幼年特发性关节炎患儿血清、关节液骨桥蛋白水平及意义

俞晗春 吴菱 钟世玲 陈圆玲 狄亚珍 王佳佩

幼年特发性关节炎患儿血清、关节液骨桥蛋白水平及意义

俞晗春 吴菱 钟世玲 陈圆玲 狄亚珍 王佳佩

目的 探讨血清、关节液骨桥蛋白（OPN）在幼年特发性关节炎（JIA）中的临床意义。方法 采集确诊为JIA 39例患儿（JIA组）及腹股沟斜疝修补术30例患儿（对照组）的静脉血，并抽取JIA组急性期15例患儿的关节液，采用ELISA法测定血清、关节液OPN水平。结果 JIA组血清OPN水平急性期[（4.8±2.4）ng/ml]明显高于缓解期[（2.1±1.2）ng/ml]及对照组[（0.5±0.1）ng/ml]，差异有统计学意义（P＜0.05）。JIA组关节液OPN水平[（16.5±1.7）ng/ml]明显高于血清OPN水平[（4.8±2.4）ng/ml]，差异有统计学意义（t=17.234，P＜0.05）。JIA组中关节破坏的患儿血清OPN水平[（6.9±1.9）ng/ml]明显高于无关节破坏的患儿[（3.2±1.2）ng/ml]，差异有统计学意义（t=7.243，P＜0.05）。JIA组急性期血清OPN水平与血白细胞、中性粒细胞、C反应蛋白、血沉、关节肿胀数呈正相关（r=0.662、0.811、0.777、0.833、0.375，均P＜0.05），与血红蛋白、血小板、关节压痛数、晨僵时间无关（r=0.091、0.296、0.229、0.019，均P＞0.05）。结论 OPN可能作为促炎因子参与JIA疾病活动、关节破坏。

骨桥蛋白 关节液 幼年特发性关节炎 关节破坏

幼年特发性关节炎（juvenile idiopathic arthritis，JIA）是一种严重影响患儿生活质量的自身免疫性疾病，也是造成小儿关节残疾的首要原因，且发病率呈逐年增高趋势[1-2]。JIA发病机制不明，目前研究发现，众多细胞因子和炎性介质的过度产生可导致JIA的关节破坏。骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是一种与炎症相关的多功能蛋白质，同时可作为软骨代谢物反映骨与软骨破坏的程度[3]。有研究发现OPN在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者的活动期和非活动期的血清中较对照组显著增高，同时OPN在RA的滑膜组织中大量表达，提示OPN与RA的滑膜炎症和关节破坏有关，是RA发病机制的重要环节[4]。而JIA与RA的病理表现类似，JIA患儿成年后更易发展成为RA[5]，故推测OPN可能与JIA的发病也相关。本研究通过检测JIA患儿急性期、缓解期血清、关节液OPN水平，探讨OPN水平与JIA疾病活动、关节破坏的关系。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选择2011年9月至2013年1月宁波市妇女儿童医院小儿免疫风湿科住院确诊为JIA患儿39例，诊断标准参照国际风湿病学联盟儿科常委专家组于2001年8月在加拿大埃得蒙第3次会议讨论JIA新的分类标准[6]，急性期、缓解期定义参照2011年美国风湿病学会关于JIA治疗建议[7]，急性期是指存在活动性关节炎（关节处于肿胀和疼痛或伴触痛的状态）或活动性发热（全身型JIA病情活动而表现出的发热症状），缓解期是指无活动性关节炎及无活动性发热同时血液炎症指标恢复正常，关节破坏者放射学检测（包括X线、磁共振）有损伤表现（包括骨质侵蚀或关节间隙缩小、糜烂或关节间隙狭窄）等。JIA患儿男20例，女19例，年龄3～15岁，平均（9.5±2.9）岁；病程0.25～3年，平均1.2年。关节破坏17例，无关节破坏22例。另选择宁波市妇女儿童医院同期外科住院的腹股沟斜疝修补术患儿30例作为对照组，均排除感染性疾病、自身免疫性疾病；男16例，女14例，年龄6～14岁，平均（9.8±2.1）岁。两组患儿性别、年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。两组患儿采血前2周均未用过激素、免疫抑制剂、生物制剂等。本研究经医院学术伦理委员会讨论通过，所有患儿家属均知情同意。

