乳酸左氧氟沙星注射液有关物质测定的不确定度分析

乳酸左氧氟沙星注射液有关物质测定的不确定度分析

高峰1，周维利2，王维剑2，杜亮3

(1.莱芜市食品药品检验检测中心，山东 莱芜 271100；山东省食品药品检验研究院，山东 济南 250101；

3.济南军区联勤部疾病预防控制中心，山东 济南 250014)

摘要：目的建立乳酸左氧氟沙星注射液有关物质测定的不确定度评定方法。方法建立数学模型，对含量测定过程中各影响因素进行分析评估。结果通过计算各变量的不确定度，合成不确定度，最终得出测定结果的扩展不确定度。结论该评定方法适用于HPLC法测定乳酸左氧氟沙星注射液有关物质的不确定度评定。

关键词：左氧氟沙星；有关物质；不确定度

基金项目：国家科技重大专项课题-重大新药创制(No.2009ZX09313-023)

作者简介：高峰，男，研究方向：食品药品检验，E-mail:lwgaofeng@126.com

通讯作者：杜亮，女，研究方向：药学,Tel:0531-81216507；E-mail:michael19790623@hotmail.com

中图分类号：R927.1文献标识码：A

Evaluation of uncertainty for the related substances test of Levofloxacin Lactate Injection

GAOFeng1,ZHOUWei-li2，WANGWei-jian2，DULiang3

(1.LaiwuInstituteforFoodandDrugControl,Laiwu271100,China;2.ShandongInstitutefor

FoodandDrugControl,Jinan250101,China;3.CenterforDiseasePreventionandControl

ofJinanMilitaryCommand,Jinan250014,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method of uncertainty evaluation for the related substances test of Levofloxacin Lactate Injection.MethodsThe uncertainty was evaluated by an established mathematical model and the analysis of various factors affecting sample detection.ResultsEach componet of uncertainty was calculated and then the combined uncertainty was finally obtained by synthesizing the uncertainties of various component variables.ConclusionThis method was appropriate to be used in the uncertainty evaluation for the related substances test of Levofloxacin Lactate Injection.

Key words:Levofloxacin；Related substances；Uncertainty

药品检验的一项重要任务就是对药品中特定成分的赋值，所赋值的准确性和可靠性直接影响到对药品质量的评价。因而当报告测量结果时,必须对其质量给出定量的说明,以确定测量结果的可信程度。测量不确定度就是对测量结果质量的定量表征，测量结果的可用性很大程度上取决于其不确定度的大小。所以，测量结果必须附有不确定度说明才是完整并有意义的[1]。

本文以乳酸左氧氟沙星(Levofloxacin Lactate)注射液为例，根据国家质量技术监督局批准发布的JJF1059—1999计量技术规范《测量不确定度评定与表示》[2]，并参考有关文献[3～5]，建立其有关物质测定的不确定度评定方法，对实验过程中各影响因素进行分析评估，最终计算得出测定结果不确定度值。

1仪器与试药

1.1仪器Agilent 1200高效液相色谱仪(检定证书给出不确定度0.49%，K=3);BP211D电子天平(d=0.01 mg/0.1 mg)。

1.2供试品乳酸左氧氟沙星注射液(鲁抗辰欣制药有限责任公司，批号：09051152011)；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯；玻璃器皿均为A级。

2方法

2.1色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；己烷磺酸钠溶液[取己烷磺酸钠0.98 g，加磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.8 g，加水1 000 mL，加0.05 mol·L-1磷酸500 mL，使pH值为2.4)1 000 mL]-甲醇(3∶1)为流动相；检测波长：293 nm ；进样量：10 μL； 流速： 1.0 mL·min-1；柱温：40 ℃。

2.2供试品溶液的配制精密量取本品适量，加水稀释制成0.5 mg·mL-1的溶液。

2.3对照溶液的配制精密量取供试品溶液5 mL，置500 mL量瓶中，加水溶解稀释至刻度。

3.1数学模型

X：有关物质含量(%);At：供试品杂质峰面积;As：对照峰面积;Vs：对照溶液稀释倍数。

由供试品溶液的制备过程可知Vs=500 mL/5 mL=100,实验测得As=163.61，At=16.75,则灵敏系数为：

3.2不确定度分量来源的分析 (因果图)

图1　不确定度的来源分析图

3.3不确定度的量化分析各不确定度分量的计算结果见表1。

表1　相对标准不确定度一览表

3.3.1对照溶液稀释过程中玻璃量器引入的相对标准不确定度urel(Vs)：玻璃量器引入的相对标准不确定度urel(V)。

u(Vs) =urel(Vs)×Vs= 0.185

3.3.2对照峰面积引起的相对标准不确定度urel(As)取对照溶液连续进样5次，计算不确定度，峰面积结果见表2。

表2　对照品溶液测定结果

高效液相色谱仪引入的相对标准不确定度为：urel(A)=检定证书给出的不确定度/K=0.49%/3 =0.001 63(K=3)。

u(As)=urel(As)×As=0.423 75

3.3.3供试品峰面积引起的相对标准不确定度urel(At)取对照溶液连续进样5次，计算不确定度，峰面积结果见表3。

表3　供试品溶液侧定结果

高校液相色谱仪引入的相对标准不确定度为：urel(A)=检定证书给出的不确定度/K=0.49%/3 =0.001 63 (K=3)。

u(At)=urel(At)×At=0.086 10

3.3.4合成标准不确定度供试品溶液中杂质峰面积、对照峰面积、对照溶液稀释体积等的不确定度相互独立，故将上述数据合成得合成相对标准不确定度u(X)为

3.4扩展不确定度计算得盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的含量的测定结果X=0.10%，测量结果的合成标准不确定度u(X)=0.000 61%。按惯例，若取包含因子K=2(95%的置信区间)，得测量结果的扩展不确定度：

U=K×u(X)=0.002%

3.5测量结果的表示供试品盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的含量可表示为：X=0.10%±0.002%，K=2(95%的置信区间)。

4讨论

本次检测供试品溶液的稀释体积不参与计算，所以供试品溶液稀释过程对测定结果的不确定度中不会产生影响，并且由于实验方法操作过程简单，仅一步稀释过程，从而较少了不确定度的影响因素，因此本方法的不确定度评估值较低。

灵敏系数反映了该输入量标准不确定度对输出量不确定度贡献的灵敏程度，而且标准不确定度只有乘以该灵敏系数才能构成一个不确定度分量，即和输出量有相同的单位，因此在不确定度评定过程中灵敏系数不能被忽视。

参考文献：

[1]粟晓黎，李冠民，金少鸿.药品检验一般检测项目不确定度评定研究-1.B类评定[J].药物分析杂志,2005,25 (6):699-705.

[2]中国实验室国家认可委员会.CNAL检测与校准实验室认可准则[S].ISO/IEC17025:2005，2005.

[3]国家质量技术监督局.测量不确定度评定与表示[S].中华人民共和国国家计量技术规范JJF1059-1999，1999.

[4]王维剑,凌霄,谭会洁.HPLC法测定中药中掺入双氯芬酸钠含量的不确定度评定[J].药物分析杂志,2009,29 (1):130-133.

[5]王维剑,杨娜，谢元超.HPLC法标定头孢呋辛对照品含量的不确定度分析[J].药物分析杂志,2009,29 (5):864-867.