川贝母组培快繁实用技术

李 旦，谢忠利，孙举聪，古 旭，向建英

（西南林业大学云南生物多样性研究院，云南昆明 650224）

川贝母（Fritillaria cirrhosa）又名卷叶贝母，为百合科（Liliaceae）贝母属（Fritillaria）植物，生长于海拔3 200～4 500m高寒地区，土壤比较湿润的向阳山坡，主产于西藏南部至东部、云南西北部和四川西部。

川贝母以其地下鳞茎入药，是中医学常用的一味重要药用植物，因其良好的医疗效果，其市场需求量很大。但川贝母分布区广，种源多样，差异较大，随着中药产业的快速发展，各种传统单方和复方中药对川贝母的需求量逐年增大，而产业发展之初，几乎都是使用野生的川贝母资源，巨大的商业利益刺激下，林农户到野外天然环境中去采挖野生川贝母，造成川贝母生境的极大破坏，使得川贝母的供求矛盾加剧，野生资源已面临枯竭。

川贝母的人工扩繁有2种扩繁方式，第一种为有性繁殖，人工种植野生川贝母需生长3～4年才能收获，生长周期长，生产成本高，且川贝母种子繁殖系数低，发芽困难，严重制约人工栽培的发展，难以满足市场需求。第二种方式为无性繁殖，即川贝母的组培快繁技术，无性繁殖的方式可以缩短生长周期，降低成本，是市场化经营的发展趋势。

1 外植体的选择

植物材料取材部位和时期不同，组织培养的结果也不一样。川贝母组培快繁常选用川贝母新鲜鳞茎为外植体材料。

采集川贝母鳞茎的时间与再生小鳞茎的频率及数量也有密切的关系。出苗盛期采集的川贝母鳞茎诱导再生小鳞茎的频率为48.3%，开花盛期采集的川贝母鳞茎诱导再生小鳞茎的再生频率为15.9%。同时，出苗期的川贝母鳞茎培养2个周期后再生的小鳞茎数量上为原接种数的12.3倍。

2 无菌体系的建立

将川贝母鳞茎洗去表面泥土，用流动的水冲洗20min后，滤纸擦干，转移至超净工作台或无菌环境中；将鳞茎置于75%乙醇消毒30s，再用0.1%的升汞溶液浸泡8min，浸泡同时均匀的摇动，使鳞茎充分接触升汞溶液，然后，用无菌水冲洗3～5次，每次2min，灭菌好的鳞茎用解剖刀切割成0.5cm大小的块，接种于添加激素的MS培养基中，进行培养。

3 培养基和激素的选择

选择合适培养基是组织培养的重要环节，川贝母使用鳞茎为外植体进行组织扩繁的最佳培养基为MS培养基，在增殖和生根阶段使用1/2MS培养基。

川贝母的鳞茎诱导启动培养常用的激素有NAA、KT和BA。生长素和细胞分裂素配合使用时，川贝母外植体直接再生成小鳞茎；而当仅用生长素类激素时，常常是先形成愈伤组织，而后转入分化培养基上形成小鳞茎。

在生产上，可使用MS基本培养基，添加NAA 2.0mg/L和BA 0.5mg/L，附加蔗糖30 g/L，琼脂6 g/L，调节pH为 5.8，诱导川贝母鳞茎分化出不定芽；使用1/2MS基本培养基，添加NAA 1.0mg/L进行不定芽的增殖培养；成苗时，选用MS为基本培养基，添加1：1的细胞生长素和细胞分裂素即可；最后使用1/2MS基本培养基，0.1～0.3mg/L的NAA进行生根培养。从外植体诱导至最终生根，整个世代约2～3个月，不定芽的增殖周期为25d，增殖系数约为4.5。

4 培养条件

温度和光照对组培苗的生长相当重要，影响细胞增殖和器官分化。川贝母组织培养光照强度2 200lx，光照12h，暗培养12h。一般均采用20℃±1℃的散射光培养，培养温度较其他植物低。

5 展望

川贝母组培快繁技术大大缩短了育种周期，本技术的应用可以减轻对野生资源的过度依赖，从而更好地保护川贝母的野生资源；缓解川贝母资源紧缺问题；防止假冒替代品的现象；充分有效地利用川贝资源；还能通过组培快繁技术实现产业化、规模化、工厂化，更好地造福于人类。这也将大力促进地方经济发展，帮助调整农业产业结构，增加农民和地方财政收入；提高农业科技含量和农民素质，推动现代农业的发展；还有利于培植龙头企业，推进农业产业化经营；对实现农业可持续发展，推进社会主义新农村建设有着重要的意义。

[1] 王跃华，江明殊，何诗虹，等.川贝母组培苗快速繁殖研究[J].四川师范大学学报：自然科学版，2013，36（6）：941-944.

[2] 江明殊.高有效组分川贝母的组织培养与质量研究[D].四川：四川师范大学，2015.

[3] 郭伟珍，林艳，曹军合.平枝栒子的组培快繁技术[J].林业实用技术，2006，（10）：46.