例178例，男100例，女78例，年龄1～31 d。对178例新生儿病史资料进行回顾性分析。其中，147例新生儿在出生24 h内接受了乙肝疫苗接种，根据疫苗接种时的年龄将这147例新生儿分为0～7 d组、8～14 d组和15～31 d组分别进行统计。

二、仪器与试剂

ABBOTT i2000全自动免疫发光分析仪及配套HBsAg化学发光定量检测试剂、HBsAg稀释液(美国雅培公司)；HBsAg弱阳性混合血清；Sysmex干扰检测试剂盒；日立7600全自动生化分析仪及配套胆红素检测试剂(日本日立公司)；重组乙肝疫苗(剂量：0.5 mL/支，含重组HBsAg 10 mg)。

三、方法

1．乙肝指标检测乙肝指标包括HBsAg、乙肝表面抗体(anti-hepatitis B surface antigen antibody, HBsAb)、乙肝e抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)、乙肝核心抗体(anti-hepatitis B core antigen antibody, HBcAb)、乙肝e抗体(anti-hepatitis B e antigen antibody, HBeAb)，合称为“乙肝二对半”。以上指标均采用微粒子化学发光法。依据操作规程做好定标和室内质量控制，结果以HBsAg>0.05 IU/mL判定为有反应性，所有有反应性的样本均已按复检要求复检为阳性。常见的“乙肝二对半”模式见表1。

表1　常见“乙肝二对半”模式

2．总胆红素(total bilirubin, TBil)和直接胆红素(direct bilirubin, DBil)检测采用矾酸氧化法检测TBil和DBil，按要求做好定标工作和室内质量控制，TBil参考区间为0～18 μmol/L，DBil参考区间为0～6 μmol/L。

4．重组乙肝疫苗制品HBsAg检测使用HBsAg稀释液按1∶200、1∶600、1∶1 000、1∶2 000分别对重组乙肝疫苗进行稀释，然后检测HBsAg浓度。如果按新生儿平均体重3 000 g，血容量300 mL，注射一支疫苗(0.5 mL/支)计算，相当于将疫苗1∶600稀释。

四、统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析。HBsAg浓度以中位数(范围)表示，率的比较采用卡方检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一、178例新生儿HBsAg阳性结果分析

178例新生儿中有147例在出生24 h内接种了乙肝疫苗，疫苗接种率为82.6%；其中有12例新生儿在接种后1周内检测HBsAg呈阳性，浓度为0.12(0.07～0.25)IU/mL。这12例新生儿中有6例进行了第2次HBsAg随访检测，其中4例确认为阴性结果。查阅这12例HBsAg阳性新生儿母亲病史，其中11名无肝炎史，排除母婴垂直传播的可能性；另1例新生儿母亲病史资料及患儿HBsAg随访资料缺失。见表2。

另外31例未接种乙肝疫苗的新生儿中有4例HBsAg呈阳性，且其中3例在出生后1 d的“乙肝二对半”结果即显示为“大三阳”模式，其母亲均为乙肝“大三阳”患者，存在母婴垂直传播的可能性；另1例新生儿出生后5 d检测HBsAg呈阳性(0.16 IU/mL)，且“乙肝二对半”结果为HBsAg单项阳性，其母亲肝炎史不详，该新生儿也未能进行HBsAg随访。见表3。

178例新生儿HBsAg检测结果的分类统计流程图见图1。

表2　12例接种乙肝疫苗的HBsAg阳性新生儿的一般资料

注：“+”表示HBsAg阳性；“-”表示HBsAg阴性

表3　未接种乙肝疫苗的HBsAg阳性新生儿资料

图1　新生儿不同时间内检测HBsAg结果分类统计流式图

二、乙肝疫苗接种后新生儿HBsAg阳性的浓度及“乙肝二对半”模式分析

未接种组的HBsAg阳性浓度[1.11(0.16～2.65) IU/mL]明显高于接种乙肝疫苗组[0.12(0.07～0.25)IU/mL]。乙肝疫苗接种后HBsAg阳性的浓度值多<0.5 IU/mL，而未接种疫苗的4例中有2例HBsAg阳性结果>2 IU/mL，见图2。

