枸橼酸诱发豚鼠咳嗽模型实验条件

枸橼酸诱发豚鼠咳嗽模型实验条件

卢素红张超然1吴先林2徐拥建

(暨南大学医学院，广东广州510632)

摘要〔〕目的研究可能影响枸橼酸诱发豚鼠咳嗽模型的多种因素，减小外界因素对模型制作的影响，复制出稳定的豚鼠咳嗽模型。方法比较不同体重、性别、雾化容积和雾化时间条件对枸橼酸诱发豚鼠咳嗽的影响。结果在相同实验条件下，体重180～220 g豚鼠的咳嗽次数明显多于体重280～320 g；体重180～220 g豚鼠咳嗽潜伏期明显短于体重280～320 g；5 L雾化容积中豚鼠咳嗽的次数明显比3 L多；雌性豚鼠的咳嗽潜伏期长于雄性；性别和枸橼酸雾化时间对豚鼠咳嗽次数的影响不明显。结论体重和雾化容积对豚鼠咳嗽次数可产生明显影响，在运用枸橼酸制作豚鼠咳嗽模型时应严格控制实验条件，有利于复制出稳定的咳嗽模型。

关键词〔〕咳嗽模型；枸橼酸

中图分类号〔〕R56〔

1广东省中医院2暨南大学第一附属医院

第一作者：卢素红(1982-),男,博士,主要从事心脑血管病研究。

咳嗽主要涉及环节包括：传入神经、呼吸道神经末梢感受器、延髓咳嗽中枢和传出神经。人体呼吸道黏膜上神经末梢感受器上分布着许多机械感受器、化学感受器和肺牵张感受器，当黏液、灰尘或异物等机械刺激及烟熏、毒气等化学刺激呼吸道感受器时，支气管痉挛引起肌张力增加，神经末梢感受器接受信号，激活“咳嗽受体”，将传入冲动沿迷走神经传入纤维，传至延髓咳嗽中枢孤立束神经核区，在该部位整合各种传入冲动，兴奋位于延髓背侧部的咳嗽中枢，引发咳嗽〔1〕。关于咳嗽动物模型的论述均以少数经典、具代表性的动物模型为主，如：多采用机械、化学和电刺激等方法刺激动物的神经和感受器，引发咳嗽。本实验室比较不同体重、不同性别、不同雾化容积和不同雾化时间条件，对枸橼酸诱发豚鼠咳嗽的影响，旨在为枸橼酸致豚鼠咳嗽模型提供最佳的方法学依据。

1材料与方法

1.1实验动物Hartley豚鼠，SPF级，180～220 g，100只；280～320 g，30只，购自广东省医学实验动物中心。实验动物合格证号：0106662，使用许可证号：SYXK(粤)2008-0003，广东省科学技术厅签发。豚鼠饲养笼材质为不锈钢，饲养笼尺寸为55 cm×37 cm×40 cm，群养。动物房环境温度范围控制在19℃～26℃，日温差不超过4℃，相对湿度范围控制在40%～70%，换气次数为8～10次/h，12 h照明/12 h黑暗明暗交替，工作照度为150-300Lx，动物照度为100-200Lx。

1.2材料枸橼酸分析纯，广州化学试剂厂，规格：500 g/瓶，批号：20100204-2。电子天平BS224S、BP34，2013年已检定，均为一年检定一次，均为北京赛多利斯仪器系统有限公司产品。超声雾化器为广东粤华医疗器械厂有限公司产品。

1.3方法试验前进行动物筛选：将豚鼠分别置于5 L烧杯内，烧杯用保鲜膜密闭，开一小口与超声雾化器的玻璃管相连，采用喷雾器默认的最大喷雾力度(MAX)，超声雾化器将17.5%枸橼酸溶液喷入烧杯，持续雾化0.5 min(30 s)后，立即将超声雾化器的雾化管与烧杯断开。在通入枸橼酸的同时，用秒表计时，记录自喷雾起5 min内豚鼠咳嗽次数(豚鼠引嘴并听到响亮咳声，为一次咳嗽)，低于10次者，不予选取〔2〕。将筛选合格的Hartley豚鼠100只，平均分成5组，见表1。在筛选结束后第三天同上法引咳，在喷雾枸橼酸溶液的同时，用秒表计时，记录豚鼠5 min内咳嗽次数(次)和咳嗽潜伏期(s)。咳嗽潜伏期〔3〕指喷雾枸橼酸开始时间至发生咳嗽所需的秒数，咳嗽的表现为：豚鼠咳嗽声响亮，应以听到计算。

