番茄品种SSR指纹图谱的构建

尤 佳，王 晋，王溪桥，文朝慧，王军平

（甘肃出入境检验检疫局， 兰州730010）

番茄（Solanum lycopersicum L．）是我国的主栽蔬菜之一。随着种子产业的发展，植物新品种的保护变得越来越重要。在我国培育和推广新的优良品种是番茄的主要发展方向，因此亟需建立一套快捷、准确、方便的番茄品种鉴定技术方法。

如今DNA指纹图谱已成为准确鉴定品种的有力工具［1］，而SSR分子标记因其重复性好、呈共显性遗传等特点广泛应用于构建遗传图谱［2－4］、分析遗传多样性［5－7］、筛选目标性状基因标记［8－9］等方面。

本试验采用SSR标记技术对21份番茄品种构建指纹图谱，拟开发适用于番茄品种分子鉴定的SSR技术体系，为今后进行番茄品种DUS测试及真实性鉴定奠定基础。

1 材料与方法

1．1 试验材料

选7个番茄品种及其亲本共21份材料作为试验材料，每个杂交种的前2份材料为其父母本（见表1）。2014年将试验材料种植于试验田，采集叶片并进行田间纯度统计。另外，随机取T 223和T 255的F1材料100粒于培养皿内的无菌滤纸上在室内催芽，7d后取全株幼苗提取DNA。

表1 供试番茄材料

1．2 处理方法

1．2．1 基因组 DNA 提取

田间取幼嫩叶片，采用CTAB法［10］提取基因组DNA，用紫外分光光度计法检测其质量和浓度，稀释至50ng／μL，－20℃下保存备用。

表2 SSR引物序列

1．2．2 SSR分析

试验所用SSR引物序列来自公开发表的文献［11－13］，初步选用50对多态性好的引物对21种材料进行扩增分析，从中选取多态性高、条带清晰稳定、重复性好的用于构建指纹图谱（见表2）。SSR扩增体系为12．5μL（见表3）。SSR扩增程序（见表4）。

表3 12．5μL的扩增反应体系

表4 扩增程序

SSR扩增产物用8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染显色后对结果进行记录并分析。

1．2．3 农艺性状鉴定

于田间统计种子品种纯度。

1．2．4 数据统计分析

以二进制和基因型记录SSR分析结果，扩增条带在相同迁移率位置上，有带记为1，无带记为0。

2 结果与分析

2．1 指纹图谱构建

通过50对SSR引物筛选出多态性高、扩增带型稳定、清晰及重复性好的T 23、T 34和 T 49三对引物对21份番茄材料构建指纹图谱（图1）。电泳结果显示，21份番茄材料，不能单独用1对SSR引物区分，需要多对引物组合。引物T 23可以区分12份材料，再结合引物T 34可区分18份材料，最后结合引物T 49可将全部材料一一鉴别。以此3对引物组合产生的标记信息，以“1”和“0”分别表示扩增条带的有无，将3对引物组合产生的多态性位点依次排序，建立品种计算机化的数字DNA指纹（表5）。

2．2 杂交种纯度鉴定

表5 7个番茄品种及其亲本的SSR指纹图谱

图1 3个SSR引物对7个番茄杂交种及其亲本的扩增

为进一步验证试验结果的可靠性，选择材料T 223和T 255的F1各100粒种子，进行种子纯度检测，统计带型结果显示种子纯度分别为93．22%和93．75%，与田间性状统计结果93．8%和93．8%相符。图2、图3为部分扩增图。

3 讨 论

图2 SSR特征引物T 34对番茄品种T 255F1的纯度鉴定（1～36）

相比其它分子标记技术，SSR标记技术具有多态性高、易检测、共显性和特异性强等特点［14］。因此，SSR技术已广泛应用于马铃薯［15］、油菜［16］、大白菜［17］等多种作物的指纹图谱构建。本研究从50对多态性较好的番茄SSR引物中选出3对扩增稳定、条带清晰的引物，成功构建了T 223、T 255等7个番茄品种的指纹图谱，为这些品种在分子方面快速、准确的鉴定奠定了基础。利用引物T 34对T 223、T 255品种的杂交种进行分子鉴定，纯度分别为93．22%和93．75%，与田间性状统计结果（93．8%和93．8%）相符。表明可利用本研究构建的指纹图谱进行番茄品种纯度的快速鉴定。

国内用于番茄育种的亲本材料遗传变异幅度小，很多国内的番茄品种不易找到多态性的差异。目前，开展番茄品种纯度鉴定工作首先要自主开发更多的SSR标记。

本研究利用SSR分子标记技术得到T 23、T 34、T 49共3对引物，构建了21份材料的指纹图谱，实现了对这些材料的分子鉴定，为SSR技术在番茄种子纯度鉴定中的应用和推广打下了坚实的基础。

图3 SSR特征引物T 34对番茄品种T 223F1的纯度鉴定（1～36）

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