唇香草不同部位总成分的分析比较

唇香草不同部位总成分的分析比较

丁文欢1， 欧亮苗2， 张雪佳2， 周晓英3

(新疆医科大学1中心实验室；2中医学院；3药学院， 乌鲁木齐830011)

摘要：目的分析比较唇香草不同部位的化学成分含量。方法采用可见分光光度法对唇香草不同部位的总多酚、总黄酮、总三萜酸、总游离氨基酸及总多糖的含量进行测定，并对数据进行分析。结果唇香草全草以及不同部位均富含总多酚和总黄酮，总游离氨基酸的含量也较高，而总三萜酸和总多糖的含量较低，在花、叶、茎中5种总成分的含量有所差异，5种成分在唇香草叶和花中含量较高，茎中的含量最低。结论根据各总成分含量在唇香草中的分布可初步将唇香草的采收期定于其叶和花产量较高的时期，即开花初期或盛开期。

关键词：唇香草； 不同部位； 总成分

中图分类号：R914文献标识码：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.07.014

[收稿日期：2014-11-19]

Analysis and Comparison of Total Components in Different Parts

of Ziziphora clinopodioides Lam.

DING Wenhuan1, OU Liangmiao2, ZHANG Xuejia2, ZHOU Xiaoying3

(1CentralLaboratory；2CollegeofTCM,3CollegeofPharmacy,

XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze and compare the total components in different parts of Ziziphora clinopodioides Lam. MethodsThe contents of the total phenolics, flavonoids, triterpenoids, free amino acids and polysaccharides were measured by visible spectrophotometry. Then analyze the data. ResultsBoth the grass and different parts of Ziziphora clinopodioides Lam. are rich in total phenolics and flavonoids， and the content of total free amino acids is also high. However, the contents of the total triterpenoids and polysaccharides were low. The contents of these five total components above were different, both the five total components above are richest in the leaves and least in stems of the Ziziphora clinopodioides Lam. ConclusionThe best harvest time for Ziziphora clinopodioides Lam should be in the flowering period according to the experimental data on the analysis of its components distribution.

Key words:ZiziphoraclinopodioidesLam.; different parts; total components

唇香草(Ziziphora clinopodioides Lam.)为唇形科新塔花属植物唇香草的干燥地上部分，多年生半灌木草本植物，别名有芳香新塔花、小叶薄荷、山薄荷等，维吾尔族名字为苏则、续则，是维吾尔医的常用药材。唇香草全株有强烈的薄荷香气，喜生于草地、低山坡、砾石及干旱坡地上，是新疆的特有药材，主要分布于我国新疆的阿勒泰山、天山、准噶尔西部山地、帕米尔高原的山地草原及砾石质坡地，中亚的吉尔吉斯斯坦、哈萨克斯坦、蒙古亦有分布[1]。唇香草性味辛、凉、微苦，具有强心利湿、理气化痰、消炎散结的功效，常用于治疗心脏病、高血压、哮喘多汗、心悸失眠、水肿、咳嗽、支气管炎、气短多汗、心悸失眠、水肿、咳嗽、肺脓肿等疾病[2-3]。

近年来，国内外对唇香草的不同提取部位的生物活性进行研究结果表明其具有抑菌、抗氧化、舒张血管、提高免疫力等生物活性[4-6]。目前对其化学成分的研究，主要采用可见分光光度法测定唇香草中的总成分。利用高效液相色谱法测定唇香草中黄酮类以及有机酸类成分，并建立了唇香草的指纹图谱以及唇香草的质量标准[7-11]。在维吾尔族民间，唇香草多为药食两用的材料。药用时取唇香草全草入药，民间食用时多只用唇香草的叶。本实验对唇香草中花、叶、茎以及全草的总成分进行测定与比较，以期为唇香草的物质基础研究提供实验数据。

1仪器、试药与方法

1.1仪器与试药XS-105型万分之一电子天平及METTLER-MS105DU型十万分之一电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，KQ5200DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，TGL-16B离心机(上海安亭科学仪器厂)，GBC Cintra-40型紫外可见分光光度计(澳大利亚GBC科学仪器公司)。药材于2012年8月1日在新疆乌鲁木齐市托里乡采收,经新疆维吾尔自治区中医医院主任药师李永和鉴定为唇形科植物唇香草；没食子酸(批号：A0110)、芦丁(批号：100080-200707)、熊果酸(批号：110709-200505)、精氨酸(批号：100080-200908)均购自中国药品生物制品鉴定所，葡萄糖(批号：20101024，天津市天新精细化工开发中心),乙醇、浓硫酸、蒽酮、福林试剂、碳酸钠、亚硝酸钠、硝酸铝、香草醛、氢氧化钠、茚三酮等均为分析纯。

