国产尼群地平有关物质研究

2016-01-25温欣茹陈晶冰内蒙古自治区包头市包钢集团第三职工医院内蒙古包头014010

转化医学电子杂志 2016年11期

吕强，温欣茹，陈晶冰（内蒙古自治区包头市包钢集团第三职工医院，内蒙古包头014010）

·药学与转化医学·

国产尼群地平有关物质研究

吕强，温欣茹，陈晶冰（内蒙古自治区包头市包钢集团第三职工医院，内蒙古包头014010）

目的：确定尼群地平原料药及其片剂中有关物质的杂质归属.方法：采用2010年版《中国药典》项下该药物有关物质检查法检查，并采用富集分离的方法收集有关物质，通过LC-MS-MS初步确定其分子量及其结构.结果：通过对2009年及2011年的多厂家多批次的尼群地平原料药及片剂的考察，说明尼群地平及其片剂中有关物质的杂质归属.结论：检测结果对于尼群地平原料药及其片剂的杂质分析、质量控制和合成工艺的改进具有重要作用，并且为国产尼群地平的生产和用药安全提供了检测方法及判定依据.

尼群地平片；有关物质；杂质归属

0 引言

尼群地平（Nitrendipine，NTD）由德国拜尔公司于20世纪60年代首次合成并上市，国内于20世纪70年代开始生产［1］.2010年版《中国药典》、欧洲药典、英国药典、日本药局方项下均收载此药，其有关物质的检查方法均为液相色谱法，但目前国内尚无关于该品种未知杂质的研究.因此，为更好地控制该品种质量，本研究说明尼群地平原料药及其片剂的杂质归属，为国产尼群地平的生产提供指导意见.

1 仪器和试药

1.1 仪器Alltech液相色谱仪；PDA检测器；SarloriusBP211D电子天平；KQ-500DE型数控超声波清洗器；ZF-Ⅰ型三用紫外分析仪；DHG-9145A型电热鼓风干燥箱；LC-20AD型液相色谱仪；API3200型质谱仪［2］.

1.2 试药尼群地平对照品；杂质Ⅰ对照品；2011年尼群地平片；尼群地平原料药；2009年尼群地平片；乙腈、四氢呋喃、甲醇为色谱纯其他试剂均为分析纯.

2 方法和结果

2.1 溶液的制备片剂供试品溶液：避光操作.取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于尼群地平50 mg），置50 mL量瓶中，加四氢呋喃12 mL，振摇10 min，再加乙腈－水（20∶56）混合溶液适量，振摇使尼群地平溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 m滤膜滤过，取续滤液，作为片剂供试品溶液.对照溶液：取2，6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-3，5-吡啶二甲酸甲酯乙酯（杂质Ⅰ）对照品，精密称定，加四氢呋喃适量使溶解，用乙腈－水（20∶56）混合溶液定量稀释制成每1 mL中约含0.1 mg的溶液，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，精密加入浓度为1 mg／mL的尼群地平对照品溶液1 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液.系统适应性溶液：取尼群地平对照品与杂质Ⅰ对照品各适量，加四氢呋喃适量使溶解，加流动相溶解并稀释制成每1 mL中各约含1 mg与10 g的混合溶液，作为系统适应性溶液［3］.

2.2 色谱条件phenomenex十八烷基硅烷健合硅胶色谱柱（150 mm×4.6 mm），乙腈－四氢呋喃－水（20∶24∶56）为流动相；检测波长237 nm；进样量20 L；流速为1 mL／min；柱温：25℃.

2.3 系统适应性试验分别取溶液制备项下的原料药供试品溶液、片剂供试品溶液、对照溶液、空白溶剂及系统适应性溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图，由色谱图可见，在此试验条件下，主峰与杂质峰分离效果好，峰形较好，保留时间适中，其中主峰保留时间约为10.820 min，杂质Ⅰ峰的保留时间约为8.895 min，理论塔板数为5780，尼群地平峰与杂质Ⅰ峰的分离度为4.35符合要求［4］.

2.4 2011年份的片剂有关物质比较分别取溶液制备项下片剂供试品溶液（2011年样品），按上述色谱条件进样，记录色谱图，由图得出18个厂家杂质Ⅰ的平均百分含量为0.74%，杂质Ⅱ的平均百分含量为4.18%，杂质Ⅲ的平均百分含量为0.94%.结果显示：所测定的这些厂家生产的尼群地平片的有关物质，除A厂、D厂外均可检出三种杂质，其中杂质Ⅰ为已知杂质，杂质Ⅱ、杂质Ⅲ为未知杂质，其中，A厂、C厂、L厂、N厂、O厂、P厂、Q厂、R厂尼群地平片的有关物质检查不符合规定，且杂质Ⅱ超标是造成我国尼群地平片有关物质超标的主要原因，因此有必要对杂质Ⅱ进行深入研究［5］.

