EB病毒DNA载量与儿童肝肾损害的研究*

李 迪，李 艳，彭 锐(武汉大学人民医院检验医学中心，武汉 430060)

EB病毒(epstein-barr virus，EBV)，又称人类疱疹病毒4型(HHV-4)，主要经呼吸道传播。在儿童中，被EB病毒感染的患儿起病多隐匿，症状轻，大多预后良好。但EB病毒也可引起肝、肾等各组织器官的损害，并产生一系列的临床表现，特别是当肝、肾功能明显异常时，患儿常以肝病、肾病前来就诊，这不仅会增加临床医生对疾病诊断的难度和误诊率，也会耽误患儿的治疗，影响预后[1]。本文旨在对EB病毒相关性肝、肾损害进行研究，探究EB病毒的DNA载量与肝肾损害的关系，协助临床做出更准确的诊断。

1 材料与方法

1.1 研究对象 在2016年4月～7月收入武汉大学人民医院的患儿中，收集EB病毒DNA载量>5.00E+3的患儿147例，其中男性87例，女性60例，年龄1～12岁，平均年龄3.64±2.45。健康对照组80例，男性49例，女性31例，年龄1～12岁，平均年龄3.59±2.86岁。患者组与对照组之间性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)。

1.1.1 纳入标准：①经PCR检测后DNA载量>5.00E+3者；②年龄1月～12岁。

1.1.2 排除标准：①细菌、病毒、支原体等其他病原体感染者；②近期服用过有损于肝、肾功能药物者；③遗传代谢性疾病；④相关的先天性疾病，如胆道闭锁；⑤其他肝、肾疾病。

1.2 试剂与仪器 患儿入院后抽取5 ml静脉血，置于EDTA抗凝管内，室温下平衡30 min后3 000 r/min离心10 min，取上清液。使用美国ABI 9700型PCR仪及其配套试剂检测血清中EB病毒DNA载量。采用西门子advia2400全自动生化分析仪及配套试剂检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、尿素(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)水平。

1.3 方法 按DNA载量的高低将患儿分为低载量组(5.00E+3～5.00E+4)80例，中载量组(5.00E+4～5.00E+5)41例，高载量组(>5.00E+5)26例；按年龄将EB病毒阳性(>5.00E+3为阳性)患儿分为低年龄组(1月～4岁)80例、中年龄组(5～8岁)41例、大年龄组(9～12岁)26例，各年龄组性别差异无统计学意义(P=0.509)。按性别将EB病毒阳性患儿分为男患儿组87例、女患儿组60例，两组间年龄差异无统计学意义(P=0.191)。以ALT>40 U/L和(或)AST>35 U/L为界判为肝功能异常，将EB病毒阳性患儿分为肝功能正常组99例和肝功能异常组48例；以β2-微球蛋白>2.5 μg/L为界，将EB病毒阳性患儿分为肾功能正常组133例和肾功能异常组14例。

2 结果

2.1 常规生化结果的比较 Mann-WhitneyU检验比较患者组和对照组的ALB，GLB，BUN，Cr，UA，结果见表1。

表1 各项生化指标的对比

2.2 EB病毒DNA载量与肝肾功能的关系 Pearson卡方检验比较低载量组、中载量组、高载量组肝肾损害率，结果见表2。

表2 EB病毒DNA载量与肝肾功能损伤的关系

注：低、中、高载量组，肝损害率分别为17.50%，43.90%，61.54，卡方值为20.58，P=0.000；肾损害率分别为3.75%，12.2%，37.5%，卡方值为8.38，P=0.015。

2.3 不同年龄组DNA载量的比较 Man-WhitneyU检验比较得出，低年龄组DNA载量(4.93±0.75)高于中年龄组(4.60±0.83)和大年龄组(4.63±0.84)，差异具有统计学意义(Z=-2.73，P=0.006)。中年龄组与大年龄组差异无统计学意义(Z=-0.27，P=0.788)。

2.4 不同性别组的DNA载量比较 两独立样本t检验比较显示，女患儿组DNA载量对数(4.55±0.62)低于男患儿组DNA载量对数(4.93±0.86)，差异具有统计学意义(Z=-2.42，P=0.015)。

3 讨论

EB病毒是一种以人为感染对象的疱疹病毒，故称之为人类疱疹病毒4型(HHV-4)，也是首个被报道与肿瘤发生有关的病毒，世界范围内约95%的人血清学阳性[2]。EBV-DNA定量是诊断EB病毒感染较好的方法[3]。临床上，首次感染EB病毒的患儿常隐匿起病，多为自限性；少部分患儿EB病毒可持续存在并发展为慢性活动性EB病毒感染，临床上多表现为持续或反复的传染性单核细胞增多症。据报道，在慢性活动性EB病毒感染中，EB病毒可通过各种机制刺激宿主细胞，使CD4+/CD8+比值下降，并产生细胞毒性T淋巴细胞反应而损害肝脏，长期的肝细胞破坏与再生成为肝癌的病理基础。曲熙波等[4]发现肝脏是EB病毒的主要靶器官之一，与其他病毒引起的肝炎相比，其临床表现虽相似，但更为严重。EB病毒相关肾损害并不少见，在EB病毒感染的患儿中发病率约10%，病理类型以间质性肾炎多见，某些特定类型的肾损害也与其有关，如膜增生性肾小球肾炎。Joanne等[5]利用原位PCR，在EB病毒相关肾损害患儿的近端小管上皮细胞中检测到EB病毒DNA，并利用免疫组化检测到EB病毒CD21受体。张曙冬等[6]发现EB病毒感染肝损害及严重程度与外周血中T细胞亚群有一定相关性。

本文研究的EB病毒感染的147例患儿中，肝损害48例，占32.65%；肾损害14例，占9.52%。肝、肾损害的发生率与EB病毒DNA载量有关，并随着DNA载量的升高而升高。结合已有的研究推测可能与Th1/Th2比例失衡及细胞毒性T淋巴细胞过度激活有关。提示高EB病毒DNA载量阳性的患儿，有发生肝肾损害的风险；而低DNA载量时若有肝损害应首先考虑由其他因素造成，这对于疾病的诊断具有指导意义。EB病毒DNA载量随着年龄的升高而降低，差异具有统计学意义，表明随着机体的发育和免疫系统的不断完善，其抵抗外来病原体的能力明显增强。而4～8岁组与9～12岁组相比DNA载量差异无统计学意义，提示一次感染可获得较强免疫力。不同性别对EB病毒的抵抗力不同，男患儿感染EB病毒时其DNA载量比女患儿高，差异具有统计学意义。提示男性儿童对EB病毒的抵抗力更低，病毒复制更活跃，该原因有待进一步研究。与对照组相比，患儿的清蛋白显著下降，这可能与EB病毒相关肝损害和(或)发病后患儿饮食不规律有关；而尿素、肌酐、尿酸与对照组相比差异无统计学意义，可能与肾的代偿有关，侧面反映出β2-微球蛋白是反映肾功能的灵敏指标。个别患儿尿素、肌酐、β2-微球蛋白正常，而尿酸轻度升高，可能与高嘌呤饮食有关。

小儿EB病毒感染，症状缺乏特异性，给疾病的诊断带来很大难度。患儿感染EB病毒可引起肝炎，甚至暴发性肝衰竭；也可引起间质性肾炎、IgA肾病、肾病综合征，甚至参与了肾衰竭的进展。临床上应高度重视EB病毒相关性肝肾损害，特别是对病因未知的肝或(和)肾功能异常，诊断时应将EB病毒感染纳入考虑对象，避免漏诊、误诊。

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