金标法与CLEIA联合应用提高HBsAg检测的准确性

金标法与CLEIA联合应用提高HBsAg检测的准确性

王 科，陈 睿，胡恩赑，王 树

目的 观察金标法与化学发光酶免分析(CLEIA)一步法联合应用，消除CLEIA检测HBsAg假低值结果。方法 CLEIA检测出HBsAg阳性的标本用金标法筛选出质控线明显低于检测线的10例标本，再用纯水做稀释剂稀释原标本血清，用CLEIA法检测稀释后的结果乘以稀释倍数作为最终HBsAg结果。结果 经筛选的10例标本经稀释后结果明显高于原倍检测结果。结论 金标法能够筛选CLEIA法中钩状效应的标本，用纯水作为稀释剂稀释原标本能很好的消除钩状效应带来的假低值，提高科美Chemclin 600检测HBsAg的准确性。

乙型肝炎表面抗原;金标法;化学发光酶免分析;钩状效应;假低值;稀释

HBsAg是HBV感染后较早出现在血清中的抗原，被认为是病毒感染的标志，受到临床医生和人们较高的重视。以科美Chemclin 600为代表的化学发光酶联免疫分析(CLEIA)方法，使得人们对两对半指标有了量化认识，采用一步法检测HBsAg，大大缩短了检测时间，提高工作效率。在免疫学中，无论是定性还是定量检测，采用一步法中都存在影响最终结果的主要因素之一———钩状效应。我们对金标法与CLEIA联合应用，消除降低钩状效应带来的假低值结果进行了观察，旨在提高科美Chemclin 600对HBsAg检测的准确性。

1 资料与方法

1．1资料 2014年9月18日－2014年11月3日免疫室日常工作期间，科美Chemclin 600检测出HBsAg阳性标本，再用金标试纸条检测对应标本的血清，在规定时间内，查看结果，在金标试纸条上质控线明显低于检测线的标本共10例。

1．2方法 仪器及试剂: (1)仪器:北京科美Chemclin 600。(2)试剂:化学发光试剂为科美Chemclin 600配套试剂，金标

对照组出现切口红肿13例，发生率为28．89%，切口感染6例，发生率13．33%，切口愈合时间为(12．36±4．27)d;观察组出现切口红肿6例，发生率为13．33%，切口感染1例，发生率为2．20%，切口愈合时间(7．26±3．86)d。切口感染率2组比较，观察组明显低于对照组(P＜0. 05)，观察组在愈合时间上明显较对照组缩短(P＜0．05)。

表1 切口感染的发生情况及切口愈合时间比较(珋x±s)

3 讨论

急性阑尾炎是普通外科较为常见的一种急腹症，发病原因多为细菌入侵、阑尾官腔阻塞等[3]。手术切除阑尾是目前认为最有效的治疗方法，但术后切口感染发生率较高，尤其是急性坏疽穿孔性阑尾炎合并腹膜炎者术后切口感染发生率更高[4]，这一直是困扰普外科医生的难题，给医患双方增加了一定的心理压力。造成阑尾炎术后切口感染的原因较多，归纳起来有以下几个方面: (1)患者年龄、腹壁脂肪厚度，基础疾病的情况如糖尿病患者，贫血等。(2)阑尾炎病理类型，腹腔感染程度，阑尾炎明确诊断后至手术时间。(3)术中切口是否进行有效的保护则是切口感染的重要因素，合适的手术切口，合理使用电刀，确切止血等娴熟手术技能均可减少切口感染的发生。(4)对于感染重的阑尾炎，腹腔有脓性渗液时应用生理盐水晒布蘸尽，或者冲洗腹腔，并放置腹腔引流管，保持引流管通畅，术后根据情况拔除。(5)手术操作时间过长，缝合创面时没有进行彻底冲洗，有效的引流，手术局部组织缺血再灌注损伤加剧，减少局部组织的抗菌能力，由于长时间暴露，使周围的空气和手术切口毛囊内细菌进入到手术切口，从而增加手术切口污染的机会。

针对上述切口感染的原因，结合临床工作中的实践经验，在经腹阑尾炎术后皮下放置自制负压引流器(注射器负压连接套管针)进行引流，其操作简单易行，留置针不易打折，在持续负压的作用下，可有效引流组织渗液、渗血，引流效果好。而皮下埋置的静脉输液针头很细，长时间包埋无明显异物感及排斥反应，可持续引流，且体积小，重量轻，对患者围手术期的生活影响小。本方法也同样适用于其它疾患可能有空腔及皮下积液创面中，可有效降低切口感染率，减少或避免因术后切口感染带来的躯体与精神痛苦，减轻患者的经济负担，在切口感染防治方法具有一定的实际意义，值得临床推广。

