胃癌组织中p53与Ki-67蛋白的表达变化及意义

胃癌组织中p53与Ki-67蛋白的表达变化及意义

林丹丹，张一桥

(武汉大学人民医院，武汉 430060)

摘要：目的观察胃癌组织中p53与Ki-67的表达变化，并探讨其意义。方法胃癌组织样本取自159例胃腺癌患者，另取组织活检为正常胃黏膜组织标本65例份，均经病理检查证实诊断。采用免疫组化法检测癌组织及正常胃黏膜组织中p53与Ki-67蛋白表达，采用Pearson法分析胃癌组织中p53与Ki-67蛋白表达的相关性。结果159例胃癌组织中p53蛋白表达阳性78例，阳性表达率为49.06%；Ki-67蛋白表达阳性110例，阳性表达率为69.18%。而在正常胃黏膜组织中未见p53、Ki-67蛋白表达。肿瘤直径≥5 cm、高分化、有淋巴结转移的胃癌组织中p53蛋白阳性表达率显著高于肿瘤直径<5 cm、低中分化、无淋巴结转移的胃癌组织(P均<0.05)。高分化、有淋巴结转移的胃癌组织中Ki-67蛋白阳性表达率显著高于低中分化、无淋巴结转移的胃癌组织(P均<0.05)。癌组织中p53与Ki-67蛋白表达呈正相关(r=0.724，P<0.05)。结论 胃癌组织中p53蛋白与Ki-67蛋白表达均升高，二者可能协同参与了胃癌的发生、发展。

关键词：胃癌；p53蛋白；Ki-67蛋白；抑癌基因

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.017

中图分类号：R735.2 文献标志码：B

收稿日期：(2015-07-10)

胃癌的发生发展与细胞增殖、部分原癌基因激活、凋亡动力学改变、抑癌基因失活或突变等有关。抑癌基因亦称为抗癌基因，正常时起抑制细胞增殖和肿瘤发生的作用[1]。p53是一种抑癌基因，在50%以上恶性肿瘤中会出现该基因突变[2]。Ki-67是一种核蛋白，与核糖体RNA转录有关。有研究结果证实Ki-67与许多肿瘤分化程度、浸润、转移及预后密切相关[3]。2012年7月～2015年2月，我们采用免疫组化法对胃癌组织中p53蛋白与Ki-67蛋白表达进行检测，探讨其与胃癌发生、发展的关系。

1资料与方法

1.1临床资料胃癌组织样本取自本院收治的159例胃腺癌患者，另取组织活检为正常胃黏膜组织标本65例份，均经病理检查证实诊断。159例胃癌患者中男86例、女73例，年龄<60岁29例，≥60岁95例。肿瘤直径<5 cm 124例，≥5 cm 35例；病理学分级为低中分化107例，高分化52例；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期77例，Ⅲ、Ⅳ期82例；有淋巴结转移102例，无淋巴结转移57例。患者均未给予放化疗治疗。

1.2p53与Ki-67蛋白表达检测均采用免疫组化法。标本用10%甲醛溶液固定、石蜡包埋，切片厚5 μm，二甲苯脱蜡、水化、PBS冲洗、修复、PBS冲洗、过氧化氢温孵育10 min，PBS冲洗，滴加血清工作液，甩干，滴加鼠抗p53单克隆或Ki-67单克隆工作液，4 ℃过夜，PBS冲洗，滴加二抗，37 ℃、15 min，PBS冲洗，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37 ℃、15 min，PBS冲洗，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。高倍镜下观察取5个视野，每个视野计数细胞100个。染色强度分为无染色计为0分，淡黄色计为1分，棕黄色计为2分，棕褐色计为3分。阳性细胞百分比≤10%计为0分，11%～25%计为1分，26%～50%计为2分，51%～75%计为3分，>75%计为4分。二者分数相加，0～1分为阴性，>1分为阳性。

1.3统计学方法采用SPSS18.0统计软件。阳性率比较采用χ2检验，采用Pearson法分析胃癌组织中p53与Ki-67蛋白表达的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1胃癌组织与正常胃黏膜组织中p53、Ki-67蛋白表达比较胃癌组织中p53、Ki-67的阳性细胞均定位于细胞核内，呈棕黄色或棕褐色。159例胃腺癌患者癌组织中p53蛋白表达阳性78例，阳性表达率为49.06%；Ki-67蛋白表达阳性110例，阳性表达率为69.18%。而在正常胃黏膜组织中未见p53、Ki-67蛋白表达。胃癌组织中p53、Ki-67蛋白阳性表达率明显高于正常胃黏膜组织(P均<0.05)。

2.2胃癌组织中p53、Ki-67蛋白阳性表达与临床病理参数的关系肿瘤直径≥5 cm、高分化、有淋巴结转移的胃癌组织中p53蛋白阳性表达率显著高于肿瘤直径<5 cm、低中分化、无淋巴结转移的胃癌组织(P均<0.05)。高分化、有淋巴结转移的胃癌组织中Ki-67蛋白阳性表达率显著高于低中分化、无淋巴结转移的胃癌组织(P均<0.05)。见表1。