乙肝疫苗接种后HBsAg阳性的“乙肝二对半”模式以HBsAg单项阳性为主，其中3例同时伴HBsAb低值阳性，见表2；而未接种疫苗的HBsAg阳性的“乙肝二对半”模式以“大三阳”为主，见表3。

三、新生儿接种疫苗后HBsAg阳性出现的时间分析

147例接种乙肝疫苗的新生儿中有12例HBsAg呈阳性(>0.05 IU/mL)。HBsAg阳性主要集中于接种后7 d内，接种后8～14 d及15～31 d HBsAg均呈阴性。见图3。

12例接种乙肝疫苗后HBsAg呈阳性的新生儿其HBsAg浓度随着乙肝疫苗接种时间的增加而逐渐下降。接种后0～2 d，HBsAg处于较高水平(≥0.2 IU/mL)；接种后3～5 d，HBsAg浓度不断下降，于6～7 d降至0.1 IU/mL。见图4。

图2　接种疫苗组与未接种疫苗组HBsAg浓度比较

注：虚线为HBsAg阳性判定值(0.05 IU/mL)；与0～7 d组比较，*P<0.05

图3新生儿接种乙肝疫苗后HBsAg阳性的时间及结果

图4　新生儿接种乙肝疫苗后HBsAg浓度的变化

四、黄疸对HBsAg低值阳性的干扰

对照样本HBsAg检测均值为0.200 IU/mL(n=12)，±1.96s范围为0.184～0.206 IU/mL。TBil干扰实验样本的HBsAg检测均值为0.194 IU/mL(n=7)，DBil干扰实验样本的HBsAg检测均值为0.188 IU/mL(n=5)，均在可接受范围内。

五、重组乙肝疫苗制品检测HBsAg结果

重组乙肝疫苗直接检测HBsAg的结果为7.00 IU/mL，将疫苗分别以1∶200、1∶600、1∶1 000、1∶2 000稀释后，检测HBsAg浓度分别为0.31、0.13、0.13和0.06 IU/mL。将疫苗以1∶600稀释测得的HBsAg浓度与接种疫苗后新生儿HBsAg阳性浓度[0.12(0.07～0.25)IU/mL]相符。

讨论

乙肝病毒疫苗含有纯化的基因重组HBsAg，在注射疫苗后可能会使HBsAg检测呈阳性。国外在乙肝疫苗应用初期已发现了这个问题。20世纪90年代之后陆续有研究者发现因注射乙肝疫苗Engerix B 导致新生儿HBsAg一过性阳性的情况[2-4]。但由于新生儿的血液样本较难得到，因此这些文献报道中的标本量都相对较少，从十几例至几十例，疫苗接种后HBsAg的阳性检出率也由17%至55%不等，相差悬殊。之后陆续有类似情况的报道，透析患者[5-6]、献血员[7]及普通成人[8-10]都有涉及。我国于2002年正式将乙肝疫苗纳入计划免疫，起步较晚，因此国内罕有关于新生儿HBsAg一过性阳性的报道。

本研究针对中国人群及国产疫苗，回顾分析了178名新生儿的184次HBsAg检测结果，样本量较之前的报道都大，并首次对乙肝疫苗接种后新生儿HBsAg一过性阳性常为低值阳性的原因给出了解释。由于新生儿样本量有限，本研究中的阳性标本无法进行中和试验确认，但所有阳性血清样本及随访标本均按说明书以10 000×g离心10 min后进行重复检测确认。从总体情况来看，本院乙肝疫苗引起新生儿HBsAg一过性阳性的发生率为8.2%，低于国外早期的研究结果[3-4]，这可能和检测方法的不同及Cut-off值的设定有关。

从接种时间上观察，本研究中新生儿接种乙肝疫苗后检测到HBsAg阳性都集中于接种疫苗后的1周内，这与文献报道的时间相符[3-5]。但8～14 d检测到阳性的可能性仍然较高，因此建议HBsAg检测最好在接种疫苗后至少2周以后再进行。有2例新生儿进行HBsAg第2次随访检测时未能转阴，可能就是由于随访时间在疫苗接种后的1周内，血液中仍然存在可检出的重组HBsAg。