1.2方法

1.2.1供试品溶液的制备唇香草的乙醇提取液：将阴干的唇香草粉碎，过40目筛。精密称取唇香草粉末1 g，用25 mL 70 %乙醇超声提取30 min，过滤即得。唇香草的水提取液：将阴干的唇香草粉碎，过40目筛。精密称量唇香草粉末1 g，用25 mL蒸馏水超声提取30 min，过滤即得。总多糖提取液制备：称取唇香草粉末0.5 g，加入20 mL蒸馏水超声30 min，过滤，滤液中加入20 mL Sevage试剂(氯仿∶正丁醇4∶1)，以120 r/min的速度振荡30 min除蛋白，将Sevage试剂层弃去，滤液层加入100 mL 95%乙醇放置过夜使多糖沉淀，弃上清液，离心，得粗多糖，用100 mL蒸馏水溶解即得。

1.2.2唇香草中总多酚的含量测定

1.2.2.1标准曲线的建立精密称取5 mg没食子酸对照品，用70 %乙醇溶解，定容至50 mL容量瓶中，得浓度为0.1 mg/mL的没食子酸对照品溶液。准确吸取没食子酸对照品溶液1、2、3、4、5 mL置于10 mL容量瓶中，加入福林试剂1 mL，摇匀，静置1 min，再加入2 mL 20 %碳酸钠溶液，用70 %乙醇定容，混匀，75℃水浴10 min，在400～800 nm波长范围内扫描没食子酸及样品的最大吸收波长，没食子酸对照品的扫描结果显示其最大吸收波长为760 nm，结合文献报道的最大吸收波长，确定在760 nm处测定唇香草中的总多酚含量。以没食子酸浓度C(mg/mL)为横坐标，吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=15.820 0 C+0.048 2(r=0.999 4)，结果表明，没食子酸浓度在0.01~0.05 mg/mL范围内线性关系良好。

1.2.2.2样品含量测定分别精密吸取按“1.2.1” 项下方法制得的唇香草乙醇提取液1 mL，用70%乙醇稀释至10 mL，再精密吸取0.5 mL的稀释液，并按照“1.2.2.1”项下方法测定吸光样品溶液的吸光度，根据线性方程计算唇香草样品中总多酚的含量。

1.2.3唇香草总黄酮含量测定

1.2.3.1标准曲线的建立精密称取芦丁对照品10 mg，用70%乙醇溶解，定容至50 mL的容量瓶中，得浓度为0.2 mg/mL的芦丁对照品溶液。精密吸取芦丁对照品溶液0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL于10 mL容量瓶中，加入5 %亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀；放置6 min后，再加入0.3 mL 10%的硝酸铝溶液，摇匀；放置6 min后，加入4 mL 4%氢氧化钠溶液，摇匀；最后用7 %乙醇定容至10 mL，15 min后在400～800 nm波长范围内扫描，结果显示其最大吸收在510 nm处，故本实验选择在510 nm处测定唇香草中总黄酮的含量。以芦丁对照品溶液的浓度C(mg/mL)为横坐标，吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=10.700 0 C+0.013 6(r=0.999 9)，对芦丁溶液的浓度在0.02~0.07 mg/mL间线性关系良好。

1.2.3.2样品含量测定分别精密吸取按“1.2.1”项下方法制成的唇香草乙醇提取液0.3 mL，于10 mL容量瓶中，按“1.2.3.1”项下方法测定吸光度值，并根据标准曲线计算唇香草样品中总黄酮的含量。

1.2.4唇香草三萜酸类含量测定

1.2.4.1标准曲线的建立精密称取熊果酸对照品6 mg，置于10 mL容量瓶中，用70 %乙醇溶解并定容，得浓度为0.6 mg/mL的熊果酸对照品溶液。准确吸取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL分别置于蒸发皿中，水浴蒸干，冷却后加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.5 mL和浓硫酸溶液1 mL，移入带有刻度的比色管，用冰乙酸润洗蒸发皿并入比色管，用冰乙酸定容至10 mL，摇匀，60℃水浴中加热10 min，冷却至室温后在400~800 nm波长范围内进行最大吸收波长的扫描，根据最大吸收波长最后确定在551 nm波长处测定吸光度值。以熊果酸对照品浓度C (mg/mL)为横坐标，吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线为A=23.066 7C-0.019 2(r=0.999 9)，表明熊果酸对照品溶液的浓度在0.012～0.36 mg/mL范围内线性关系良好。

