没食子酸丙酯纯度标准物质的研究

帅放文，王向峰，雷玉萍，肖江，曹荣，彭丽娟

(湖南省药用辅料工程技术研究中心有限公司，长沙 410331)

没食子酸丙酯纯度标准物质的研究

帅放文，王向峰，雷玉萍，肖江，曹荣，彭丽娟

(湖南省药用辅料工程技术研究中心有限公司，长沙 410331)

研制了没食子酸丙酯纯度标准物质。依据国家《一级标准物质研制技术规范》，采用高效液相色谱(HPLC)法和差示扫描量热(DSC)法对没食子酸丙酯纯度标准物质进行联合定值，进行了相应的不确定度评定。研制的没食子酸丙酯纯度标准物质定值结果为(99.8±0.5)%(k=2，P=0.95)。该标准物质可用于相关药品生产及使用单位的质量控制和分析方法确认评价。

没食子酸丙酯；纯度标准物质；高效液相色谱法；差示扫描量热法

没食子酸丙酯因其具有较强的抗氧化能力，在食品、医药化学等领域有着广泛的应用。目前市售的没食子酸丙酯工作对照品虽然有多个，但尚无国家有证标准物质，不利于该品种的质量控制和分析方法确认研究。随着没食子酸丙酯生产厂家的增加和使用范围的扩大，该品种的标准物质需求逐步增加。为满足市场需求，研制没食子酸丙酯纯度标准物质具有广泛的市场价值。根据我国一级标准物质研制技术规范和国家计量相关法规［1-3］，采用高效液相色谱法［4-5］(HPLC)和差示扫描量热法［6-7］(DSC)完成了对没食子酸丙酯纯度标准物质联合定值，根据统计学原理，建立标准物质标准值的不确定度评估的数学模型，克服一种定值方法的技术缺陷，保证了标准物质定值结果的科学性和准确性。笔者研制的没食子酸丙酯标准物质，属计量范畴，具备溯源性与量值传递功能，可在国际交流中使用。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：U3000型，美国戴安公司；

紫外可见分光光度计：UV-2450型，日本岛津公司；

红外光谱仪：Spectrum-65型，美国PerkinElmer公司；

核磁共振仪：Varian INOVA-300型，美国瓦里安公司；

质谱仪：Bruker Amazon X型，美国布鲁克·道尔顿公司

高分辨质谱仪：Agilent 6520 Q-TOF型，美国安捷伦公司；

没食子酸丙酯纯度标准物质：自制；

甲醇：色谱级，德国Merck公司；

实验所用其它试剂均为分析纯；

实验用水为超纯水。

1.2 标准物质候选物的制备

采用高纯没食子酸丙酯为原料，以水为溶剂，水浴加热80℃使其溶解后，保温30 min，滤过，在0℃的条件下重结晶5 h，过滤后，在45℃，-0.085 MPa下减压干燥8 h，经研磨过筛，混匀后即得候选标准物质。

1.3 定性分析

采用红外光谱、紫外光谱、质谱、核磁氢谱、核磁碳谱和高分辨质谱对没食子酸丙酯标准物质主成分进行定性分析。

1.4 定值分析

采用高效液相色谱法和差示扫描量热法两种不同原理的方法对没食子酸丙酯标准物质进行定值分析。

1.4.1 高效液相色谱条件

色谱柱：WondasilTMC柱色谱柱(250 mm×4.618mm，5 μm)；流动相：0.1%乙酸-甲醇(体积比为40∶60)；流量：1.0 mL／min；检测波长：220 nm；柱温：25℃；进样体积：10 μL。

1.4.2 DSC条件

精密称取没食子酸丙酯纯度标准物质样品2～4 mg，置于40 μL标准铝坩埚中。压盖，置于DSC仪中，以空的40 μL标准铝坩埚作为参比，控制升温速率为1.0℃／min，升温区间为135～155℃，记录DSC热流值峰面积，采用分析软件计算其化学纯度。

1.5 杂质分析

1.5.1 水分测定

采用卡尔-费休法［8］进行水分的测定。

1.5.2 炽灼残渣的测定

采用《中国药典》2010版附录ⅧN的炽灼残渣检查法进行测定。

1.6 均匀性检验

根据JJF1006-1994［9］进行标准物质的均匀性检验，采用高效液相色谱法测定样品，以面积归一化法计算没食子酸丙酯的含量，并以含量测定结果作为样品均匀性的考察指标。随机抽取没食子酸丙酯标准物质样品15瓶，每瓶取样3次，取样量为10 mg，共45份样品，进行瓶间和瓶内均匀性检验，对瓶内和瓶间两组测定值的方差进行F检验。

