外周血中MMP-2、MMP-9 与溃疡性结肠炎患者肠黏膜通透性的相关性分析

蒋继周，金 一，郑舒丹

苏州市立医院1.消化科;2.检验科，江苏 苏州215001

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种病因尚不明确的慢性非特异性肠道炎症疾病，其临床表现以腹痛、腹泻、黏液脓血便为主，易反复发作，并有可能导致严重的并发症，严重危害患者的生命健康［1］。UC患者相对于健康人其肠黏膜的通透性更高，而炎症性肠病的发病通常需要肠道高通透性的参与。肠黏膜通透性增加的关键步骤是细胞外基质和基底膜的降解破环。基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9 是参与降解Ⅳ型胶原主要蛋白酶，后者是基底膜的主要成分，作为屏障起到阻止细胞浸润和炎症扩散的作用［2］。本研究通过对UC 患者外周血中MMP-2 及MMP-9 水平的检测，分析外周血中MMP-2、MMP-9 与UC 患者肠黏膜通透性的关系，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012 年9 月-2014 年9 月于苏州市立医院治疗的UC 患者44 例作为试验组，男24例，女20 例，年龄23 ～68 岁，平均年龄(36.2 ±9.7)岁。所有患者均符合溃疡性结肠炎诊断标准［3］。另选择36 名健康志愿者作为对照组，男20 名，女16 名，年龄21 ～65 岁，平均年龄(35.4 ±8.7)岁。两组一般资料对比，差异无统计学意义(P ＞0. 05)，具有可比性。

1.2 排除标准 (1)痢疾杆菌、沙门氏菌、阿米巴、血吸虫等感染性结肠炎患者;(2)出血性坏死性肠炎、真菌性肠炎、胶原性肠炎患者;(3)其他自身免疫性疾病患者;(4)过敏性紫癜患者;(5)克罗恩病患者;(6)大肠癌患者;(7)肝炎患者。

1.3 仪器与试剂 仪器:酶标仪(Anthos Reader Zenyth 200rt，奥地利);高效液相色谱仪(Agilent 1100，美国);色谱数据工作站(Agilent，美国);超声波清洗器(AS20500B，杭州汇尔)。

试剂:人MMP-2、MMP-9 酶联免疫检测试剂盒(美国R＆D);乳果糖、甘露醇标准品(美国sigma);色谱纯乙腈(美国Tedia);乳果糖口服液(荷兰Solvay);20%甘露醇(安徽双鹤药业)。

1.4 方法 血清MMP-2、MMP-9 水平检测:两组研究对象均于清晨空腹状态下抽取5 ml 肘静脉血，采用酶联免疫检测试剂盒(ELISA)双抗体夹心法检测血清MMP-2、MMP-9 水平。

尿液标本采集:所有研究对象于第1 天晚上10 点后禁止饮水，第二天早晨空腹排尿后，口服乳果糖和甘露醇测试液各50 ml，之后禁止饮水30 min，禁止饮食2 h，并收集研究对象6 h 内所排尿液。取收集的20 ml尿液滴入2%硫柳汞3 ～5 滴后置于-20 ℃保存。

尿液中乳果糖和甘露醇浓度测定:检测时取研究对象的冷冻尿液样品常温溶化、混匀后离心半径为10 000 r/min 离心10 min，取上清液加入乙腈沉淀蛋白，涡旋30 s 后5 000 r/min 离心10 min，吸取上清过滤后上机检测。

1.5 统计学处理 采用SPSS 19.0 统计软件进行数据分析。所有计量资料均采用t 检验，采用Pearson 法进行相关性分析，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象外周血MMP-2、MMP-9 水平和尿液L(乳果糖)/M(甘露醇)值比较 试验组MMP-2、MMP-9、L/M 值均高于对照组，差异有统计学意义(P ＜0.05，见表1)。

表1 两组研究对象外周血MMP-2、MMP-9 水平和L/M 值比较(±s)Tab 1 Comparison of MMP-2，MMP-9 and L/M values between two groups (±s)

表1 两组研究对象外周血MMP-2、MMP-9 水平和L/M 值比较(±s)Tab 1 Comparison of MMP-2，MMP-9 and L/M values between two groups (±s)

分组 例数 MMP-2(pg/L)MMP-9(pg/L) L/M值44 8.56 ±2.67 8.62 ±2.72 0.061 ±0.018对照组 36 1.87 ±0.38 2.09 ±0.32 0.029 ±0.005 t 值试验组14.89 14.31 10.33 P 值＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 UC 患者外周血MMP-2、MMP-9 水平与L/M比值关联分析 Pearson 分析显示，UC 患者MMP-2、MMP-9 水平与L/M 值有相关性，差异有统计学意义(γ 值分别为0.845、0.863，P ＜0.05)。

3 讨论

我国UC 的发病率有逐年上升的趋势，UC 的预防及治疗将成为一个广泛的健康问题，对其病因及发病机制的探究有待进一步深入研究。

有研究报道，UC 患者相对于健康人其肠黏膜的通透性更高，而炎症性肠病的发病通常需要肠道高通透性的参与，因而修复肠黏膜屏障成为治疗炎症性肠病的重要途径［4-5］。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是一类Zn2+依赖的具有降解细胞外基质能力的蛋白酶［6］。其中MMP-2、MMP-9 又称明胶酶，主要降解Ⅳ型胶原，后者是基底膜的主要成分，作为屏障起到阻止细胞浸润和炎症扩散的作用［7］。肠黏膜通透性增加的关键步骤是细胞外基质和基底膜的降解破环［8］。因而UC 患者肠黏膜通透性改变的这一过程中MMP-2 及MMP-9 可能作为一种致病因子参与其中，患者外周血中的MMP-2 及MMP-9 与患者肠黏膜的通透性可能存在一定的关系［9］。本研究通过对UC 患者外周血中MMP-2 及MMP-9 水平的检测，同时采用L/M 比值法，探究MMP-2 及MMP-9 与UC 患者肠黏膜通透性的关系。L/M 比值法原理是乳果糖和甘露醇在肠道内的吸收途径不同:乳果糖主要通过小肠黏膜上皮细胞间的紧密连接而吸收，甘露醇主要通过小肠上皮细胞膜上的毛细气孔而被主动吸收。二者在体内不进行代谢，从肠道入血后由尿中排出，故可在尿中进行定量测定，并由此反映出其吸收量。L/M值增加，则表示肠黏膜通透性增加，反映肠黏膜紧密连接部不完整，或有区域性细胞缺失，或绒毛末梢损坏，或有组织间隙水肿。试验最后结果表明，试验组患者MMP-2、MMP-9 均高于对照组。Pearson 法分析显示，UC 患者MMP-2、MMP-9 与L/M 值有一定相关性。

综上所述，UC 患者肠黏膜通透性增高可能与患者外周血中MMP-2、MMP-9 水平增高相关。通过对患者外周血中MMP-2、MMP-9 水平的监测，可能为UC 的诊断及治疗提供一定的方向。

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