1.2.4.2样品含量测定分别精密吸取按“1.2.1”项下方法制成的唇香草乙醇提取液1 mL，按“1.2.4.1”项下方测定样品溶液的吸光度值，并带入线性方程计算其三萜酸的含量。

1.2.5唇香草总游离氨基酸含量测定

1.2.5.1标准曲线的建立精密称取10 mg精氨酸对照品，置于25 mL容量瓶中，用蒸馏水溶解定容，得浓度为0.4 mg/mL精氨酸对照品溶液，精密量取精氨酸对照品溶液0.8、1.1、1.4、1.7、2.0 mL分别置于25 mL棕色比色管中，各加2 mL 2%茚三酮溶液和l mL磷酸缓冲液(pH=6.80)，置沸水中水浴加热15 min，室温冷却15 min，蒸馏水定容至25 mL，在566 nm波长处测定吸光度值。以精氨酸对照品溶液的浓度C为横坐标，吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线为A=26.208 3C-0.076 1(r=0.999 7)，结果表明精氨酸对照品溶液的浓度在0.0128～0.032 mg/mL范围内线性关系良好。

1.2.5.2样品含量测定分别精密吸取按“1.2.1”项下方法制成的水提取液5 mL，按“1.2.5.1”项下方法测定吸光度值，计算样品含量。

1.2.6唇香草总多糖含量测定

1.2.6.1标准曲线的建立对照品溶液的制备：精密称取葡糖糖0.200 0 g置100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，得浓度为2 mg/mL的对照品溶液。硫酸-蒽酮溶液的配制：称取蒽酮0.2 g，加入100 mL浓硫酸超声溶解即得。精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL分别置于10 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，再分别取1 mL置于试管中，各加硫酸-蒽酮溶液4 mL，摇匀后放置13 min，置沸水中水浴加热10 min，取出冷却至室温(15 min)。于582 nm处测定吸光度，绘制标准曲线，得葡萄糖溶液浓度C与吸光度A的曲线，回归方程为A=6.787C+0.045 7(r=0.999 6)，线性范围为0.02~0.12 mg/mL。

1.2.6.2样品含量测定分别精密吸取按“1.2.1”项下方法制成的唇香草多糖提取液1 mL，按“1.2.6.1”项下方法测定吸光度值，代入线性方程计算样品含量。

2结果

采用可见分光光法对唇香草不同部位的总成分含量进行测定，结果唇香草全草及各部位均富含总多酚和总黄酮，总游离氨基酸的含量也较高，而总三萜酸以及总多糖的含量较低。唇香草花、叶、茎中的各总成分含量存在差异，唇香草花和叶中5种总成分的含量均较高，而茎中的含量较低，结果见表1。

表1　唇香草不同部位总成分含量/(mg/g)

3讨论

近年来的研究证明植物中总多酚、总黄酮、总三萜酸、总游离氨基酸以及总多糖均有较强的生物活性，如多酚类物质多具有抗氧化、抗菌以及抗凝血等活性[12-13]；黄酮类物质多具有抗菌、抗氧化、抗抑郁以及光保护作用等活性[14-16]；三萜酸类成分具有抗炎、镇咳抗抑郁等活性[17-18]；氨基酸是构成人体营养所需蛋白质的基本物质；游离氨基酸具有抗氧化、提高人体过氧化物酶的水平等作用[19-20]；多糖类化合物多具有抗疲劳、抗癌、抗氧化等生物活性[21-22]。本研究采用可见分光光度法对不同采收期的唇香草中总多酚、总黄酮、总三萜酸、总游离氨基酸以及总多糖的含量进行测定。根据各总成分的溶解性质的不同，总多酚、总黄酮以及总三萜酸采用70 %的乙醇溶液进行超声提取；总游离氨基酸与总多糖采用蒸馏水超声提取，由于蛋白质类成分对总多糖的测定结果有干扰，故在唇香草多糖提取过程中采用sevage试剂(氯仿∶正丁醇=4∶1)除蛋白；测定多糖含量时，水浴加热后放至室温，放置时间的长短对吸光度值影响较大，故测定时要统一放置时长。实验结果证明在唇香草花和叶中5种总成分含量均较高，而茎中含量较低，从而验证了唇香草以开花前期和花期作为采收期以及维吾尔族民间食用唇香草叶的行为是有科学依据的。

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(本文编辑施洋)