1.7 稳定性考察

标准物质的稳定性是衡量标准物质特性的另外一个重要参数。标准物质的长期稳定性与贮存条件有关，短期稳定性与样品运输过程中的外部因素有关。根据JJF1006-1994［9］，将分装于棕色西林瓶中的密封样品，放置于规定的存储环境中，进行长期稳定性考察，在不同时间点(0，1，3，6，9，12月)随机选取5瓶，每瓶取样1份。采用高效液相色谱法进行测定，并以面积归一化法计算含量。分别采用t检验及直线拟合法对上述实验结果进行评价，以确定样品的长期稳定性。

2 结果与讨论

2.1 定性分析

没食子酸丙酯结构式如图1所示。

图1 没食子酸丙酯结构式

没食子酸丙酯纯度标准物质的红外图谱与没食子酸丙酯标准红外图谱一致；UV(甲醇)λmax：206 nm；ESI-MSm／z：212［ M-H］-；高分辨质谱：测得相对分子质量为212.064 0，与其相对分子质量相符；

2.2 定值分析

采用差示扫描量热法、高效液相色谱法(HPLC-UV)对没食子酸丙酯纯度标准物质进行定值。两种不同原理定值方法对没食子酸丙酯纯度标准物质的联合定值，可避免一种方法可能带来的技术缺陷。建立不同技术原理不确定度评估数学模型，为标准物质的不确定度评价提供了科学依据。图2为没食子酸丙酯标准物质高效液相色谱图，图3为没食子酸丙酯差示扫描量热法图。

图2 没食子酸丙酯纯度标准物质的液相色谱图

图3 没食子酸丙酯纯度标准物质的DSC谱图

表1、表2为没食子酸丙酯定值结果。

表1 没食子酸丙酯纯度标准物质HPLC纯度测定结果 %

表2 没食子酸丙酯纯度标准物质DSC纯度测定结果 %

采用科克伦准则、狄克逊准则和格布拉斯检验对定值数据进行了考察，结果表明测试数据无异常值。以t检验法，评估了两种方法的一致性，结果表明两种方法一致性良好。该批标准物质的纯度值为两种定值方法的算术平均值，即99.8%。

2.3 均匀性考察

随机抽取没食子酸丙酯标准物质样品15瓶，每瓶取样3次，取样量为10 mg，共45份样品，采用HPLC法进行测定，结果见表3。

表3 没食子酸丙酯纯度标准物质均匀性检验结果 %

根据表3数据进行均匀性检验，计算得测定结果的总平均值为99.927%，组内差方和，组间差方和，F=1.18，F0.05(14，30)=2.04，F＜F0.05(14，30)，说明样品均匀性好。

2.4 稳定性考察

样品长期稳定性检验结果列于表4。t检验结果表明，样品在(30±2)℃下储存12个月，没食子酸丙酯标准物质含量未发生显著变化。因此样品可以(30±2)℃下稳定储存12个月。

表4 没食子酸丙酯标准物质稳定性检验结果

2.5 不确定度评定

2.5.1 水分和炽灼残渣测定引入的不确定度

通过水分和炽灼残渣所占含量估计，得水分测定引入的不确定度为uwater=0.13%，炽灼残渣测定引入的的不确定度uash=0.02%。

2.5.2 不均匀性引入的相对不确定度

标准物质的均匀性不确定度按照方差分析法进行检验，结果表明该批标准物质的均匀性良好。样品不均匀性引入的不确定度：

2.5.3 稳定性引入的不确定度

有效期t=12个月的长期稳定性的不确定度：

2.5.4 DSC法引入的不确定度

差示扫描量热法定值的不确定度由5部分组成［10-11］：样品重复性测量标准不确定度(uA1)；标准物质铟的熔融焓测量重复性(uB1)、天平的称量误差(uB2)、仪器的温度误差(uB3)、仪器的摩尔熔融热焓误差(uB4)等引起。差示扫描量热法定值的不确定度见表5。

