规模化猪场猪伪狂犬病毒野毒感染的血清学调查

（浙江博信药业有限公司浙江湖州313307）

规模化猪场猪伪狂犬病毒野毒感染的血清学调查

占永祥，姜礼辉

（浙江博信药业有限公司浙江湖州313307）

本次实验主要是为了更好地了解浙江周边规模化猪场伪狂犬野毒感染的情况。本实验采用猪伪狂犬病毒野毒抗体ELISA诊断方法，对浙江周边5个规模化猪场不同日龄段商品猪和公母猪的292份猪血清进行检测分析。从检测结果可知：现阶段猪伪狂犬野毒感染情况比较严重，检测结果是平均野毒阳性率为34.2%，其中5个场的野毒抗体最低为17.4%，最高为66.7%。

猪；伪狂犬；血清学；感染情况

猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由猪伪狂犬病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起的一种高度接触性传染病。猪是该病的主要宿主和传染源，健康猪与患猪、带毒猪直接接触可感染该病。母猪出现返情、屡配不孕，妊娠母猪流产，产木乃伊胎、死胎和产弱仔；初生仔猪带毒感染率和死亡率可达100%；0～4周龄仔猪出现腹泻及神经症状，4～12周龄猪出现神经症状或呼吸道疾病，12周龄至出栏育肥猪感染后多耐过，不发病呈隐性感染，呈现呼吸道疾病，对抗生素不敏感。造成长期带毒、排毒，成为最危险的传染源，表现为生长缓慢、饲料报酬降低，严重影响养猪生产。许多国家和地区都报道过该病的流行，随着养猪业集约化规模化的发展，全国大部分省市已经呈现大面积的发病，并在许多猪场呈暴发流行趋势，给我国养猪业造成了巨大的经济损失。2014年12月-2015年3月笔者对浙江衢州、湖州5个规模场的猪血样进行伪狂犬野毒调查，并提出相应的防控措施，现报告如下：

1 材料与方法

1.1 调查对象

浙江衢州、湖州5个规模化养猪场的不同日龄段商品猪和公母猪的292份猪血清进行检测分析。

1.2 血液采集

2人1组，1人保定，1人采血。酒精棉球消毒，用5 mL一次性注射器从被检猪前腔静脉采集猪全血2～3 mL,采集后成斜面置保温箱中，带回分离血清，立即检测。

1.3 诊断试剂盒

中美合资某品牌公司生产的猪伪狂犬病病毒gpI抗体检测试剂盒（批号：281440），包括已包被好抗原的96孔酶联反应板，标准阴、阳性血清对照，辣根过氧化物酶（HRPO），酶标抗体，TMB底物溶液、终止液、稀释液、洗涤液等。

1.4 实验仪器

酶联免疫检测仪、移液器（20～200 μL、200～1 000 μL）与移液器匹配的吸头、恒温箱、离心管、记号笔等。

1.5 实验采用ELISA法

1）所有试剂盒在使用前一律恢复至18～26℃并使沉淀的盐溶解。使用前浓缩液应用蒸馏水进行10倍稀释。

2）在2个适当孔内分别加入100 μL 2倍稀释（1∶2）的阴性对照。

3）在2个适当孔内分别加入100 μL 2倍稀释（1∶2）的阳性对照。

4）在其余的孔内分别加入100 μL已稀释好的被检样品。

5）用封板膜将反应板封闭，在18～26℃条件下孵育60 min。

6）时间到后，甩掉孔中的溶液，用洗涤液洗板3～5次，300 μL/孔，最后一次拍干。

7）每孔加酶标抗体-辣根过氧化物酶100 μL，置18～26℃孵育20 min。

8）时间到后，甩掉孔中溶液，洗涤3～5次，最后一次拍干。

9）每孔加TMB底物100 μL，置18～26℃孵育15 min。

10）每孔加终止液50 μL，使反应终止。

11）结果判定，在酶标仪上测各孔OD650值。通过计算样品与阴性对照的比例（S/N）来确定伪狂犬野毒抗体的有无。阴性对照的平均值减去阳性平均值必须＞0.300，实验方能有效。如果实验无效操作可能有误，试验应重做。

