HBV-DNA水平与乙型肝炎两对半模式的相关性

HBV-DNA水平与乙型肝炎两对半模式的相关性

谭斌杨文才李嘉龙丽余丽娅

(铜仁市人民医院检验科,贵州铜仁554300)

摘要〔〕目的探讨乙肝病毒(HBV)-DNA定量结果与乙型肝炎两对半模式的相关性。方法收集该院感染科2011年6月至2013年12月住院和门诊收治行HBV-DNA定量检测和乙肝两对半检查的疑似乙肝患者600例，酶联免疫吸附(ELISA)法测定乙肝两对半，荧光定量PCR法定量HBV-DNA，分析乙肝两对半与HBV-DNA定量的关系。结果大三阳(HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性)者HBV-DNA阳性检出率和HBV-DNA水平高于小三阳(HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性)患者(P<0.05)；乙型肝炎两对半不同类型HBV-DNA 阳性检出率和定量水平也不同，有相同的两对半模式者HBV-DNA 含量也可能不同；HBeAg阳性与HBV-DNA水平呈正相关(P<0.05)。结论HBV-DNA水平可反映HBV复制水平，同时检测乙肝两对半可以提高临床检测效果。

关键词〔〕HBV-DNA；病毒复制；乙型肝炎两对半

中图分类号〔〕R512.6+2〔

第一作者：谭斌(1971-)，男，副主任检验师，主要从事基因诊断研究。

乙型肝炎主要传播途径有血液传播、性传播、母婴传播〔1,2〕。据统计全世界超过50%人感染过乙型肝炎病毒(HBV)，无症状病毒携带者大约2.8亿人，我国占1亿〔3〕，大约5%转为慢性肝炎难以治愈〔4〕。当前临床上诊断乙型肝炎主要通过检测乙肝两对半和HBV-DNA。本文定量分析HBV-DNA水平，并探讨其与乙型肝炎两对半模式的相关性。

1资料与方法

1.1一般资料收集我院感染科2011年6月至2013年12月住院和门诊收治行HBV-DNA定量检测和乙肝两对半检查的疑似乙肝患者600例，其中男326例，女274例；年龄45～80〔平均(52.27±5.79)〕岁。都经过血清乙肝五项检查确诊(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)，总共有五种组合类型：Ⅰ(大三阳)：HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性；Ⅱ(小三阳)：HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性；Ⅲ：HBsAg、HBeAg阳性；Ⅳ：HBsAg、抗-HBc阳性；Ⅴ：阴性。纳入标准：①所有患者均符合临床乙型肝炎诊断标准，年龄45～80岁；②可以收集到患者检查和治疗的所有资料，并且发现未免疫系统或者恶性肿瘤性疾病；③符合伦理道德，家属或者患者签署了知情同意书。排除标准：①患有严重的器官衰竭性疾病，或者内分泌性疾病，或者合并有其他肝炎疾病，比如肝、肾衰竭、糖尿病等；②凡对试验研究方案不依从、不配合、拒绝参加试验者及试验过程中不按照规定进行检查，或者在研究期间采用了其他治疗措施或者转院治疗患者；③在治疗过程中病情突然加重不能再参加试验者。

1.2仪器和试剂达安DA7600 PCR仪；乙肝五项应用美国biotek全自动酶标仪测定；HBV-DNA定量检测试剂盒(广州达安基因公司)。

1.3研究方法抽取患者空腹静脉血4 ml，3 000 r/min离心10 min,留取血清，-20℃保存待用。乙肝五项测定：应用酶联免疫吸附试验测定(ELISA法)，由我院检验科测定。乙肝两对半正常值〔5〕:HBsAg<0.5 ng/ml 、HBsAb≤10 MIU/ml、HBeAg≤0.5 PEI U/ml 、HBeAb≤0.2 PEI U/ml、HBcAb≤0.9 PEI U/ml。HBV-DNA定量检测：应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法：①血样RNA的抽提；②RNA质量检测；③样品cDNA合成；④样品管家基因实时定量PCR。⑤模板；⑥PCR，所有cDNA样品分别配置实时定量 PCR反应体系。⑦引物设计(应用Primer Premier 5.0软件)。⑧电泳；PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。结果判断：≥103copies/ml为阳性,<103copies/ml为阴性。

2结果

2.1HBV-DNA阳性率及定量大三阳患者HBV-DNA阳性检出率和HBV-DNA平均对数定量均高于小三阳患者，其中患者大三阳HBV-DNA水平最高(P<0.05)，见表1。

2.2HBV-DNA定量与e抗原的关系HBeAg阳性定量与HBV-DNA对数定量间呈正相关(P<0.05)。见表2。

表1　HBV-DNA阳性率及定量

与Ⅱ型比较:1)P<0.05

表2　HBeAg定量与HBV-DNA对数定量的关系

3讨论

乙型肝炎是我国病毒性肝炎中最重要的病原〔6〕。临床上主要通过乙肝两对半的阳性阴性判断是否感染HBV〔7,8〕，但是常规乙肝两对半检测并不能特异性诊断HBV在患者体内的复制及传染的或者只能粗略估计病毒复制水平的初步检查〔9〕，乙肝两对半吸头两对半对病情严重程度评估参考性不大〔10〕。随着医学科技的发展，基因诊断技术也相应成熟，荧光定量PCR法是疾病诊断的一种重要手段，由专门PCR仪封闭式的完成排除了很多干扰因素〔11〕。HBV-DNA检查是判断如何治疗的参考依据，一般情况DNA水平越高，传染性越强。

本研究说明大三阳患者体内病毒复制和传染最严重。乙型肝炎两对半不同类型其HBV-DNA 阳性检出率和定量水平也不同。因为HBeAg为乙肝e抗原为病毒复制标志，这与HBV-DNA对数定量水平具有相同的作用。

综上所述，HBV-DNA水平变化可以反映HBV复制水平和传染能力大小，同时联合检测乙肝两对半，可以提高临床检测效果，有助于临床的诊断治疗以及预防措施效果评价，同时也可以应用到乙型肝炎早期诊断。

4参考文献

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3张宝华,黄婷.乙型肝炎病毒检测方法的相关性分析〔J〕.现代检验医学杂志,2010;25(4):69-71.

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5黄莲芬.乙型肝炎血清标志物检测模式与DNA检测结果的相关性探讨〔J〕.中国医药指南,2011;9(15):101-3.

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7陈学民,凡任芝.定量PCR法检测HBV-DNA与HBV血清标志物的相关性〔J〕.临床输血与检验,2005；7(1)：18-9.

8黄华泥,张业久,徐五星.HBV-DNA定量检测结果与乙肝两对半模式相关性分析〔J〕.现代中西医结合杂志,2010；19(31):3459-60.

9贺巧凤.HBV-DNA含量与乙型肝炎病毒血清标志物的相关性研究〔J〕.检验医学与临床,2013；10(3):353-5.

10王琦.乙型病毒性肝炎患者的两对半检查结果和HBV-DNA检验结果分析〔J〕.中国实用医药,2013；8(35):67-9.

11黄之品,杨伟,李增彩,等.216例乙肝患者HBeAg、 HBV DNA、PreS1-Ag相关性的临床分析〔J〕.辽宁医学院学报,2014；25(3):42-3.

〔2014-11-25修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)