由于上述样品测定的4个不确定度分量产生的原因不同，所以彼此线性无关。根据JJF1059-1999［12］，其合成标准不确定度u2由各分量相对不确定度合成计算：

表5 DSC检测分析方法的合成标准不确定度评定结果

则DSC测量引入的不确定度uDSC：

式中：P——DSC测定的没食子酸丙酯标准物质的纯度，%；

2.5.5 高效液相色谱法引入的不确定度

高效液相色谱定值的不确定度由3部分组成：

(1)A类标准不确定度：采用高效液相色谱法定值测量计算得到单次测量标准偏差u3＝0.017%。

(2)B类不确定度：杂质响应引入的不确定度u4＝0.15%。

(3)检测线性引入的不确定度：仪器在检测过程中未超出没食子酸样品的线性范围，因此检测线性引入的不确定度可忽略。

液相色谱分析引入的不确定度：

2.6 合成不确定度

综上，合成得没食子酸丙酯标准物质的测量不确定度：

置信概率95%下，取包含因子k=2，扩展不确定度：

该批没食子酸丙酯标准物质的定值结果：

3 结论

采用HPLC法和DSC法对没食子酸丙酯纯度标准物质进行定值，避免了一种原理方法可能带来的技术缺陷。考察了标准物质均匀性和稳定性，该标准物质符合均一性和稳定性的要求。该标准物质已通过评审，获准成为国家二级标准物质。研制的没食子酸丙酯纯度标准物质是国内首创，能适应多种测量方法，可以促进和规范国内没食子酸丙酯的使用和产品的检验，也可以扩大国际互认范围，同时对保证有证标准物质供应、量值传递以及质量控制具有现实意义。

［1］ JJG 1006-1994 中华人民共和国一级标准物质研制技术规范［S］.

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［3］ 全浩，韩永志，赖喜平，等.标准物质及应用技术［M］.北京：中国标准出版社，2003.

［4］ SN/T 1785-2006 进出口化妆品中没食子酸丙酯的测定［S］.

［5］ 龚雪云，张磊，李华岑.高效液相色谱法测定饲料中的没食子酸丙酯［J］.光谱实验室. 2011(4): 1 969-1 971.

［6］ 王蕾，倪捷儿，张新波，等.差示扫描量热法测定7种药物纯度［J］.江苏药学与临床研究，2005，13(5): 30-32.

［7］ 周政政，郭永辉，杨德智，等.苦杏仁苷纯度标准物质研制和纯度标准值及不确定度分析方法研究［J］.医学导报. 2013，23(3): 1-4.

［8］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［M］.北京：中国医药科技出版社，2010.

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［12］ JJF 1059-1999 测量不确定度平定与表示［S］.

独立第三方食品安全检测站在京成立

全国健康产业工作委员会食品安全宣教中心不久前在京宣布成立独立的第三方食品安全检测站。该委员会秘书长李志海表示，公众对任何食品存疑，可直接和该检测站联系，委托检测，并公示结果。

李志海表示，该检测站目前设立在北京，主要检测农产品的农药残留、重金属、微生物、添加剂是否超标等项目。日常食用的牛奶、蔬菜、水果、粮食、肉类产品等都在检测范围之内。除了接受社会公众的委托检测之外，检测站还会不定期组织一些随机检测活动，并发布独立检测报告。据悉，检测站使用国产顶级设备，有国内知名食品安全专家组成的专家团。

据介绍，第三方检测机构作为中介服务类机构为社会提供各项检测服务并出具检测报告，报告有利于帮助公众了解真相，有的检测报告可作为公众维权的相关证据，但不具有法律效力，不可用于社会公正和法律诉讼。

（仪器信息网）

Development of Propylgallate Certified Reference Material

Shuai Fangwen， Wang Xiangfeng， Lei Yuping， Xiao Jiang， Cao Rong， Peng Lijuan
(Hunan Engineering Research Center for Pharmaceutical Excipients Co.，Ltd.， Changsha 410331， China)

Propylgallate certified reference material was developed. According to national Technical Norm of Primary Reference Material，the purity of propylgallate was determined by combined value assignment of high performance liquid chromatography (HPLC) and differential scanning calorimetry (DSC). The standard value and uncertainty of propylgallate CRM was (99.8±0.5)% (k=2，P=0.95). The purity of propylgallate could be used for pharmaceutical production，quality control and confirm evaluation of analysis method.

propylgallate; reference material; high performance liquid chromatography; differential scanning calorimetry

O657

：A

：1008-6145(2015)03-0005-04

10.3969／j.issn.1008-6145.2015.03.002

联系人：曹荣；E-mail: 510776817@qq.com

2015-02-02