S/N=样品OD650值/阴性对照平均OD650值，注：①S/N小于或等于0.60，样品确定为阳性；②S/N＞0.7，样品确定为阴性；③0.6＜S/N≤0.7，样品应重测。

2 检测结果

各猪场不同日龄段商品猪和公母猪伪狂犬病毒野毒感染的检测结果。

表1～3是衢州地区猪场，表4～5是湖州地区猪场，表6是整个结果阳性率统计。

表1 1场猪伪狂犬野毒感染的检测结果（2014年12月11日）

表2 2场猪伪狂犬野毒感染的检测结果（2014年12月18日）

表3 3场猪伪狂犬野毒感染的检测结果（2015年1月21日）

表4 4场猪伪狂犬野毒感染的检测结果（2015年2月10日）

表5 5场猪伪狂犬野毒感染的检测结果（2015年3月24日）

表6 5个场猪伪狂犬病毒野毒感染的检测结果统计表

3 实验分析

本次实验从表1～5可以看出伪狂犬带毒发病现象还是比较严重。猪场野毒感染最高66.7%，最低17.4%。说明猪伪狂犬病野毒感染仍普遍存在，对养猪业带来严重的经济损失。

4 防控措施

4.1 制定合理的免疫程序

初生仔猪在0～3日龄首次滴鼻免疫，越早越好，让疫苗占位三叉神经，起到保护作用，不受母源抗体干扰。每头乳猪滴鼻1头份，每鼻孔0.5头份。然后在10周龄和14周龄进行第2次、第3次免疫、每头肌注1头份，后备种猪配种前免疫2次，间隔4周每头肌注1头份/次；经产母猪、公猪每年免疫3～4次，每头肌注1头份/次。对表5检测出1头公猪野毒阳性，建议淘汰。对母猪胎龄较大并且带有野毒猪只及时淘汰，并且对发病保育猪紧急接种伪狂犬疫苗。

4.2 定期免疫监测

一是加强种猪和商品猪的伪狂犬病野毒抗体检测，及时了解本场野毒感染情况，通过淘汰野毒抗体阳性种猪，为猪场净化做准备条件。二是外引种猪和本场后备猪要适时检测，保证是伪狂犬病野毒阴性猪才能进入种猪群。防止带毒传染。同时由于疫苗抗原含量、母源抗体高低、猪群健康状况、生产管理情况。饲养管理条件不同，产生的免疫效果也不一样，因此，要应用gB-ELISA抗体检测法对免疫抗体进行检测，随时检测疫苗的免疫应答反应，确保猪群有足够免疫力，并且要检测其他病毒性疾病在该场的稳定性（PRRSV），防止对伪狂犬疫苗的干扰。4.3建立严格的生物安全措施

①猪场实施严格管理，外来车辆不得进入生产区。对猪群实行全进全出的方案，为了更好的防控。各栋猪舍和各个生产区员工和用具相对独立；②坚持开展灭鼠工作。鼠是伪狂犬病病毒的携带者，因此，消灭猪场的鼠类对控制该病具有重要意义；③严格执行消毒制度，2次/d猪栏的打扫，每周定期对猪体、猪舍、用具、周围环境等进行2次消毒和清理；猪场门口要设立消毒池，进出猪场的员工必须洗澡、更衣、换鞋、洗手和紫外线消毒，对装饲料进生产区的车辆也要严格消毒；④禁止员工从外带猪肉进入生产区；猪场内不能饲养其他动物；⑤安排专门的员工对病死猪尸体及胎衣等进行无害化处理，粪尿进入沼气池发酵处理，减少病原传播。

4.4 饲养管理措施

①提高猪群饲养管理和保健预防，把好原料关，防止霉菌毒素侵入猪只，造成猪只抵抗力下降和霉菌毒素中毒引起的免疫抑制；②对猪舍“三度”（温度、湿度、空气新鲜度）加强控制，提高猪群自身抵抗力；③加强其他病毒性疾病的防控，防止其他疾病对猪伪狂犬病疫苗的免疫干扰作用，避免引起免疫失败。■（编辑：赵晓松）

10.3969/j.issn.1008-4754.2015.05.028