益艾康胶囊对鼠白血病病毒致免疫缺陷小鼠免疫功能的影响

益艾康胶囊对鼠白血病病毒致免疫缺陷小鼠免疫功能的影响

魏征1徐立然2

(河南省中医药研究院肿瘤科，河南郑州450004)

摘要〔〕目的建立Friend型鼠白血病病毒(FLV)引起的BALB/C小鼠所致的免疫缺陷动物模型，探讨益艾康胶囊对其免疫功能的影响。方法对FLV毒株传代两次，随机分为FLV模型组、齐多夫定(ATZ)对照组、唐草片对照组、益艾康大中、小剂量组。模型组灌以等量生理盐水，ATZ组按200 mg/kg体重灌胃，连续21 d。无菌取脾，测定脾/胸腺指数。结果与模型组相比，益艾康组对脾大均有较好的抑制作用，但效果稍逊于AZT组。益艾康组与唐草片组亦能增加胸腺重量，两者之间没有差异。结论益艾康胶囊可以抑制FLV致免疫缺陷小鼠的脾肿大，并降低脾指数，保护脾脏，且可以增加FLV致免疫缺陷小鼠胸腺重量和胸腺指数。

关键词〔〕益艾康胶囊；鼠白血病病毒；胸腺指数；脾指数

中图分类号〔〕R965.1；R975.5〔

基金项目：国家“十一五”科技重大专项基金资助(2008ZX10005-002)

通讯作者：徐立然(1959-)，男，主任医师，博士生导师，主要从事中医内科学研究。

1南京中医药大学2河南中医学院第一附属医院

第一作者：魏征(1983-)，男，在读博士，主治医师，主要从事中西医结合治疗恶性肿瘤研究。

获得性免疫缺陷综合征(艾滋病)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的传染性疾病，其感染性强，死亡率高，以免疫系统损害和机会性感染为主要的特征，病变范围可波及人体各重要器官和组织〔1〕。益艾康胶囊是导师夏祖昌教授带领河南省中医药专家长期前往艾滋病高发区巡诊后拟定的临床经验方，临床疗效确切，后经剂型改造，目前为国家《中医药治疗艾滋病试点项目临床技术》指定用药，也是我国中医药治疗艾滋病较大范围使用的唯一中医药制剂〔2～4〕。艾滋病动物模型的探索开始于19世纪80年代，当时的艾滋病模型主要有十二种〔5〕，但是随着实践的检验，牛，羊，马由于其临床表现和艾滋病人的临床表现差距较大，其体积庞大，不易饲养，培养周期长等原因已经不适宜作为艾滋病的动物模型。现在全球艾滋病动物模型研究主要集中在猴免疫缺陷病毒(SIV)，猫免疫缺损病毒(FIV)和免疫缺陷鼠艾滋病模型(Murine AIDS)〔6，7〕。鼠白血病病毒——Friend leukaemia virus (FLV)是由Carlotte Friend教授于1957年在研究一种可以在小鼠间传染的鼠白血病中发现的，是第一种被确认可以在动物体内引起肿瘤的病毒。由于FLV本身是一种逆转录病毒，又能够在敏感小鼠体内引起红白血病和获得性的免疫抑制，而成为研究肿瘤机制、抗逆转录病毒治疗以及病毒基因与宿主作用机制的常用小动物模型〔8～10〕。脾脏和胸腺是主要的免疫器官，病毒入侵后，脾脏和胸腺发生肿大，观测胸腺指数和脾指数是为了更好地研究益艾康胶囊对免疫系统的影响〔11〕。

1材料与方法

1.1药物与试剂益艾康胶囊：河南省中医药研究院附属医院制剂室生产，主要由人参、山药、茯苓、白术、当归、黄芩等组成。国家中医药管理局《5省中医药治疗艾滋病项目临床技术方案》制剂，批件〔41豫Z20000009〕提供。齐多夫定(ATZ)：阳性西药对照药物；国药准字H20020322；东北制药总厂；批号：071201。唐草片：阳性中成药对照药物；北京金卫制药股份有限公司生产，由木棉花、老鹳草、龙葵、金银花、白花蛇舌草、糯稻根、黄芪、甘草、诃子等二十多味中药组成。片剂，0.5 g/片，100片/瓶。国药准字H20040074，批号080301。FLV毒株，购自美国菌种保藏中心，并由北京中原公司在国内代购。经传代后冷冻液氮罐中低温保存。

1.2仪器Biofuge Fresco台式离心机(德国贺力士) YJ-875医用净化工作台(苏州净化设备公司) 分析天平(Metler AB204-E德国梅特勒)

1.3动物BALB/C小鼠76只，体重(16±2)g左右，雌性，由河南省医学实验动物中心提供，许可证号：SYXK(豫)2008-0012，同时提供饲料，50%～75%湿度下饲养小鼠3 w，隔2 d称量小鼠体重一次。