[1]吴 养，杨雪英，吴春辉，等．外科手术切口感染调查及对策[J]．中华医院感染学杂志，2006，16(7):758-760．

[2]中华人民共和国卫生部．医院感染诊断标准(试行)[S]．北京:中华人民共和国卫生部，2001:10-12．

[3]Vincent L，Wan CC，Hin YL，et al．Diagnostic power of various computed tomography signs in diagnosing acute appendicitis[J]．Clin imaging，2012，36(1):29-34．

[4]吴阶平，裘法祖．黄家驷外科学[M]．第6版．北京:人民卫生出版社，1999:1151-1152．试纸条为杭州艾博生物医药有限公司提供，稀释剂为杭州惠邦净水设备有限公司HB－RO/120型反渗透纯水机制造的纯水。操作严格按SOP要求进行。采用科美Chemclin 600化学发光酶免分析(chemiluminescent enzyme immuneassay，CLEIA)一步法对期间的标本进行初检。对于HBsAg阳性的标本用金标试纸条复测，筛选出金标试纸条上质控线明显低于检测线的标本(见图1)，再用纯水倍比稀释对应标本，选择连续稀释倍数中检测线和质控线相当的稀释倍数作为最适稀释倍数(见图2)再在科美Chemclin 600仪器上检测HBsAg。稀释后的结果乘以稀释倍数为最终样本HBsAg结果。

图1 金标法筛选标本稀释前后对比图

图2 连续稀释标本金标法测定结果

2 结果

240例HBsAg阳性标本中有10例出现假低值，占4. 17%。10例复检标本稀释后结果及两对半模式，见表1。

表1 10例筛选HBsAg阳性标本稀释前后结果及两对半模式(ng/ml)

3 讨论

在10例阳性标本中出现的经不同稀释倍数后比稀释前浓度明显高出很多，差异很大，即出现假低值现象，分析原因包括: (1)标本中的HBsAg含量很高时，标本中的HBsAg分别与酶标抗体和固相抗体形成免疫复合物，不形成“抗原－抗体－酶标抗体”夹心复合物，即钩状效应(Hook Effect)，导致出现假低值，严重时甚至可能出现假阴性的结果[1]。(2)加样不足:标本/酶标试剂吸样过程中吸到气泡，导致只形成少量的夹心复合物。(3)固相抗体包被不足，或包被板打开放置时间过长失效，也无法形成足量的夹心复合物。

在出现假低值的这10例中，HBsAg与前S1抗原同时出现阳性值，并且伴HBeAg或HBeAb其中一个指标出现。其中两例出现1，3，S1，其HBcAb的值接近临界值，可能是急性感染期，HBcAg形成量少，HBcAb才产生。

在ELISA二步法检测中，对于高浓度的HBsAg先与包被的固相抗体结合，经洗涤后再与酶标抗体结合而形成夹心复合物，从而有效的避免了钩状效应。但二步法的温育时间增加一倍，从而工作效率大大降低;同时因二步法灵敏度不及一步法，容易造成假阴性，低浓度的HBsAg漏检。

由于胶体金试带法设计特点，加样区的HBsAg在前进过程中先与金标垫上的金标单抗结合，形成金标单抗－HBsAg结合物，在检测区与HBsAg对应的已知特异性抗体结合形成金标单抗－HBsAg－特异性抗体复合物显色，未结合多余的金标单抗随着液体前行至质控区，与此区的金标二抗结合形成金标单抗－二抗结合物显色。整个过程液体是单向缓慢层析，所以在检测区抗原抗体结合会达到完全饱和状态，色带的深浅与待检HBsAg含量成正比，没有ELISA中的钩状效应。

有资料显示，GICA法(胶体金免疫试带法)与ELISA在检测HBsAg方面有较好的互补性[2]，和本实验有着高度一致。在选择稀释剂上，有报道生理盐水在一步法可造成聚苯乙烯非特异性吸附，引起假性增高，推荐使用含0．05%的吐温－20 (Tween－20)生理盐水或含1%小牛血清白蛋白和0. 05%吐温－20的磷酸盐缓冲液(1% BSA－PBST)作为稀释剂[3]，本次实验中采用纯水作为稀释剂，金标法与稀释后的高浓度HBsAg用科美Chem－clin 600检测联合应用，能有效的消除钩状效应，至于纯水作为稀释剂在科美Chemclin600上有没有其他影响测定过程，有待后续研究。

[1]郑怀亮，韩 松．临床检验指南[M]．北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1994:4-18．

[2]杨明胜，吴 英．胶体金免疫试带法与ELISA法检测HBsAg的互补性[J]．现代检验医学杂志，2003，18(2):25-26．

[3]李 波，张莲玉，张建桃，等．稀释剂在判断乙肝病毒表面抗原钩状效应中的作用[J]．中西医结合肝病杂志，2003，13(1):36．

R512. 62

A

1008-7044(2015)04-0363-02

10．14126/j．cnki．1008－7044．2015．04．025

安徽省蚌埠市第三人民医院检验科，233000

王 科(1984－)，男，安徽蚌埠市人，检验师，大学。

2015-01-06)

2015-01-30)