新疆地区汉族、维吾尔族、哈萨克族丙肝患者基因型研究

新疆地区汉族、维吾尔族、哈萨克族丙肝患者基因型研究

陈兆云1， 刘继文2， 孟存仁1， 张朝霞1， 张晨3

(新疆医科大学1第一附属医院医学检验中心， 乌鲁木齐830054；2公共卫生学院，3第五附属医院， 乌鲁木齐830011)

摘要：目的了解新疆地区汉族、维吾尔族、哈萨克族感染丙型肝炎病毒(HCV)不同基因型的分布特点。方法应用PCR-反向点杂交技术对669份HCV-RNA阳性的血清进行HCV基因分型，同时分析患者的民族、性别、肝脏疾病临床类型与基因型的相关性。结果669份HCV感染血清样本PCR-反向点杂交基因分型成功652例，17例不确定，检出率为97.4%(652/669)，检出7种基因型，分别为1b、2a、3a、3b、6a以及混合型1b/2a和1b/3a，其中1b型395例(60.58%)，2a型188例(28.83%)，3a型37例(5.67%)，3b型26例(3.99%)，6a型3例(0.46%)，1b/2a型2例(0.31%)，1b/3a型1例(0.15%)。不同临床类型HCV基因型有差异，1b型患者中、重度肝炎患病率显著高于2a型，且差异有统计学意义(P<0.05)；汉、维吾尔、哈萨克族HCV基因型1b、2a型分布差异有统计学意义(P<0.05)，各基因型男性与女性患者差异无统计学意义。结论新疆地区丙型肝炎病毒(HCV)患者基因型以1b型为主，其次是2a型，1b、2a型在汉、维吾尔、哈萨克族丙型肝炎患者中存在差异，1b型丙型肝炎患者较其他型丙型肝炎患者病情更严重。丙肝基因分型检测对指导临床用药将具有重要的意义。

关键词：新疆； 丙型肝炎病毒(HCV)； 基因型

中图分类号：R34文献标识码：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.07.013

[收稿日期：2015-02-09]

基金项目：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划资助项目(201110106)

作者简介：马桂芝(1973-)，女，博士，副教授，硕士生导师，研究方向：药物分析。

基金项目：国家自然科学基金(81060365)； 新疆维吾自治区科技支撑计划(201233134)

作者简介：丁文欢(1986-)，女，硕士，研究实习员，研究方向：中药化学。

Genotypinghepatitis C virus in Han Uyghur and Kazak patients in Xinjiang

CHEN Zhaoyun1, LIU Jiwen2, MENG Cunren1, ZHANG Zhaoxia1, ZHANG Chen3

(1DepartmentofLaboratory,TheFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,

Urumqi830054,China;2CollegeofPublicHealth,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830054,China;

3FifthAffiliatedHospital,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the distribution of hepatitis C virus (HCV) genotype in Han, Uyghur and Kazak patients in Xinjiang area. Methods669 cases of HCV-RNA positive samples were typed by PCR-reverse dot blot (PCR-RDB); the correlation analysis was conducted between the genotypes and their race, sex and clinical types of liver illness. Results652 HCV cases were successfully detected in 669cases, with 17 uncertain cases. 7 genotypes were found out: 395 cases with 1b(60. 58%), 188 cases with 2a(28.83%), 37 cases with 3a(5.67%), 26 cases with 3b(3.99%), 3 cases with 6a(0.46%), 2 cases with 1b/2a(0.31%), 1 case with 1b/3a(0.15%). The prevalence of type 1b with severe HCV was significantly higher than those with 2a, and the difference was statistically significant (P<0.05). ConclusionIt′s found that HCV1b was the major genotype distributed in Xinjiang region, and 2a was the second genotype. The patients in 1b type were more serious than the patients in other type of hepatitis C. Genotyping detection had the vital significance to guide clinical treatment.