表1　 胃腺癌组织中p53、Ki-67蛋白阳性表达

2.3胃腺癌组织中p53与Ki-67蛋白阳性表达的关系胃腺癌组织中p53与Ki-67蛋白表达呈正相关(r=0.724，P<0.05)。

3讨论

胃癌的发病率一直居高不下，是临床常见的恶性肿瘤，其发生发展是多基因、多阶段的发展过程。癌基因和抑癌基因对细胞的生长发育和终末分化有正负调控作用。抑癌基因亦称为抗癌基因，正常时起抑制细胞增殖和肿瘤发生的作用[4]。早在1969年，哈里斯将癌细胞与同种正常成纤维细胞融合，所获杂种细胞的后代只要保留某些正常亲本染色体时就可表现为正常表型，但随着染色体的丢失又可重新出现恶变细胞。

p53是一种抑癌基因，该基因编码一种相对分子质量为53 kD的蛋白质，命名为p53[5]。正常情况下对细胞分裂起减慢或监视的作用，50%以上恶性肿瘤中会出现该基因突变，因此检测胃癌组织中p53的基因突变率对研究胃癌发生发展有重要意义。p53基因的失活对肿瘤形成起重要作用。p53基因突变后，由于其空间构象发生改变，失去了对细胞生长、凋亡和DNA 修复的调控作用，p53基因由抑癌基因转变为癌基因[6～8]。本研究采用免疫组化法对胃癌组织中的p53蛋白进行检测，结果显示胃癌组织中p53蛋白阳性表达率为49.06%，而在正常胃黏膜组织中未见p53蛋白表达。此与杨玲娣等[9]结果一致。本研究中肿瘤直径≥5 cm、高分化、有淋巴结转移的胃癌组织中p53蛋白阳性表达率升高。而吕旭等[10]研究认为胃癌组织中p53、Ki-67表达与胃癌是否伴有淋巴结转移无相关性，具体原因尚需进一步探讨。但刘伟等[11]研究结果显示，高中分化胃癌p53和Ki-67蛋白表达显著高于低分化胃癌，p53蛋白在胃食管连接部和无远处转移的胃癌中表达显著高于胃部和有远处转移的胃癌，Ki-67蛋白表达随着浸润深度的增加而增高,有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者，说明p53参与了胃癌侵袭及转移过程。Ki-67是一种核蛋白，与核糖体RNA转录有关。胡海霞等[12]研究结果显示,Ki-67参与胃癌的发生发展，并可作为判断胃癌恶性程度及评估预后的指标。本研究中Ki-67蛋白阳性表达率为69.18%，在正常胃黏膜组织中未见Ki-67蛋白表达，且高分化、有淋巴结转移的胃癌组织中Ki-67蛋白阳性表达率显著高于低中分化、无淋巴结转移的胃癌组织。可见Ki-67蛋白参与了胃癌的侵袭及转移过程。经Pearson相关系数分析发现，胃癌组织中p53与Ki-67蛋白表达呈正相关。可见，p53、Ki-67可能协同参与了胃癌的发生、发展。

参考文献：

[1] 韩冰,赵洁,周娟.Rb基因失活与肿瘤发生[J]. 菏泽医学专科学校学报,2009,21(2):67-68.

[2] Vousden KH, Prives C. Blinded by the light: the growing com plexity of p53[J]. Cell, 2009,137(3):413-431.

[3] 柏鉴东，韩国新，周玲．胃癌及癌前病变p53 蛋白及Ki-67 抗原检测的临床意义[J]．山东医药，2007，47(22):46-47．

[4] 陈娟, 李东石,余英豪,等.Her-2蛋白在胃癌中的表达及其临床意义[J]．世界华人消化杂志,2010,18(13):1375-1379.

[5] Lopez-Saez JB， Gómez-Biondi V， Santamaría-Rodriguez G． Concurrent overexpression of serum p53 mutation related with Helicobacter pylori infection[J]． J Exp Clin Cancer Res， 2010，29:65．

[6] Wiman KG. Pharmacological reactivation of mutant p53: from protein structure to the cancer patient[J]. Oncogene, 2010,29 (30):4245-4252.

[7] 蒙健军,蓝东,韦敏怡.p73、p53蛋白在胃癌中的表达及意义[J].广西医学,2010,32(5): 560-564.

[8] Chari NS, Pinaire NL, Thorpe L, et al. The p53 tumor suppressor network in cancer and the therapeutic modulation of cell death[J]. Apoptosis, 2009,14(4):336-347.

[9] 杨玲娣，景丽，张建中，等.Notch-1 与p53、Ki-67在不同生物学行为胃癌中的表达[J]. 宁夏医学杂志,2015,37(1):22-24.

[10] 吕旭，姜叶娟，王香，等.p53与Ki-67在胃癌组织中表达与淋巴转移的关系[J].中华疾病控制杂志，2015，19(4)：407-410.

[11] 刘伟,余英豪,欧阳学农,等.p53和Ki-67在胃癌中的表达及其临床意义[J].世界华人消化杂志，2011，19(4):367-373.

[12] 胡海霞，黄勇.Ki-67、p53 蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义[J].解放军医药杂志，2012，24(4)：9-11.