电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠免疫功能的影响

电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠免疫功能的影响

严兴科董莉莉刘安国韩林王军燕马重兵朱田田何天有

(甘肃中医学院，甘肃兰州730000)

摘要〔〕目的探讨电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型的免疫调节机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物组、电针组，皮内注射同种异体雄性SD大鼠前列腺蛋白提纯液，辅以双重免疫佐剂复制自身免疫性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型。造模后电针组、药物组分别给予电针“三阴穴”、舍尼通灌胃治疗15 d。观察各组动物前列腺组织湿重及系数、形态结构；放免法检测前列腺组织中抗体IgG、局部组织细胞因子白介素(IL)-2、IL-8的变化。结果造模后模型组前列腺重量及系数与空白组相比显著增高(P<0.05)，病理观察显示，模型组动物前列腺组织形态及结构明显受损。与空白组比较，模型组大鼠前列腺组织匀浆中IgG含量明显增高(P<0.05)，IL-2、IL-8高表达(P<0.05，P<0.01)。治疗后，电针组动物腺体湿重及系数均明显下降(P<0.05，P<0.01)，病理变化明显减轻；局部前列腺组织IgG含量明显降低(P<0.05)，IL-2、IL-8表达显著减轻(P<0.05，P<0.01)。结论电针“三阴穴”能够减少局部抗体IgG的分泌，调节局部细胞因子IL-2、IL-8的表达，减轻组织局部免疫亢进，抑制前列腺组织形态结构的损伤，从而起到治疗慢性非细菌性前列腺炎的作用。

关键词〔〕慢性非细菌性前列腺炎；电针；“三阴穴”； IgG；IL-2；IL-8

中图分类号〔〕R245〔

基金项目：国家自然科学

The impact of electroacupuncture at Sanyin points on the immunologic function of chronic abacterial prostatitis rat

YAN Xing-Ke,DONG Li-Li,LIU An-Guo,etal.

Gansu University of TCM,Lanzhou 730000,Gansu,China

Abstract【】ObjectiveTo study the immunologic mechanism of electroacupuncture at Sanyin points on chronic abacterial prostatitis rat. Methods48 male rats were divided randomly into normal,model,drug and electroacupuncture groups,12 rats in each group. The animal models were made by SC purified prostate protein twice with immunologic adjuvant,and the rats in electroacupuncture and drug groups were treated by electroacupuncture at Sanyin points and fed Cernilton for 15 d. The changes of prostate weight,coefficient,pathology and contents of IgG,expressions of IL-2 and IL-8 in prostate homogenate were observed. ResultsCompared with those of normal group,the prostate weight and coefficient were significantly increased in model group(P<0.05),the content of IgG was significantly increased(P<0.05),the levels of IL-2,IL-8 were highly expressed(P<0.05,P<0.01),prostate tissue's morphology and structure were significantly impaired in model group;compared with those of model group,the prostate weight and coefficient were significantly decreased in electroacupuncture group after treatment (P<0.05 or P<0.01),pathological changes were reduced significantly,the content of IgG was decreased significantly(P<0.05),the expressions of IL-2,IL-8 were significantly decreased(P<0.05 or P<0.01),and the pathological manifestation of chronic inflammation was significantly improved. ConclusionsElectroacupuncture at Sanyin points could effectively improve the immune function of chronic abacterial prostatitis and promote the recovery of inflammation.

【Key words】Chronic abacterial prostatitis;Electroacupuncture;Sanyin points;IgG;Interleukin-2;Interleukin-8

第一作者：严兴科(1974-)，男，教授，博士，硕士生导师，主要从事针灸调节效应的生物学机制研究。

慢性非细菌性前列腺炎(CAP)是泌尿科的常见病、多发病〔1〕，但病因目前尚不明确，其中自身免疫反应因素在CAP发病机制中的作用日益受到重视。近年来国内报道针灸治疗CAP具有明显优势〔2〕。本项目组在临床中总结出的“三阴穴”治疗本病具有特殊疗效，总有效率达85%〔3〕。本文拟进一步通过动物实验探讨其作用机制。

1材料与方法

1.1实验动物雄性SD大鼠(SPF级)48只，3月龄，体重(240±20)g；另取20只体重240～300 g SD大鼠，用于取前列腺组织匀浆制作前列腺蛋白。SD大鼠均由甘肃中医学院动物实验中心提供，实验动物质量合格证：SCXK(甘)2004-0006。

1.2主要实验药品和试剂Freund完全佐剂(美国Sigma公司提供，批号：F-5506)；蛋白定量测试盒(双缩脲法)(南京建成生物制品所提供，批号：20070125)；舍尼通(普适泰)(南京美瑞制药有限公司，批号：国药准字H20000486)；白百破疫苗(甘肃省卫生防疫站)；白介素(IL)-2、IL-8放免试剂盒(兰州军区总医院安宁分院核检验科提供，批号：S20063090、S20063089)；IgG放免试剂盒(中国原子能科学研究所提供，批号：S10940082)