1.2 标本收集与实验方法 JIA组分别在急性期和缓解期抽血，对照组在入院当日抽血，采集清晨空腹静脉血1ml，JIA组中15例急性期患儿抽取关节液5ml，置于促凝管，离心后取上清液冻存于-80℃冰箱以备检测，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测OPN，试剂盒购自美国RD公司，采用安图ANTHOS2010酶标仪。全自动血细胞分析仪检测血常规中的白细胞（WBC）、中性粒细胞（N）、血红蛋白（Hb）、血小板（PLT），C反应蛋白（CRP）采用比浊法，ESR采用魏氏法。JIA患儿同时记录晨僵时间（h）、压痛关节数（个）、肿胀关节数（个）。1.3 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件，计量资料以表示，组间比较采用t检验或配对t检验，OPN与 WBC、N、CRP、ESR、晨僵时间、压痛关节数、肿胀关节数相关性分析采用Pearson相关系数。

2 结果

2.1 两组患儿血清OPN水平的比较 JIA患儿急性期血清OPN水平为（4.8±2.4）ng/ml，明显高于缓解期[（2.1± 1.2）ng/ml]，差异有统计学意义（t=11.737，P＜0.05），JIA组急性期、缓解期OPN水平均高于对照组[（0.5±0.1）ng/ ml]，差异有统计学意义（t=11.267、7.753，P＜0.05）。JIA组关节液OPN水平为（16.5±1.7）ng/ml，明显高于血清OPN水平 [（4.8±2.4）ng/ml]，差异有统计学意义（t= 17.234，P＜0.05）。

2.2 关节破坏组与无关节破坏组血清OPN水平的比较 关节破坏组JIA患儿血清OPN水平为（6.9±1.9）ng/ ml，明显高于无关节破坏组[（3.2±1.2）ng/ml]，差异有统计学意义（t=7.243，P＜0.05）。

2.3 血清OPN水平与其他临床指标的关系 JIA患儿WBC（9.1±3.6）×109/L，N（0.7±0.1）%，Hb（122.1±8.0）g/L，PLT（306.7±98.5）×109/L，CRP（52.2±39.5）mg/L，ESR（48.1±24.1）mm/h，关节压痛数（3.6±1.6）个，关节肿胀术（1.7±1.0）个，晨僵时间（1.5±0.8）h。急性期血清OPN水平与WBC、N、CRP、ESR、关节肿胀数呈正相关（r=0.662、0.811、0.777、0.833、0.375，均 P＜0.05），与 Hb、PLT、关节压痛数、晨僵时间无关（r=0.091、0.296、0.229、0.019，均P＞0.05）。

3 讨论

JIA病理主要表现为受累关节滑膜增生性和侵蚀性的改变，同时可伴有关节软骨的进行性、不可逆性破坏，最终导致功能丧失，甚至关节畸形[8-9]。JIA的临床表现各异，其发病机制尚未明确，目前较为一致的观点认为JIA是T淋巴细胞活化，尤其是Th1淋巴细胞高度活化，刺激巨噬细胞和淋巴细胞产生免疫应答，导致关节破坏[10]。OPN可选择性地促进Th1细胞因子的表达，抑制Th2细胞因子的表达，促进B细胞的增殖和抗体产生，参与关节炎性反应和骨破坏[11]。

OPN是一种重要的多功能细胞外基质蛋白，最早发现于骨基质和牙齿中，可由破骨细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞等多种细胞分泌[12]。OPN可通过其精氨酸-甘氨酸-天冬氨（RGD）序列识别、结合细胞膜上的整合素，从而介导细胞与基质间的黏附以及细胞信息的传递[13]。近年研究认为它是与炎症有关的潜在促炎症细胞因子，可促进Th1细胞因子表达[14]。本研究发现，JIA患儿急性期血清OPN水平高于缓解期，可能与JIA急性期炎症活动旺盛，炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6等诱导OPN表达相关[15]。JIA患儿急性期血清OPN水平高于对照组，推测在JIA的急性期炎症反应活跃时OPN表达活跃，与炎症组织相关；而缓解期OPN水平仍高于对照组，提示在JIA患儿的缓解期中仍存在慢性炎症，因而在JIA缓解期仍有维持治疗的必要。OPN可能作为炎症因子在JIA疾病发生、发展中发挥重要作用，可作为判断JIA病情活动的指标。