从HBsAg阳性浓度分析，疫苗接种后新生儿HBsAg阳性浓度为低值水平[0.12(0.07～0.25)IU/mL]，一过性HBsAg阳性浓度在接种疫苗后0～2 d较高，之后随着乙肝疫苗接种时间的增加而呈逐渐下降的趋势，这与BERNSTEIN等[4]与RYSGAARD等[8]的报道稍有差异，他们发现HBsAg高峰值出现在接种疫苗后的2～3 d，之后逐渐下降。原因可能为一方面研究对象不完全相同，另一方面本研究中0～2 d的例数相对较少，不能完全代表整体水平。从“乙肝二对半”模式上发现，接种疫苗后的模式只分为HBsAg单项阳性(75%)以及HBsAg阳性伴低值HBsAb阳性(25%)2种模式，不同于常规乙肝病毒感染后的模式。干扰试验证明，本研究中新生儿黄疸对HBsAg检测无影响，HBsAg阳性与黄疸无关。

综上所述，我们初步推断新生儿HBsAg一过性阳性可能与乙肝疫苗接种直接相关。因此提醒临床医师尽量在疫苗接种2周后再进行HBsAg检测，以排除乙肝疫苗对HBsAg检测的影响。

参考文献

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(本文编辑：龚晓霖)

关键词：乙型肝炎表面抗原；一过性阳性；乙型肝炎疫苗；新生儿

Research on vaccine-induced transient hepatitis B surface antigen positivity in newborn infantsLIUHua，WANGYingzhi，SHENYunyue，ZHUANGYihui，KANGYi，WANGWenjing，WUShuying，JIANGWei，GAOFeng. (DepartmentofClinicalLaboratory，theSixthHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200233，China)

Abstract:ObjectiveTo retrospectively analyze and study the relationship of vaccination against hepatitis B virus with transient hepatitis B surface antigen(HBsAg) positivity in newborn infants. MethodsThe data of 178 newborn infants were collected and analyzed retrospectively, who were determined for HBsAg. The positive rate of HBsAg, hepatitis B 5 items, HBsAg concentration and vaccination time after vaccine inducing were determined, and the relationships were analyzed statistically. Interference testing was performed to investigate the influence of serum jaundice in HBsAg assay. The hepatitis B virus vaccine was diluted in vitro according to neonatal blood volume, and HBsAg concentration was detected. ResultsA total of 178 newborn infants were determined for 184 times totally, and 16 newborn infants had positive HBsAg. Of these 16 newborn infants， 11 cases could be attributed to vaccination， 3 cases were due to mother-to-child transmission， and 2 cases were with unknown cause. The HBsAg positivity for newborn infants receiving vaccine 0-7d were statistically significant in comparison with those of 8-14 d and 15-31 d (P=0.046 and 0.032). After the vaccine was injected, the concentration of HBsAg was 0.12 (0.07-0.25) IU/mL, which was at low level. The concentration of HBsAg reached the highest level after 0-2d of injection, and then it decreased gradually. There were totally 11 samples which were HBsAg single positive, and 3 samples of them were both HBsAg and anti-hepatitis B surface antigen antibody (HBsAb) positive, which was obviously different from the common serum pattern of hepatitis B virus infection. HBsAg concentration was 0.13 IU/mL at 1∶600 dilution of vaccine， being similar with that of vaccine-induced HBsAg positive [0.12 (0.07-0.25) IU/mL]. Jaundice interference testing showed that 383.9 μmol/L total bilirubin and 29.9 μmol/L direct bilirubin distractors did not affect HBsAg results. ConclusionsTransient HBsAg positivity can occur in newborn infants within 2 weeks post-vaccination. Newborn infants may not be screened for HBsAg within 2 weeks following vaccination against hepatitis B virus.

Key words:Hepatitis B surface antigen；Transient positivity；Hepatitis B virus vaccine；Newborn infant

收稿日期：(2015-03-23)

通讯作者：髙锋，联系电话：021-24058702。

作者简介：刘华，女，1976年生，学士，主管技师，主要从事临床免疫学检验工作。

中图分类号：

文章编号：1673-8640(2015)11-1107-05R446.62

文献标志码：ADOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.11.012