1.3主要仪器Biofuge Fresco低温高速离心机〔德国贺力氏(Heraeus)公司〕；Uv-2401 PC型紫外分光光度计〔日本岛津(SHIMADZU)公司〕；MDF-71超低温冰箱〔日本三洋(SANYO)公司〕；G6805 型电针治疗仪(上海医疗器械高技术公司)；华佗牌针灸针(0.32 mm×15 mm；苏州医疗用品厂有限公司)

1.4实验场所甘肃中医学院SPF级动物实验室，设施使用合格证为SYXK(甘)2004-0006。

1.5实验方法

1.5.1动物分组48只SD大鼠依体重编号，按随机数字表法分为空白组、模型组、药物组、 电针组，每组12只。

1.5.2模型复制〔4〕(1)大鼠前列腺蛋白提纯液的制作：取240～300 g雄性大鼠10只，脱颈椎处死，在无菌条件下剥取前列腺组织，用冷生理盐水洗净，加入含0.5%Triton100的生理盐水溶液，在冰水浴上用玻璃匀浆器制成匀浆，10 000 r/min离心，30 min，取上清液；用721分光光度计，以牛血清白蛋白溶液为标准蛋白溶液，采用双缩脲法进行蛋白含量测定；最后用0.1 mol/L pH7.2的PBS缓冲液稀释为15 mg/ml浓度。(2)免疫注射：除空白组外，其他各组大鼠以乙醚麻醉，腹腔注射白百破疫苗0.5 ml，多点皮内注射大鼠前列腺蛋白提纯液和Freund氏完全佐剂(比例为1∶1的混悬液)1.0 ml，正常对照组分别行腹腔及皮内多点注射0.9%生理盐水注射液0.5、1.0 ml，以上各组均分别于第0、30天2次注射。

1.5.3选用穴位三阴穴(左右两侧夹阴穴和重阴穴)定位参照有关文献〔5〕。夹阴1位于平耻骨联合上缘左侧腹股沟处；夹阴2位于平耻骨联合上缘右侧腹股沟处；重阴在会阴穴与阴囊根部之间取穴。

1.5.4处理方法造模完成后第1日开始，电针组给予电针三阴穴处理。电针组大鼠以仰卧位捆绑于鼠板上，以棉签蘸碘伏擦拭三阴穴，消毒局部皮肤，以32号1寸毫针针刺夹阴1、夹阴2穴，进针1 cm；以32号1寸毫针针刺重阴穴，进针1.5 cm。接通电针仪，为统一刺激标准，规定：重阴(左正，右正)，左夹阴(左负)，右夹阴(右负)，疏密波，频率10 Hz，强度以针柄或肌肉微颤，动物保持安静为度。留针20 min，每日1次，共15次。药物组大鼠用舍尼通普适泰片研末，蒸馏水溶解，灌胃喂饲，给药剂量按动物体表面积比率换算等效剂量为13 mg/kg，给药体积为1 ml/100 g，每日1次，连续15 d；正常组和模型组同样抓取，但不予任何治疗。

1.5.5标本采集及检测方法在末次给药、针刺后，称量各组大鼠体重，各组动物禁食禁水24 h，脱颈处死各组动物。取出前列腺组织，剥离被膜及周围脂肪组织，生理盐水涮洗，滤纸吸干，电子天平称重，计算各组大鼠前列腺指数。前列腺指数=〔前列腺湿重(g)/大鼠体重(g)〕×100%。将各组大鼠前列腺以中轴均分两份，右侧部分保存于4%多聚甲醛/0.1 mol/L PBS(pH7.2)固定液中，室温下经水洗、梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋等处理后，切片备用。HE染色制作病理切片，镜下观察前列腺局部病理变化。将各组动物脱颈处死，取前列腺组织，沿腹叶中线取左半侧组织匀浆，将匀浆液以3 000 r/min离心15 min，将上清液分装3个试管，IgG、IL-2、IL-8按照试剂盒说明书采用放免法检测。

2结果

2.1一般状态观察造模期间，空白组动物毛色光泽，食欲良好，活动自如，垫料干湿适中；造模动物逐渐显现食欲减少，毛色略显枯槁，自主活动减少，垫料明显偏湿，气味腥臊。治疗开始后药物组及电针组动物经处理状态逐渐恢复。实验期间各组动物均无死亡。实验前后各组动物体重无显著差异(P>0.05)。见表1。

2.2电针“三阴穴”对前列腺湿重及系数的影响造模后模型组前列腺重量及系数与空白组相比显著增高(P<0.05)；而治疗后药物组及电针组前列腺重量及系数较模型组均明显降低(P<0.05,P<0.01)，药物组与电针组比较无显著差异(P>0.05)。见表2。