1.4方法

1.4.1FLV免疫缺陷小鼠艾滋病模型制备取BALB/C小鼠，雌性，适应性喂养1 d后，将液氮罐中冻存的FLV感染小鼠的10%脾脏悬液取出，融化后用生理盐水稀释75倍，给小鼠腹腔注射0.5 ml脾悬液的稀释液，并留出10只小鼠不接种作为正常对照组。接种过的小鼠按照体重随机分为FLV模型组、ATZ组、唐草片组、益艾康大、中、小剂量组。常规喂养。小鼠接种第2天开始给药。正常对照组和FLV模型组灌胃生理盐水0.4 ml/d，益艾康大、中、小剂量组分别按照4、2、1 g·kg-1·d-1(相当于临床32、16、8倍)的剂量灌胃给药。ATZ组按200 mg·kg-1·d-1剂量灌胃给药，唐草片给药体积为0.2 ml/10 g。每天给药一次，连续给药21 d。最后一次给药后1 h，称量小鼠体重，脱臼处死，无菌剖取脾脏和胸腺并称重。

1.4.2脾指数和胸腺指数测定计算各组小鼠的脾指数和胸腺指数。

1.5统计学方法应用SPSS13.0软件进行方差分析。

2结果

2.1对脾重及脾指数的影响AZT组的脾脏接近于正常对照组，脾脏增大不明显，其余各组均出现脾大，其中模型组脾大最明显。和模型组相比，益艾康小、中剂量和唐草片组对脾大的抑制较好(P<0.05)，且益艾康小剂量组稍优于唐草片组。和模型组对比，AZT组最小程度的减少脾指数。其次是益艾康中剂量组，接着是唐草片组、益艾康小剂量，益艾康大剂量组，说明益艾康中剂量组和唐草片组有相似降低脾指数的作用，但效果不如AZT组。见表1。

2.2对胸腺重量及胸腺指数的影响模型组的胸腺重量减少明显，胸腺受抑制较显著，余组均能一定程度的增加胸腺重量，抗病毒，减少对胸腺组织的损伤。AZT组胸腺重量接近于正常对照组(P>0.05)。益艾康小剂量组对胸腺的损害在余组中最小，其次是益艾康大剂量组。益艾康胶囊能够增加胸腺重量，和唐草片组相比没有统计学意义。模型组明显抑制胸腺的大小，而AZT组能明显地改善胸腺指数，接近正常对照组。益艾康胶囊组和唐草片组胸腺指数抑制效果接近，说明益艾康组能有效地降低胸腺指数，显示其增强免疫的作用可能与增强胸腺指数有一定的关系，见表2。

表1　益艾康对小鼠脾重和脾指数的影响 ± s)

与模型组比较：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

表2　益艾康对小鼠胸腺重及胸腺指数的影响 ± s)

3讨论

艾滋病“疫毒”侵犯五脏，首先犯脾。脾为后天之本，气血生化之源，脾脏受损，脾脏运化功能失常，气血生化无源，从而导致五脏气血阴阳俱虚，是贯穿艾滋病基本病机。五脏气血阴阳俱虚，首先卫外不能，易感外邪，其次五脏功能受损，则易产生痰饮水湿等变化。在艾滋病病变过程中，病机错综复杂，并非能以单一病机等加以概括。一般而言，艾滋病无症状期以正虚为主，当出现机会性感染时，则多以邪实为主。

总之，通过对艾滋病中医药治疗的临床观察，艾滋病之“疫毒”与中医学传统意义上的“疫毒”在传播途径、病因性质、病理变化等方面都有显著不同，与传统意义上的“虚劳病”亦有差别。一般而论，艾滋病无症状期，或其症状经治疗而缓解或消失后，其病机为五脏气血阴虚俱虚，尤其是脾肺气虚，即以正虚为主，当临床症状突出时，其病机则多以邪实为主或虚实夹杂，但也有以正虚为主者，如久泻、久喘、长期发热等。我们以上述理论为指导，对河南地区1000多例艾滋病患者进行辨证论治，取得了较好疗效〔12〕。

本实验表明，FLV感染小鼠的脾重大小在一定程度上反映病毒对免疫系统的损害，脾指数是一个直观而可靠的指标。胸腺属中枢免疫器官，是免疫细胞生成、发育，接受杭原刺激成熟的场所。益艾康胶囊能显著增加FLV小鼠的脾指数，胸腺指数，增强动物的免疫力，效果和上市药物唐草片没有差别，但不如抗病毒药物AZT。益艾康胶囊治疗鼠艾滋病的机制有待进一步深入细致地研究。

4参考文献

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〔2014-05-17修回〕

(编辑曹梦园)