在骨组织中，OPN可抑制成骨细胞的增殖和分化，抑制骨组织内矿物质沉积，但可促进破骨细胞与骨基质的黏附，诱导破骨细胞的破骨过程，并可诱导破骨细胞表达金属蛋白酶-9、组织蛋白酶等来降解骨基质[16-17]。国外学者对JIA患者研究发现OPN的表达与滑膜血管出现的数量有关，而滑膜血管的增生导致血管翳生成，最终导致软骨破坏[18]。本研究发现关节破坏的JIA患儿血清OPN水平明显高于无关节破坏的JIA患儿，可能与高表达的OPN使破骨细胞在骨的再吸收过程中更易附着于骨基质，形成一个相对隔离的酸性微环境，使钙磷化合物易于溶解，骨质破坏进一步发展相关[19]。本研究OPN在JIA关节液中表达明显高于血清中，与Dong等[20]文献报道一致，OPN在关节病灶部位富集而发挥致病作用[21]，推测局部抑制OPN的靶向治疗可能有效阻断JIA病情发展。本研究还发现血清OPN水平与传统的炎症指标如WBC、N、CRP、ESR呈正相关，与Sakata等[22]研究报道一致。有研究认为OPN作为炎症相关指标高表达时能促进WBC附壁并向病灶处迁移，炎症局部血管增生，从而使局部炎症加重[23]，而N在JIA的发病中也起着重要的作用[24]，证明OPN与WBC、N等炎症指标密切相关。笔者也发现OPN水平与JIA关节肿胀数呈正相关，关节肿胀本身可作为JIA炎症活动的指标[7]，进一步阐释了OPN与JIA疾病活动度的关联性。

总之，本研究发现血清OPN水平与JIA病变活动及关节破坏相关，OPN是否参与JIA的发病机制，抑制OPN能否成为新的JIA靶向治疗有待进一步研究。

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Clinical significance of serum and joint fluid osteopontin levels in juvenile idiopathic arthritis

YU Hanchun,WU Ling,ZHONG Shiling,et al.Department of Rheumatology,Ningbo Women and Children's Hospital,Ningbo 315211,China

Objective To evaluate the clinical significance of osteopontin (OPN)in serum and joint fluid of patients with juvenile idiopathic arthritis(JIA). Methods Thirty nine children with JIA in acute phase or remission phase and 30 children with inguinalhernia(controlgroup)were enrolled in this study.Joint fluid was extracted in 15 JIA patients in acute phase.Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)was employed to measure the level of OPN in serum and joint fluid. Results Serum OPN level of JIA children in acute phase(4.8±2.4 ng/ml)was significantly higher than that of control group(0.5±0.1ng/ml)and JIA children in the remission stage(2.1±1.2 ng/ml)(all P＜0.05).The joint fluid OPN level of JIA children in acute phase was significantly higher than serum OPN level ofJIA children in acute phase(16.5±1.7 ng/mlvs 4.8±2.4ng/ml,P＜0.05).The serum OPN level of JIA with joint damagewas significantly higher than that without joint destruction(6.9±1.9 ng/ml vs 3.2±1.2 ng/ml,P＜0.05).The serum OPN level of JIA children in acute phase was positively correlated with WBC,neutrophil,CRP,ESR,the number of swelling joints (r=0.662,0.811,0.777,0.833 and 0.375,all P＜0.05),while not correlated with hemoglobin,platelet,the number of painful joint, morning stiffness(r=0.091,0.296,0.229 and 0.019,all P＞0.05). Conclusion OPN may be as a proinflammatory factor involved in JIAactivity and joint damage.

Osteopontin Jointfluid Juvenile idiopathic arthritis Jointdamage

2015-12-31）

（本文编辑：严玮雯）

浙江省宁波市科技局科研项目（2010C50010）；浙江省宁波市卫生局科研项目（2009B03）；浙江省重点平台科研项目（2015ZDA027）

315211 宁波妇女儿童医院小儿风湿免疫科（俞晗春、吴菱、钟世玲、陈圆玲、狄亚珍）；宁波大学医学院（王佳佩）

狄亚珍，E-mail：dyz028sci@163.com