2.5 2009年份的片剂有关物质比较分别取溶液制备项下的片剂供试品溶液（2009年样品），按上述色谱条件进样，记录色谱图，由图得出18个厂家2009年样品杂质Ⅰ的平均百分含量为1.12%，杂质Ⅱ的平均百分含量为6.13%，杂质Ⅲ的平均百分含量为1.64%.结果显示：同一厂家的样品，2009年份的样品经放置后，虽在避光条件下，杂质Ⅰ、杂质Ⅱ及杂质Ⅲ的含量较2011年份的同一厂家样品均有所增加，多数厂家的片剂有关物质不合格原因为杂质Ⅱ超标，但均未产生新的杂质，且杂质Ⅱ的超标是造成尼群地平片不合格样品出现的主要原因，所以有必要对未知杂质进行研究［6］.

2.6 LC-MS法解析未知杂质的结构

2.6.1 LC-MS条件 LC条件：phenomenex十八烷基硅烷健合硅胶色谱柱（250×4.6 mm），流动相乙腈－水（70∶30）.MS条件：电喷雾离子化负离子检测方式（ESI－）；质核比范围：100～500；去簇电压（EP）：－50 V；解簇电压（DP）：－41 V；碰撞能量（CE）：－25 eV［7］.尼群地平负离子扫描结果分析在负离子模式下，尼群地平的ESI一级扫描主要生成准分离离子峰［M＋H］－，准分子离子峰［M＋H］－值为m／z 359.2，选择性对m／z 359.2准分子离子峰［M＋H］－进行二级质谱分析，产生的主要碎片为m／z 121.9.

2.6 2 杂质Ⅱ的结构解析杂质Ⅱ的［M＋H］－准分子离子峰为m／z 345.0，说明杂质Ⅱ的相对分子质量为346.杂质Ⅱ主要的碎片离子为m／z 122.3和m／z 219.0.初步分析，其裂解途径与尼群地平及杂质Ⅰ相同.由以上分析，并结合合成工艺，可以得出最有可能的结构是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3－nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.这个杂质为尼群地平杂质B［8］.

2.6 3 杂质Ⅲ的结构解析杂质Ⅲ的［M＋H］－准分子离子峰为m／z 373，说明杂质Ⅲ的相对分子质量为374.0.杂质Ⅱ主要的碎片离子为m／z 121.2.初步分析，其裂解途径与尼群地平及杂质Ⅰ相同.由以上分析，并结合合成工艺，可以得出最有可能的结构是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3－nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.这个杂质为尼群地平杂质C.

3 讨论

经过初筛，得出结论，不同厂家的尼群地平原料药、尼群地平片剂有关物质不合格的原因均为单个杂质超标，即杂质Ⅱ，所以建议药典更科学的修订对杂质Ⅱ的限量规定，以达到安全有效用药的要求［9－10］.

本研究采用富集分离的方法收集有关物质，通过LC-MS－MS初步确定未知有关物质的分子量及其结构.得到杂质Ⅱ可能的结构是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3-nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.杂质Ⅲ最有可能的结构是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3-nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.本研究为尼群地平有关物质的进一步研究提供依据.

由于尼群地平对光不稳定，故本试验应在所有操作均应在避光条件下进行.

［1］马玉荣，孙婷，郭盈杉.HPLC法测定尼群地平片的含量［J］.药物分析杂志，2011，31（3）：574－575.

［2］杨敏智，蒋敏阳，陈国清.HPLC法测定尼群地平片的含量及有关物质［J］.中国药品标准，2004，5（2）：53－55.

［3］李彦博，陈林，刘军.钙拮抗剂的分类及在治疗高血压中的应用［J］.辽宁医学杂志，2001，15（2）：101－102.

［4］周刚，李娅萍，王伟，等.HPLC测定头孢西酮钠有关物质［J］.药物分析杂志，2011，31（11）：2135－2138.

［5］王佳苗.尼群地平胃漂浮缓释微球的研究［D］.沈阳：沈阳药科大学，2008.

［6］候海玲.钙通道阻滞剂尼群地平的研究概述［J］.北方药学，2014，11（11）：100.

［7］游本刚.尼群地平速释、缓释微丸的研制［D］.沈阳：沈阳药科大学，2004.

［8］杨春艳.尼群地平合成工艺改进［J］.内蒙古石油化工，2006（2）：40－42.

［9］张玉龙.尼群地平口腔崩解片的研究［D］.沈阳：沈阳药科大学，2006.

［10］孙莉.尼群地平片有关物质检查方法的比较与讨论［J］.中国现代药物应用，2012，6（16）：134－135.

R927