陕西省榆林地区和商洛地区HPV感染及亚型分布对比研究*

原 荣，李 军，王一羽，南 星，燕林青，慕玉东(陕西省肿瘤医院，西安 710061)

宫颈癌是比较常见的妇女恶性肿瘤，高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)持续性感染与宫颈癌前病变被认为是主要致病因素[1]。目前已发现的HPV有100多种亚型，其中40多种与生殖道疾病有关[2]。本文对1 646例分别在商洛及榆林地区医院妇科就诊妇女HPV-DNA的检测结果进行了对比分析，以了解HPV感染的地域性分布并为宫颈癌防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2013年1月～2014年10月在榆林市第二人民医院妇科就诊的709例妇女和在商洛地区中心医院妇科就诊的937例妇女，采集她们的宫颈脱落细胞样本。

1.2 仪器与试剂 美国ABI公司7500型荧光定量PCR仪；上海力康科学技术有限公司HFsafe-1200TE型生物安全柜；青岛海尔有限医用低温科技有限公司DW-86L386型超低温冰箱。广州达安生物技术有限公司人乳头瘤病毒分型检测试剂盒(荧光定量PCR法)，可以一次性检测高危型别18种和低危型别5种。所需试剂四基联苯胺、柠檬酸钠、十二烷基硫酸钠等均为国产分析纯。显色液用时按所需比例加超纯水新鲜配制。

1.3 方法

1.3.1 宫颈脱落细胞采集：利用专用宫颈刷置于宫颈口顺时针旋转5周，慢慢取出放入专用样本搜集管内，拧紧管盖，保持样本管直立，做好样本标识，实验室保存在-20℃冰箱待测。

1.3.2 DNA分离提取：取有宫颈细胞的保存液离心，弃上清，加细胞裂解液提取DNA，整个操作过程严格按照DNA提取试剂盒操作步骤完成。

1.3.3 PCR扩增PCR反应条件：50℃15 min，95℃10 min，35次循环(94℃30 s，42℃90 s，72℃30 s)，72℃延伸5 min。扩增完后进行杂交和染色，各步骤严格按照试剂盒说明书扩增程序进行。

1.3.4 检测结果判定：根据蓝色圆点的有无和位置利用阅读分析仪进行HPV是否感染以及感染的型别，显示蓝色圆点者为阳性，同时对照膜条阳性对照点显示蓝色斑点时表示实验检测结果准确可靠。

1.4 统计学分析 采用二项分布分别进行各组间感染率的比较。所用统计软件为SPSS13.0，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV-DNA感染率 见表1。榆林地区女性受检者中HPV-DNA阳性220例，阳性率31.02%，其中高危型感染者190例，低危型患者17例，混合型13例，分别占感染总数的86.36%，7.73%及5.91%。商洛地区HPV-DNA阳性566例，阳性率60.41%，其中高危型感染者318例，低危型感染者84例，混合型感染者164例，分别占感染总数的56.18%，14.84%及28.98%。商洛地区HPV总感染率明显高于榆林地区(P<0.05)，同时商洛各年龄组妇女HPV感染率也都显著高于榆林(P<0.05)。

表1 榆林和商洛两地HPV-DNA感染率

2.2 HPV-DNA多重感染率 榆林地区和商洛地区多重感染以二重感染最为常见，榆林地区检出单一型别感染174例，占总感染例数的79.09%，榆林地区未检出四重以上感染，也未检出二重和三重低危感染。商洛地区检出单一型别感染286例，占总感染例数的50.53%，多重感染以二重感染最多，有158例，占总感染例数的27.91%，三重感染74例，占总感染例数的13.07%，四重及以上感染48例，占总感染例数的8.48%，最高检出八重感染。

2.3 两地HPV-DNA感染常见型别 见表2。

表2 榆林和商洛两地HPV感染型别和分布(n)

被检测的HPV-DNA的23种型别中，榆林地区妇女HPV单一感染中高危型最常见，依次为HPV16，52，58，51，33。商洛地区为HPV16，58，66，33，18。两地共有高危型别为HPV16，58，33。榆林和商洛两地常见低危型别分别为HPV6，11及HPV6和43型。

3 讨论

我国每年新增约10万例的宫颈癌患者[3]，HPV持续感染是引发宫颈癌的主要原因之一[4]。 HPV是一种双链闭环小DNA病毒，属于乳头瘤病毒科，该病毒只侵犯人类，性传播是其主要的感染途径。HPV亚型众多，已知20余种亚型与宫颈癌相关，其中HPV16，18，52，58为高发型别。榆林地区妇女HPV单一感染最常见高危型别为HPV16，52，58型；商洛地区为HPV16，58，66型。两地高危型均以HPV16排首位，这与国内及国际报道的高危感染常见型别一致[5，6]。榆林地区高危型HPV52，58排2，3位，与国内感染率常见型别吻合[7，8]。榆林地区低危型最常见为HPV6和11型，商洛地区为HPV6和43型，两地排首位的低危型别HPV6与我国低危第一型别一致。榆林地区和商洛地区多重感染以二重感染最为常见，符合国内的多地报道。榆林地区未检出四重及以上感染，也未检出二重以上低危多重感染。商洛地区检出四重及四重以上感染，最多检出8种型别的HPV感染。数据显示商洛地区各年龄段HPV的感染率均显著高于榆林地区。榆林地处陕西最北部，气候干燥。 商洛地处陕西东南部，气候湿润，生活习惯近似南方。两地均以汉族人口为主，占比超过99%。榆林地区城镇及农村居民经济收入均高于商洛。一些国内文献表明不同区域HPV阳性率各有不同，且差别巨大。研究显示新疆HPV阳性率达到90%[9]，北京地区阳性率超过60%[10]，河南地区阳性率14.23%[11]，大连地区阳性率为12.78%[12]，苏州地区HPV阳性率58.20%[13]，辽宁地区阳性率45.6%[14]，武汉地区阳性率27.61%[15]，汕头地区阳性率22%[16]， 广西南宁14.23%[17]，以上不同地区HPV巨大的感染率差别，难以发现其规律性。妇女自身卫生习惯的不良是导致HPV高发的因素之一， 除此之外有作者提出HPV阳性率高与当地少数民族居多，经济落后，受教育程度不同有关。本研究没有收集到单个感染者对应的社会、经济信息，不能判断以上因素和两地HPV感染率差别的相关性，这有待于进一步的研究和探讨。

目前国内检测HPV的方法很多，没有一个确定的金标准，也是影响各地感染率高低不同的因素之一。但本文采用了相同的检测方法，结果显示榆林地区和商洛地区的感染率仍存在巨大差异，说明除了检测方法的影响外，可能还有其它地域性的因素也是影响HPV感染的重要原因。了解各地HPV感染的差异性及可能的原因，可为我国HPV流行病学调查及其流行趋势提供重要的资料，更为疾病防治及地方公共卫生政策的制定提供重要的参考依据。

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