Key words: Xinjiang; hepatitis C virus; genotype

丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)引起的一种传染病，主要通过输血、静脉毒品注射、血液透析和器官移植等途径传播[1]。目前HCV有6种基因型(1～6)和11种基因亚型(1a～c、2a～c、3a～b、4a、5a、6a)，不同基因型或亚型感染的地理分布、抗病毒治疗的效果及疾病严重程度等均存在差异。自1989年被美国发现以来，HCV感染逐渐成为一个世界性公共卫生问题。目前全球丙肝患者约1.3亿~1.7亿人，每年因HCV感染而死亡者高达35万人[2]，WHO报告每年全球至少322万人感染HCV[3]。人群HCV感染率为3.0%(0.1%～10%)。在中国HCV的感染率为3.2%，约3 800万。近年来，随着中国丙型肝炎的诊断率不断提高，丙型肝炎感染新报告病例也在不断增加[4]。人群感染HCV各基因型在不同地区分布有一定差异。本研究采用PCR-反向点杂交方法对新疆地区主要民族的HCV感染患者进行基因分型，以了解本地区的HCV基因型分布特点。

1资料与方法

1.1一般资料选择新疆医科大学第一附属医院2014年1-12月门诊和住院的HCV感染患者669例，且患者HCV病毒载量均大于1×103copies/mL，经PCR-反向点杂交成功进行HCV基因型分型652例，平均年龄(40.06±1.03)岁，男性304例，女性348例。其中汉族475例，维吾尔族134例，哈萨克族43例。慢性丙肝患者398例，中重度肝炎168例，丙型肝炎肝硬化3例，肝癌6例，其他46例。临床诊断均依照《中华人民共和国卫生行业标准》丙型病毒性肝炎诊断标准(WS213-2008)[5]。

1.2方法

1.2.1HCV-RNA定量检测按照试剂盒使用说明书进行操作，主要包括以下过程：(1)提取血清RNA；(2)逆转录合成cDNA；(3)PCR扩增及荧光检测。

1.2.2HCV基因分型检测丙型肝炎基因分型检测严格按照基因分型检测试剂盒说明书进行：(1)提取血清RNA；(2)RT-PCR扩增；(3)杂交与显色；(4)判断基因型。HCV 基因分型杂交膜条共12个位点，排列示意图见图1。

1.2.3质量控制检测HCV-RNA时，随标本加入1个阴性对照，1个临界阳性对照，临界阳性值为1.25×104copies/mL。基因分型检测时，随标本同时加入1个阴性对照，1个阳性对照，阳性对照为1b型。

1.3统计学处理所有数据采用SPSS 17.0软件包进行分析，计数资料采用χ2检验进行比较，以P<0.05为差异有统计学意义。

图1　排列示意图

注：其中位点 G1～G10 为各型别检测探针，PC为扩增控制点，CC 为显色控制点。结果判定：CC 点、PC 点和各型别位点cutoff 值已预设在分析软件中，分析结束后软件自动生成各位点信号值、阴阳性和相应的HCV型别。

2结果

2.1基因分型结果652例HCV-RNA阳性的丙型肝炎患者中，1b型395例(60.58%)，2a型188例(28.83)，3a型37例(5.67%)，3b型26例(3.99%)，6a型3例(0.46%)，1b/2a型2例(0.31%)，1b/3a型1例(0.15%)，各基因型结果见图2。

图2　HCV基因型实验室结果

1:1b型；2:2a型；3:3a；4:3b型；5:6a型；6:混合型1b/2a

2.2不同性别基因型分布652例丙型肝炎患者中，男、女性患者各种基因型的构成情况基本一致，均为1b型最多，其次为2a、3a、3b型。各基因型男性与女性患者差异无统计学意义，见表1 。

表1　不同性别HCV基因型分布/例(%)

2.3不同民族基因型差异从民族分布来看，汉、维吾尔、哈萨克族HCV基因型1b、2a型分布有差异(P<0.05)，而3a、3b型差异无统计学意义，见表2。

2.4不同HCV-RNA载量水平基因型分布差异本组病例中，所占比例最高的2种HCV 基因型为1b型和2a型，其中1b型的平均RNA 载量为(1.41×106±1.43×105)copies/mL，2a型的平均RNA载量为(7.84×105±1.43.15×105)copies/mL，两者差异有统计学意义(P<0.05)。载量水平为(1.00×104～9.99×104)和(1.00×106～9.99×106)，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表2　不同民族HCV基因型差异/例(%)