表1　实验前后各组动物体重比较

表2　各组动物前列腺湿重及前列腺系数 ± s， n=12)

与空白组比较：1)P<0.05；与模型组比较：2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

2.3电针“三阴穴”对前列腺组织学的影响空白组：大鼠前列腺被膜、纵隔均正常，腺上皮为单层柱状上皮，位于基底部，腺泡腔内有少量淡红色分泌物，腺泡之间排列紧密。模型组：前列腺组织血管扩张，腺上皮增生，可见立方、柱状、高柱状、假复层等表现，腺上皮细胞核染色深浅不一，胞质嗜碱性，腺腔扩张，腔内有分泌物，间质疏松，有大量慢性炎症细胞浸润。药物组：可见部分腺上皮细胞增生，排列紊乱，腺腔增大，部分含有分泌颗粒和慢性炎症细胞，间质散见血管充血及纤维组织增生。电针组：腺上皮细胞增生改善，排列整齐,间质水肿、充血，炎细胞浸润较模型组明显减轻，腺泡中央未见炎细胞充盈。

2.4前列腺组织匀浆中IgG及IL-2水平变化模型组大鼠前列腺组织匀浆中IgG、IL-2的含量明显高于空白组(P<0.05)；与模型组相比，电针组大鼠前列腺局部IgG、IL-2水平明显降低(P<0.05)；药物组大鼠IL-2水平也明显降低(P<0.05)；药物组与电针组大鼠前列腺局部IgG及IL-2水平均无显著性差异(P>0.05)。见表3。

2.5前列腺组织匀浆中IL-8的变化模型组大鼠前列腺组织匀浆中IL-8(ng/mg)的含量(0.151 0±0.010 2)明显高于空白组(0.130 2±0.012 0)(P<0.01)；与模型组相比，药物组(0.135 9±0.174 8)及电针组大鼠前列腺组织匀浆中IL-8水平(0.132 5±0.018 2)均显著降低(P<0.01)；药物组与电针组比较无显著差异(P>0.05)。

表3　各组前列腺组织匀浆中IgG、IL-2

3讨论

本实验表明，造模后前列腺组织以慢性炎症的病理变化为主，以上皮细胞和腺体的增生与间质部分的纤维化增生为主要特点，炎性细胞多以淋巴细胞和巨噬细胞的浸润为主。电针三阴穴可以改善血管的通透功能，影响组织的渗出、增生、变质过程，使前列腺湿重及系数下降，改善前列腺组织的病理变化。

IgG是血清中含量最高的抗体，为机体抗感染的主要抗体，当机体罹患某些疾病或机体内外环境发生了某些特定的变化，可以导致前列腺局部抗原(PSA)的暴露，刺激血液、组织中的淋巴细胞通过释放细胞因子而调节抗体的生成，发挥免疫调理及ADCC作用，也可通过经典途径活化补体。本实验结果提示前列腺局部处于炎症状态；针刺有助于改善局部的体液免疫反应；电针三阴穴在改善慢性非菌性前列腺炎症方面取得了与口服舍尼通相近的疗效。

IL-2主要由活化T淋巴细胞产生。CAP患者前列腺液(EPS)中含有较高水平IL-2，由此推测，CAP的发病与IL-2介导参与的细胞免疫有一定的相关性。IL-8是一种强效相对低分子质量炎症趋化因子。针刺有助于降低局部细胞因子的表达，从而发挥其治疗作用；本研究表明电针三阴穴可取得和舍尼通相近甚至优于舍尼通的疗效。

由上表明：电针三阴穴可明显改善自身免疫性CAP大鼠前列腺组织的炎症状态及病理损伤，降低前列腺局部IgG水平，降低相关细胞因子IL-2、IL-8的表达。即电针三阴穴通过调节CAP大鼠的免疫功能，改善炎症对前列腺组织的病理损伤，起到防治前列腺炎的作用。

4参考文献

1Krieger JN，Lee SW，Jeon J,etal.Epidemiology of prostatitis〔J〕.Int J Antimicrob Agents，2008；31(1):85-90.

2严兴科，崔海福，陈程，等.针灸治疗慢性前列腺炎临床随机对照文献的Meta分析〔J〕.时珍国医国药，2012；23(10)：2592-3.

3何天有，赵耀东，雒成林.针刺三阴穴治疗慢性前列腺炎临床观察〔J〕.中国针灸，200；24(10):697-8.

4叶伟成，薛慈民，徐兆东，等.免疫佐剂法制作慢性非细菌性前列腺炎小鼠模型的方法〔J〕.中国男科学杂志，2001；15:29-32.

5何天有，韩林，李海.针刺“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠局部免疫功能的影响〔J〕.甘肃中医学院学报，2007；24(5):9-11.

〔2013-07-30修回〕

(编辑曲莉)