1.4统计学方法采用SPSS13.0软件进行方差分析，当组间方差齐时，组间比较采用Student-T检验(非配对T检验)；组间方差不齐时，采用校正的Student-T检验。

2结果

2.1性别对豚鼠咳嗽次数的影响B组咳嗽潜伏期明显长于A组(P<0.05)，B组咳嗽次数略少于A组，差异不显著(P>0.05)。见表1。

2.2体重对豚鼠咳嗽次数的影响C组比A组咳嗽潜伏期明显延长，咳嗽次数明显减少(P<0.01)。见表1。

2.3雾化时间对豚鼠咳嗽次数的影响D组与A组咳嗽次数和咳嗽潜伏期差异不显著(P>0.05)。见表1。

2.4雾化容积对豚鼠咳嗽次数的影响E组咳嗽次数明显低于A组(P<0.05)，但咳嗽潜伏期差异不显著(P>0.05)。见表1。

表1　各种实验条件对枸橼酸致豚鼠咳嗽的影响( n=20)

与A组比较：1)P<0.05，2)P<0.01

3讨论

化学刺激法致豚鼠雾化吸入枸橼酸，引发咳嗽，具有雾化时间和浓度可控，操作简单、豚鼠咳嗽声大、易于辨别等优点。枸橼酸致豚鼠咳嗽模型是常用的动物咳嗽模型，但目前各文献对枸橼酸诱发咳豚鼠咳嗽模型的各种试验条件记载不一致，雾化时间为10、30、60 s等、雾化容积有3、5 L烧杯等。

年龄阶段的不同导致了体重差异，而不同阶段的年龄对化学刺激的敏感性是不一致的，如儿童支气管黏膜血管丰富，黏液分泌量少，纤毛运动差而清扫能力弱，故对化学刺激更加敏感。一般来说，年龄越小，对化学刺激越敏感，所以体重轻的豚鼠对枸橼酸更敏感，咳嗽次数多、咳嗽潜伏期短。

在实验过程中发现，雌性动物的咳嗽潜伏期长于雄性，与刘军等〔4〕的研究一致，考虑原因是雌激素对机体的保护作用，导致雌性豚鼠更耐受，这点提示在实验过程中，不同受试物组的雌雄动物数应一致，尽量避免因性别而导致的模型差异。

在相同条件下，雾化时间30 s与60 s虽未见显著性差异，但雾化结束后，雾化时间60 s的豚鼠精神状态较差，所以在实验中应选择引咳效果佳且对动物造成损伤小的最佳雾化时间。

本文5 L雾化容积对模型的影响与王静波〔5〕的研究一致，考虑与通氧情况有关。在实验过程中，应注意超声雾化器药杯内枸橼酸的体积量会影响雾化浓度，所以实验过程中要统一药杯内枸橼酸的容积。本研究中，药杯内每次添加枸橼酸溶液的体积为20 ml，做完3只豚鼠后更换枸橼酸溶液，可以防止挥发。不同的雾化器即使雾化浓度相同，也可能会存在一定的差异。因此，雾化过程中要将各组动物均匀分到各个雾化器。总之，影响动物实验结果的因素有很多，包括动物自身因素、饲养环境因素、营养因素、实验技术因素等，因此必须严格控制实验条件才能获得准确、可重复性的动物模型。

4参考文献

1邓伟吾.咳嗽的发生机制与临床〔J〕.内科理论与实践，2006；1(1)：50-3.

2徐叔云.药理实验方法学〔M〕.北京：人民卫生出版社，2002：1363-4.

3罗霄山，许家骝，张诚光，等.咳喘乐颗粒镇咳、祛痰、平喘作用的实验研究〔J〕.中药材，2004；27(7)：520-1.

4刘军，石璐，黄雷雷，等.枸橼酸引咳豚鼠动物模型的方法学研究〔J〕.四川医学，2009；30(4)：463-4.

5王静波.枇杷花止咳抗炎药效学研究〔D〕.成都：四川师范大学，2009：20-1.

〔2014-10-26修回〕

(编辑安冉冉/张慧)

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