表3　不同HCV基因型病毒载量差异/例(%)

2.5HCV不同基因型在预后的差异和转归的差异不同临床类型HCV基因型有差异，1b型患者中、重度肝炎患病率显著高于2a型，且差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4　不同临床类型肝炎HCV基因型分布/例(%)

3讨论

新疆HCV基因型分布比较复杂，本研究发现的有1b、2a、3a、3b、6a、1b/2a、1b/3a7种基因型，但主要基因型别和其他型别所占比例有较大差异，所占比例最高的仍然是1b型，其次是2a型。此结论与唐文志等[6]报道的目前我国1b 型仍为HCV 主要流行基因型的结论一致。

本研究发现新疆地区汉、维吾尔、哈萨克族不同性别HCV感染患者的基因型无差异。这一结论与黄前川等[7]的研究结果一致。少数民族聚居是新疆地区的特点，研究新疆主要民族的维、汉、哈族HCV基因型差异，发现不同民族HCV基因型分布有明显差异，其中汉族所占比例最高，这可能与汉族人口众多、人群流动性大、静脉吸毒人员中HCV阳性率较高[8]、输血及血液透析等治疗措施的普及等因素有关。

感染HCV不同基因型的患者在预后的差异和转归的差异各有不同，本研究发现新疆地区HCV感染患者1b型患者中、重度肝炎患病率显著高于2a型，该结论与严艳等[9]及何平等[10]研究结果相同。也说明1b型HCV对肝脏的损伤要比其他亚型严重的多，且临床上其对干扰素的治疗方案和周期以及治疗效果也不尽相同。

此外，不同基因型的HCV-RNA 载量和丙肝的临床类型也存在差异，本研究发现1b型HCV感染患者平均病毒载量高于2a型，不同载量区间也存在差异。1b型可能与病程长、年龄大、合并肝硬化或肝癌有关，而2a型则多见于慢性肝炎且不合并肝癌患者。1b型比其他型病毒在体内存在时间更长，因长期感染而更易导致肝硬化或肝癌。有研究显示，1b基因型感染与肝炎的慢性化进程和严重的肝脏疾病有关，推测可能与HCV型特异变异基因编码的蛋白有较强的细胞毒作用有关[11]。Pozzato 等[12]研究发现不同HCV基因型与疾病严重程度存在相关性，Ⅱ/lb型患者谷丙转氨酶(ALT)水平明显升高(P<0.01)，Ⅱ/1b 基因型患者肝硬化的比率显著增加(P<0.05)。但也有一些研究显示HCV基因型与肝脏疾病严重程度无关[13]。刘志英等[14]对92例HCV慢性肝炎、肝硬化、肝癌中基因型的分布进行比较，尚未发现HCV基因型因肝病严重程度而有所不同，并认为疾病轻重与基因型有关的结论缺乏前瞻性研究，仅是根据不同类型病人中病毒基因型分布的不同得出的。因此，病毒基因型是否决定病程长短、病毒血症的高低和某一基因型与肝硬化、肝癌患病率的关系方面仍有争议。

鉴于新疆HCV基因型分布的多样性和变化型，对该地区HCV患者的基因型进行常规检测，可能具有重要的临床和流行病学意义。

总之，不同基因型的HCV可能存在民族、临床类型、病毒载量等方面的差异，因此HCV基因分型对临床诊断与治疗有重要意义。随着HCV基因型研究的不断深入，基因型在HCV患者的临床类型、病程、转归及治疗方案的选择及预后等方面将发挥重要作用。

参考文献：

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[14]刘志英, 魏红山, 戴旺苏, 等. 北京地区丙型肝炎患者的丙型肝炎病毒基因分型[J]. 中华流行病学杂志, 2005, 26:148-149.

(本文编辑张巧莲)

通信作者：滕亮，男，教授，硕士生导师，研究方向：药物新剂型，E-mail: tl750212@126.com。

通信作者：周晓英，女，教授，硕士生导师，研究方向：分析化学，E-mail：zhouxiaoyin4@163.com。